国家自然科学基金(31160239)
- 作品数：6 被引量：16H指数：3
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- 相关机构：石河子大学新疆医科大学附属肿瘤医院更多>>
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- 钙敏感受体介导的人脐静脉内皮细胞钙内流及一氧化氮生成过程中TRPCI与STIM1的相互作用被引量：1
- 2017年
- 目的探讨经典瞬时受体电位通道1（TRPC1）与基质相互作用分子1（STIM1）在钙敏感受体（CaR）介导的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）钙离子（Ca2＋）内流和一氧化氮（NO）生成中的相互作用。
方法取华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科健康孕产妇剖宫产新生儿的新鲜脐带，原代培养HUVEC并传代。将所得HUVEC分别与CaR激动剂精胺[激活钙池操纵性钙通道（SOC）和受体操纵性钙通道（ROC）]、ROC模拟剂12－O－十四烷酰佛波醇－13－乙酸酯（TPA）＋CaR负性变构调节剂Calhex231（阻断SOC阻、激活ROC）、蛋白激酶C（PKC）抑制剂Ro31－8220及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967（激活SOC、阻断ROC）共孵育。采用免疫荧光技术检测HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达，免疫共沉淀法检测TRPC1与STIM1之间的相互作用。取2～3代HUVEC进行分组，将构建的TRPC1、STIM1干扰质粒（shTRPC1、shSTIM1）联合转染HUVEC即shTRPC1＋shSTIM1组 （实验组）、vehicle－shTRPC1＋vehicle－shSTIM1组 （空质粒组）和对照组，将3组细胞分别加入上述4种不同的药物进行干预。采用荧光探针Fura－2/AM检测HUVEC细胞内钙离子浓度（[Ca2＋]i）的变化，NO荧光探针DAF－FM负载方法同步检测HUVEC中NO生成的变化。
结果（1） HUVEC中TRPC1与STIM1的蛋白表达：激光共聚焦显微镜下观察，正常对照组HUVEC中TRPC1和STIM1蛋白的表达呈阳性，二者共定位于胞浆。Calhex231＋TPA＋精胺＋Ca2＋组、Ro31－8220＋精胺＋Ca2＋组和Go6976＋精胺＋Ca2＋组HUVEC中定位于胞浆中的TRPC1、STIM1均减少，二者结合也减少。（2） HUVEC中TRPC1与STIM1的相互作用：Calhex231＋TPA＋精胺＋Ca2＋组、Ro31－8220＋精胺＋Ca2＋组和Go6976＋精胺＋Ca2＋组STIM1/TRPC1和TRPC1/STIM1的相对比值的百分数分别为（25.98±2.17）%和（44.10±4.01）%、（20.85±1.01）%和（46.31±3.47）%、（23.88±2.05）%和（39.65±2.91）%�
- 王腊梅钟华唐娜庞丽娟张春军何芳
- 关键词：内皮细胞脐静脉受体钙敏感一氧化氮
- 钙库活化的钙通道和受体活化的钙通道参与人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导的钙内流和NO生成
- 2013年
- 为了探讨钙库活化的钙通道(store-operated calcium channels,SOC)和受体活化的钙通道(receptor-operated calcium channels,ROC)在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)钙敏感受体(Ca^(2+)-sensing receptor,CaR)介导的钙内流及NO生成中的作用和机制,本实验通过分别或联合使用SOC阻断剂、非选择性的阳离子通道阻断剂、ROC激动剂和ROC阻断剂,采用Fura-2/AM检测细胞内钙离子浓度(intracellular Ca^(2+)concentration,[Ca^(2+)]_i)变化,NO荧光探针DAF-FM DA测定细胞内内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)活性和NO生成的变化。结果显示,与对照组(Spermine+Ca^(2+)组,激活CaR)相比,单独阻断SOC或ROC,HUVEC中[Ca^(2+)]_i、eNOS活性和NO含量均降低(P<0.05),而ROC激动剂可部分取消ROC阻断剂的阻断作用(P<0.05),SOC和ROC联合阻断可进一步加强上述抑制作用(P<0.05)。上述结果表明,在Spermine刺激激活CaR介导[Ca^(2+)]_i、eNOS活性和NO的生成过程中,SOC和ROC以协同的方式参与了CaR介导的钙内流及NO生成。
- 赵慧梁霄钟华张春军何芳
- 关键词：钙敏感受体
- 血管疾病治疗新靶标:STIM1和Orai1被引量：4
- 2013年
- 钙离子（Ca^2＋）是常见的第二信使，不同于其它第二信使，其主要位于细胞外或存储于内质网（endoplasmicreticulum，ER）等细胞器内。静息状态下细胞内游离Ca^2＋浓度（intracellular Ca^2＋ concentra．tion，[Ca^2＋]i）约为细胞外的1／20000，受体激活或生物信号刺激可通过改变[Ca^2＋]i进一步发挥生物放大效应。[Ca^2＋]；
- 赵慧何芳
- 关键词：钙钙通道血管疾病
- NO,Ca^(2+)与高血压被引量：8
- 2012年
- 许多心血管疾病如原发性高血压的发生和发展,均与血管内皮细胞结构的损伤和功能异常有密切关系。而血管内皮细胞的损伤,一方面可以导致一氧化氮(nitric oxide,NO)合成减少及分泌异常,另一方面也使细胞膜对钙离子处理异常。NO和Ca2+可通过各自和两者之间的相互作用对原发性高血压的发生和发展起到重要的调控作用。
- 王静何芳
- 关键词：一氧化氮钙离子高血压
- TRPC1与Orai1的相互作用参与人脐静脉内皮细胞钙敏感受体介导的钙内流及一氧化氮生成
- 2018年
- 本研究旨在探讨Ca^(2+)感受蛋白经典瞬时感受器电位蛋白1(canonical transient receptor potential channel 1,TRPC1)与钙释放激活钙通道调节分子1(calcium release-activated calcium modulator 1,Orai1)的相互作用在人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)钙敏感受体(Ca-sensing receptor,Ca R)介导的Ca^(2+)内流和一氧化氮(NO)生成中的作用。取2~3代HUVECs,单独或联合用Ca R激动剂精胺[Spermine,激活钙库活化的钙通道(store-operated calcium channels,SOC)和受体活化的钙通道(receptor-operated calcium channels,ROC)]、ROC模拟剂12-O-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯(TPA)+Ca R负性变构调节剂Calhex231(阻断SOC,激活ROC)、PKC抑制剂Ro31-8220(激活SOC,阻断ROC)以及经典型PKCs和PKCμ抑制剂Go6967(激活SOC,阻断ROC)处理。用免疫荧光技术检测HUVECs中TRPC1和Orai1的蛋白表达、共定位;用免疫共沉淀法检测TRPC1和Orai1之间的相互作用模式;随后用TRPC1和Orai1干扰质粒联合转染HUVECs,采用荧光探针同时检测HUVECs中[Ca^(2+)]i和NO生成的变化。结果显示,HUVECs中TRPC1和Orai1蛋白表达共定位于胞膜。与Spermine+Ca^(2+)组相比,Calhex231+TPA+Spermine+Ca^(2+)组、Ro31-8220+Spermine+Ca^(2+)组和Go6976+Spermine+Ca^(2+)组HUVECs中定位于胞浆中的TRPC1、Orai1蛋白表达均显著降低,二者的结合也减少。免疫共沉淀结果显示,Calhex231+TPA+Spermine+Ca^(2+)组、Ro31-8220+Spermine+Ca^(2+)组和Go6976+Spermine+Ca^(2+)组TRPC1/Orai1和Orai1/TRPC1相对比值百分数均明显低于对照组以及Spermine+Ca^(2+)组(均P<0.05),表明Orai1和TRPC1相互作用均减弱。联合转染质粒敲低TRPC1和Orai1显著降低Spermine+Ca^(2+)组、Calhex231+TPA+Spermine+Ca^(2+)组、Ro31-8220+Spermine+Ca^(2+)组和Go6976+Spermine+Ca^(2+)组的HUVECs中[Ca^(2+)]i和NO生成。以上结果提示,TRPC1与Orai1以二元复合物的形式激活SOC和ROC,介导Ca^(2+)内流及NO生成。
- 王腊梅唐娜钟华庞丽娟张春军何芳
- 关键词：钙敏感受体一氧化氮
- STIM2、TRPC3在人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流和NO生成中的作用被引量：3
- 2014年
- 目的:研究Ca2+感受蛋白基质相互作用分子2(STIM2)及瞬时型感受器电位3(TRPC3)在人脐静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外钙敏感受体(CaR)介导钙内流和NO生成中的作用。方法:1免疫荧光技术检测HUVEC中STIM2和TRPC3的蛋白表达。2利用转染技术将构建的STIM2干扰质粒(STIM2shRNA)和TRPC3干扰质粒(TRPC3shRNA)分别转染入HUVEC,实时定量RT-PCR和Western blot检测STIM2shRNA、TRPC3shRNA转染后的抑制效率。3取2~5代细胞随机分组:实验组(即精胺+Ca2++shSTIM2-002组和精胺+Ca2++shTRPC3-004组),其余两组分别为对照组(Control组,即精胺+Ca2+组),空质粒组(Vehicle组,即精胺+Ca2++Vehicle组),分别将上述4组细胞与CaR激动剂孵育,各组用荧光探针Fura-2/AM、DAF-FM负载方法同步测定[Ca2+]i和NO生成的变化。结果:1免疫荧光技术检测显示STIM2和TRPC3两者均表达于HUVEC胞浆。2实时定量RT-PCR及Western blot检测结果显示:与Control组相比,shSTIM2-002和shTRPC3-004干扰后,STIM2和TRPC3mRNA的表达均明显降低(抑制率分别为88.2%和74.0%,P<0.05);STIM2和TRPC3蛋白的表达亦明显降低(抑制率分别为79.9%和71.8%)(P<0.05)。3[Ca2+]i△ratio值和NO净荧光强度值的测定结果显示:与精胺+Ca2+组的[Ca2+]i、NO净荧光强度值相比,精胺+Ca2++ShSTIM2-002组、精胺+Ca2++ShTRPC3-004组及精胺+Ca2++Vehicle组均无显著差异(均P>0.05)。结论:STIM2和TRPC3均未单独参与CaR介导的Ca2+内流和NO的生成过程。
- 王静钟华赵慧王腊梅庞丽娟孙志萍何芳
- 关键词：人脐静脉内皮细胞
