国家自然科学基金(30100029)
- 作品数：6 被引量：27H指数：4
- 相关作者：袁中一周政杨晟周丽萍李仁宝更多>>
- 相关机构：中国科学院上海生命科学研究院扬州大学中国科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学化学工程更多>>
- 巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的定点突变及其动力学性质研究被引量：7
- 2003年
- 为了提高青霉素G酰化酶 (PGA)在酸性及有机溶剂中的稳定性 ,以大肠杆菌的晶体结构为模板 ,用软件PMODELING同源模建巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的三维结构并且选择PGA分子表面的合适碱性氨基酸突变为丙氨酸。通过三种不同的快速PCR介导定点突变的方法 ,将位于PGA的α亚基 2 1位、12 8位和β亚基 4 92位、5 12位的赖氨酸残基分别突变为丙氨酸 ,获得四个突变酶Kα0 2 1A、Kα12 8A、Kβ4 92A和Kβ5 12A。其中Kα12 8A和Kβ5 12A保持与野生型相近的酶活力 ,其动力学性质如最适温度、最适pH、Km及Kcat没有明显变化 ;突变酶Kα0 2 1A和Kβ4 92A则丧失了酶活力。上述结果表明 ,PGA分子表面非活性中心的赖氨酸→丙氨酸点突变使突变子的性状发生了分化 ,突变效应呈现出丰富的多样性。该有理设计不但可以提高酶的稳定性 。
- 周丽萍周政袁中一
- 关键词：巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶定点突变动力学性质
- 雷氏普罗威登斯菌青霉素G酰化酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达被引量：4
- 2002年
- 利用PCR和分子克隆技术从雷氏普罗威登斯菌(Providencia rettgeri)(ATCC29944)的基因组DNA中获得一个青霉素G酰化酶(penicillin G acylase,PGA)基因并将其装入表达质粒pET24a。携带有重组质粒pETPGA的Escherichia coli基因工程菌BL21(DE3)/pETPGA实现了PGA的高效表达。对发酵条件的研究表明基因工程菌在24℃、添加5g/L甘油条件下以1.0mmol/L IPTG诱导1.5h酶活力即达到993.4U/L,比野生菌酶活力(15U/L)提高了66倍。
- 周政张爱晖周丽萍杨晟姜涌明袁中一
- 关键词：青霉素G酰化酶基因大肠杆菌克隆
- 巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶的噬菌体展示被引量：1
- 2002年
- 将包含信号肽和琥珀终止密码子的完整巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶基因克隆到噬菌粒pSurfscript.通过引入的 11肽连接青霉素G酰化酶C端与噬菌体外壳蛋白g3p的N端 .以构建的噬菌粒pSurfpga转化具有琥珀突变的大肠杆菌XL1 blue ,以辅助噬菌体M13KO7超感染 ,进行青霉素G酰化酶的表达和在噬菌体表面的展示 .经NIPAB法测活 ,酶的平均活力为 2 .5× 10 -15U cfu .首次在噬菌体表面展示出有活力的巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶 。
- 周政陈美娟李家大杨晟刘曙照袁中一
- 关键词：巨大芽孢杆菌青霉素G酰化酶噬菌体展示
