国家自然科学基金(30100050)
- 作品数：8 被引量：57H指数：7
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- 反义及显性负调节AKT2抑制胶质瘤侵袭和迁移的实验研究被引量：7
- 2004年
- 近来的研究显示AKT激酶家族成员在调节细胞生长、增殖、存活和代谢等方面的信号传导系统中起着极为重要的作用。本文以AKT2为对象,研究反义AKT2 cDNA(antisense AKT2,AS-AKT2)和显性负调节AKT2(dominant negative AKT2,DN-AKT2)cDNA构建体调控恶性胶质瘤侵袭性生长的作用及其机制。方法:利用反义AKT2 cDNA和显性负调节AKT2cDNA构建体转染鼠脑胶质瘤细胞系C6,分别在RNA水平和蛋白水平阻断AKT2通路,将野生型和转染pLXSN空载体的C6细胞作为对照。原位杂交和蛋白印迹鉴定后,Transwell和球体培养法分析侵袭能力,球体培养和划痕实验研究细胞迁移能力,明胶酶谱分析转染前后MMP2/9酶活性变化。结果:原位杂交和蛋白印迹结果表明,C6胶质瘤细胞系在mRNA和蛋白水平均高表达AKT2;转染AS-AKT2后AKT2表达被显著抑制,但转染DN-AKT2后AKT2表达无明显变化。C6细胞转染AKT2构建体后应用体外侵袭和迁移的实验量化分析这种效应后发现:利用Matrigel夹心法和Transwell方法研究发现,C6细胞转染AKT2构建体后侵袭能力下降46%～57%,细胞迁移能力下降23%～42%。明胶酶谱分析发现MMP2/9和pro-MMP9的活性被明显抑制。结论:AKT2可以通过调节MMP2/9活性调控恶性胶质瘤侵袭性生长,因此AKT2可能成为抑制胶质瘤侵袭性生长的新靶标。
- 康春生浦佩玉王广秀李捷
- 关键词：胶质瘤AKT2基因转染迁移
- 人脑胶质瘤表皮生长因子受体表达及与增殖和侵袭相关性的研究被引量：8
- 2004年
- 目的 探讨胶质瘤细胞EGFR基因表达以及和肿瘤细胞增殖及侵袭性生长的相互关系。方法 应用免疫组化方法观察了6例正常脑组织、50例胶质瘤标本和2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR、Ki67、MMP2和MMP9表达。结果 EGFR、Ki67、MMP2和MMP9在胶质瘤中的表达不同,正常脑组织和WHOⅡ级与Ⅲ、Ⅳ级肿瘤和体外细胞系之间的表达差异显著,且四者间的表达水平两两相关。结论 EGFR过表达可以引起Ki67、MMP2和MMP9的过表达,从而促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。
- 康春生浦佩玉李捷于士柱王虎江荣才董伦王广秀
- 关键词：胶质瘤表皮生长因子增殖
- 丝/苏氨酸激酶通路在胶质瘤中的研究进展被引量：3
- 2002年
- 丝/苏氨酸激酶 (AKT)通路处于转导生长因子向细胞核内传递信号的中心环节 ,其功能涉及细胞周期调控、凋亡的启动、血管生成、端粒酶活性和细胞侵袭性等诸多方面。随着研究工作的不断深入 ,AKT通路在胶质瘤的研究中凸现出日益重要的作用。综述AKT功能调控。
- 康春生
- 关键词：AKT信号转导胶质瘤基因治疗
- 人脑胶质瘤AKT2表达与细胞增殖和侵袭性的关系被引量：12
- 2004年
- 康春生浦佩玉李捷于士柱王虎江荣才董伦王广秀
- 关键词：侵袭性激酶活性人脑胶质瘤细胞增殖基质金属蛋白酶2MMP2
- 反义AKT2 cDNA治疗C6胶质瘤的体内外实验研究被引量：7
- 2005年
- 目的研究反义AKT2(antisenseAKT2,ASAKT2)cDNA对鼠脑胶质瘤细胞系C6的生长抑制作用。方法将ASAKT2cDNA构建体转染鼠脑胶质瘤细胞系C6,原位杂交和蛋白印迹鉴定后,应用PCNA阳性率和MTT法检测细胞增殖能力,TUNEL法计算凋亡指数。应用立体定向技术将C6细胞和转染反义AKT2cDNA的C6细胞种植到SD大鼠的右侧尾状核作为对照组和转染组;并对颅内已经形成C6胶质瘤的大鼠进行脂质体包裹的ASAKT2cDNA和空载体治疗;MRI动态监测大鼠颅内肿瘤生长情况,并检测标本AKT2和PCNA表达以及细胞的凋亡情况。结果转染ASAKT2cDNA后C6细胞AKT2表达显著抑制,增殖减慢,凋亡指数增加。反义治疗组和转染组大鼠生存时间明显延长;转染组和治疗组肿瘤标本AKT2表达下降或消失,PCNA阳性率降低,可见大量凋亡细胞,而对照组和空载组标本几乎没有凋亡细胞。结论体内外实验证明ASAKT2cDNA可以抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡,AKT2可作为基因治疗胶质瘤的重要优选靶的。
- 康春生浦佩玉李捷王虎董伦王广秀张云亭全冠民
- 关键词：C6胶质瘤体内外胶质瘤细胞系CDNAMTT法检测转染反义
- 反义AKT2 RNA逆转C6胶质瘤的细胞恶性表型被引量：11
- 2005年
- 目的研究反义AKT2RNA逆转C6鼠脑胶质瘤细胞恶性表型。方法将逆转录病毒LXSN为载体的反义AKT2构建体脂质体复合物直接转染人脑胶质瘤细胞系TJ905和鼠脑胶质瘤细胞系C6,LXSN载体转染组为空载对照。随机筛选阳性克隆并应用蛋白印记和原位杂交鉴定转染。MTT法和TUNEL法评价细胞的增殖活性和凋亡,Transwell法分析侵袭能力,划痕实验研究细胞迁移能力,流式细胞法分析细胞周期,并进行GFAP的表达分析。结果转染ASAKT2cDNA后C6细胞AKT2表达显著抑制。与C6对照组和LXSN空载组比较,转染反义AKT2后C6细胞存活率均明显下降(P<0.01),凋亡指数增加(0.33vs13.67,P<0.01),侵袭能力和细胞迁移能力抑制,诱导细胞出现G0/G1细胞周期阻滞,上调GFAP的表达。结论反义AKT2RNA基因治疗通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭与迁移并使G0/G1细胞周期阻滞逆转其恶性表型,AKT2可作为基因治疗胶质瘤的重要优选靶的。
- 康春生浦佩玉王广秀王虎董伦李捷
- 关键词：细胞恶性表型RNAC6胶质瘤脂质体复合物流式细胞法蛋白印记
- 反义及显性负调节AKT2 RNA对脑胶质瘤细胞增殖抑制作用的体外研究被引量：7
- 2004年
- 背景与目的:表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)下游的丝苏氨酸激酶2(serine/threoninekinase2,AKT2)信号转导通路对肿瘤细胞的生存和凋亡具有十分重要的作用。本文研究了反义AKT2(antisenseAKT2,AS-AKT2)和显性负调节AKT2(dominant-negativeAKT2,DN-AKT2)构建体对人脑胶质瘤细胞系TJ905的增殖和凋亡的调控作用。方法:脂质体介导AKT2构建体转染人脑胶质瘤细胞系TJ905,原位杂交和蛋白印迹法检查AKT2的表达水平,Ki-67标记指数和MTT法检测细胞增殖能力,TUNEL法计算凋亡指数评价肿瘤细胞凋亡的变化。结果:对每种AKT2构建体转染后随机选择3个扩增后进一步分析。原位杂交和蛋白印迹结果表明,转染AS-AKT2后AKT2表达显著抑制,转染DN-AKT2后AKT2表达无明显变化。MTT研究发现:AS-AKT2组和DN-AKT2组的6天细胞生存率分别为(49.30～51.46)%和(50.52～55.23)%,细胞存活率显著低于对照组和空载体组(P<0.001);AS-AKT2组和DN-AKT2组的标记指数(Ki-67labelingindex,Ki-67LI)分别为(57.50～59.33)%和(59.17～61.00)%,明显低于对照组(76.50%)和空载体组(74.83%)(P<0.001);TUNEL法凋亡分析表明:对照组和空载体组几乎没有凋亡细胞,AS-AKT2组(8.33%～8.83%)和DN-AKT2组(7.50%～7.83%)
- 康春生浦佩玉李捷王广秀
- 关键词：胶质瘤AKT2转染增殖
- 人脑胶质瘤EGFRAKT通路活性的研究被引量：10
- 2004年
- 目的 :研究胶质瘤中细胞EGFR和磷酸化AKT(p AKT)的表达以及EGFR与AKT活性的相互关系。方法 :用免疫组化方法观察 6例正常脑组织、5 0例胶质瘤标本和 2个恶性胶质瘤体外细胞系的EGFR表达 ,并应用Westernblot分析p AKT的表达。结果 :EGFR在胶质瘤中的表达阳性率随肿瘤恶性程度增加而增加 ;其蛋白表达水平与病理分级呈正相关。Westernblot分析发现在正常脑组织中p AKT蛋白水平表达极低 ,胶质瘤中p AKT的表达水平均随肿瘤恶性程度增加而明显上升 ,且与胶质瘤病理级别正相关 ;低恶度肿瘤与高恶度肿瘤有明显差异。EGFR的阳性表达率与AKT磷酸化水平显著相关。结论 :EGFR AKT通路的活性状态在胶质瘤的恶性进展具有重要作用 ,该通路可能是胶质瘤恶性表型的责任通路。
- 康春生浦佩玉李捷于士柱王虎江荣才董伦王广秀
- 关键词：脑胶质瘤表皮生长因子受体丝氨酸苏氨酸蛋白激酶磷酸化
