国家科技支撑计划(2010BAD04B01)
- 作品数：35 被引量：118H指数：7
- 相关作者：钱爱东单晓枫吴同垒夏咸柱高玉伟更多>>
- 相关机构：吉林农业大学军事医学科学院东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金黑龙江省普通高等学校青年学术骨干支持计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒致病性的影响分析被引量：1
- 2013年
- 目的利用A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,评估PB2 E627K对A/H6N1亚型禽流感病毒的致病性,探究A/H6N1流感病毒的致病性分子基础。方法通过A/H6N1亚型禽流感病毒A/Mallard/San-Jiang/275/2007株反向遗传操作系统和点突变技术拯救病毒rA/H6N1和PB2 E627K位点发生突变的rA/H6N1-627,两株拯救病毒分别以101EID50～106EID50的攻毒剂量人工感染BALB/c小鼠,通过体重变化、死亡率、病毒滴定等方面进行致病性分析。结果成功构建A/H6N1亚型禽流感病毒的反向遗传平台,rA/H6N1的8个基因片段完全源于A/H6N1的基因组,核苷酸序列及生物学特性与A/H6N1完全一致。rA/H6N1能够人工感染BALB/c小鼠,但不致死,对BALB/c小鼠呈现低致病性(MLD50>106.5EID50),病毒在小鼠体内的分布情况及各个脏器中的病毒滴度与A/H6N1保持一致;rA/H6N1-627能感染小鼠,引起小鼠体重下降,但不能引起所有106EID50组小鼠死亡,病毒能在小鼠的肺脏和脑部进行增殖。结论实验结果表明,在H5N1禽流感中发挥重要作用的PB2-E627K位点并非A/H6N1流感病毒的毒力决定因子。A/H6N1流感病毒致病性的分子基础还有待继续研究,该反向遗传操作系统和点突变技术的建立为研究该亚型流感病毒致病机制、传播机制及病毒基因功能奠定了基础,同时也为A/H6N1亚型禽流感病毒新型疫苗的研制开辟了新途径。
- 程凯慧于志君忻悦张坤黄靖岳秀芳丁洁杨霞乔军王铁成杨松涛黄耕赵永坤高玉伟华育平夏咸柱
- 关键词：反向遗传操作生物学特性
- 框镜鲤维氏气单胞菌CY0806株OMPAⅠ基因的克隆及生物信息学分析被引量：7
- 2011年
- 为鉴定维氏气单胞菌(Aeromonas veronii,AV)吉林分离株合适的诊断或免疫用抗原,研究依据GenBank维氏气单胞菌外膜蛋白AⅠ基因(OMPAⅠ)设计引物,通过PCR成功扩增出长度为1 026 bp的基因片段,通过序列分析表明:该基因与维氏气单胞菌AB2902300 OMPAⅠ的同源性为93%,与其他气单胞菌同源性大于80%;同时通过生物信息学软件对其蛋白的分子特征进行了预测,为OMPAⅠ可能做为诊断或免疫用抗原提供了理论依据。
- 单晓枫吴同垒孟庆峰王伟利钱爱东
- 关键词：维氏气单胞菌生物信息学
- 应用IVIAT对动物病原菌体内诱导抗原的筛选研究进展被引量：2
- 2013年
- 病原菌感染宿主动物是一个复杂的动态过程，这一过程需要许多病原菌毒力因子的参与以及毒力基因的相互协调作用。病原菌在体外培养和在宿主体内存在时，由于生存环境不同，病原菌基因表达情况存在很大差异。当病原菌进入宿主体内时为了适应这种变化，
- 康元环王庆奎比尔来西肯·赛都力边宇单晓枫吴同垒钱爱东
- 关键词：动物病原菌抗原宿主动物毒力基因
- 鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定被引量：5
- 2011年
- 选取对新城疫病毒（NDV）易感的鸡胚成纤维细胞（CEF）,Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质（M）蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响。结果表明：提取的细胞总RNA的D260 nm/D280 nm为1.96,甲醛变性琼脂糖凝胶显示RNA未发生降解,质量良好。获得的文库容量为3×106cfu,插入的双链cDNA片段大小为0.3~3 kb,平均长度为1.3 kb左右,文库重组率为100%。该文库的构建为发现和研究与NDV M蛋白相互作用的宿主细胞蛋白提供有效工具。
- 段志强王郁杨朱艳梅开妍胡顺林王晓泉刘秀梵
- 关键词：新城疫病毒鸡胚成纤维细胞酵母双杂交CDNA文库SMART技术
- 弓形虫感染鼠脾细胞microRNA表达谱的检测分析(英文)被引量：2
- 2012年
- MicroRNA(miRNA)是一类约22个核苷酸组成的单链非编码RNA,在分化、发育、肿瘤形成等方面起着重要作用。本研究对弓形虫RH株感染小鼠脾细胞miRNA的表达进行了特异性基因芯片检测分析,并应用荧光定量RT-PCR方法进行验证。结果表明,感染鼠脾细胞中与免疫应答及细胞增殖和肿瘤发生相关的三大类miRNA中,有39种表达下调,同时有36种表达上调。上述结果揭示,弓形虫感染机体后伴随着靶细胞功能性miRNA表达谱的显著改变,这为进一步研究弓形虫感染致病的分子机制开辟了新的方向。
- 金洪涛商立民刘全
- 关键词：弓形虫基因芯片荧光定量RT-PCR
- 框镜鲤维氏气单胞菌的生物学特性被引量：11
- 2012年
- 研究分别测定了维氏气单胞菌CY0806在液体LB中的生长曲线,培养温度、pH值、渗透压对其生长的影响,在不同培养基的生长状况,对小鼠和几种不同的养殖鱼类的致病力情况,以及毒力因子检测。结果显示:菌株CY0806在液体LB培养基中存在二次生长现象;其可以在营养琼脂、RS培养基、TSA培养基、麦康凯培养基、营养肉汤中生长良好;该菌株有较强的耐受性,可以在pH值3～11、培养温度20℃～40℃、氯化钠含量在0%～5%中生长;可以引发小鼠、鲢、团头鲂死亡,引起鲫、乌鳢发病;该菌株具有多种毒力基因:溶血素、气溶素、细胞毒性肠毒素、鞭毛、磷脂酶、丝氨酸蛋白酶、LuxS等。
- 胡天野吴同垒孟庆峰边宇单晓枫康元环王伟利钱爱东
- 关键词：维氏气单胞菌生物学特性毒力因子
- 宠物弓形虫的感染及其防控被引量：7
- 2010年
- 弓形虫病是一种世界性分布的人兽共患寄生虫病,对人类,尤其是妇女、儿童危害很大,估计全世界有1/3人受到该病的威胁。孕妇感染弓形虫后导致早产、流产、胎儿发育畸形;弓形虫是免疫功能低下患者的主要死亡原因之一。犬、猫是弓形虫的中间宿主和终末宿主,是人类感染弓形虫的主要来源。随着我国经济的迅速发展和人民生活水平的不断提高,城市中饲养犬、猫作为宠物的人越来越多,人、宠物间的亲密接触增加了弓形虫病传播给人的机会。加强对宠物犬、猫弓形虫病的研究及防控势在必行。本文就弓形虫的危害、宠物犬猫弓形虫感染及其防控措施作以综述。
- 刘全金洪涛
- 关键词：宠物弓形虫病
- 框镜鲤维氏气单胞菌CY0806株鞭毛flaA基因的克隆与生物信息学分析被引量：1
- 2012年
- 以框镜鲤Cyprinus carpio维氏气单胞菌Aeromonas veronii CY0806株细菌基因组DNA为模板,经PCR扩增,获得flaA基因,将其克隆并测序,测序结果与气单胞菌属的不同菌株进行相似性分析,并对flaA基因编码蛋白质进行生物信息学分析.结果显示:获得框镜鲤维氏气单胞菌鞭毛flaA基因,长915 bp,编码304个氨基酸,系统进化树分析,其与其他维氏气单胞菌flaA基因处于同一分支,相关生物信息学分析显示,flaA基因编码的蛋白质相对分子质量32 098.66,等电点5.57,半衰期30 h,不稳定系数为32.31,脂肪系数81.05,不存在信号肽和跨膜区,二级结构预测:flaA基因以α螺旋和β折叠为主,同时,以同源建模法预测了flaA基因编码蛋白的三维立体结构.
- 单晓枫吴同垒孟庆峰王伟利钱爱东
- 关键词：维氏气单胞菌生物信息学
- Xi River virus,a new bat reovirus isolated in southern China
- Nelson Bay orthoreovirus(NBV) is a species within the genus Orthoreovirus,family Reoviridae,containing 4, poss...
- 朱妍
- 关键词：BATREOVIRUS
- 文献传递
- 狂犬病病毒磷蛋白在杆状病毒系统的表达及鉴定被引量：1
- 2012年
- 为了建立狂犬病毒磷蛋白(phosphoprotein,P)的体外表达系统,本研究将RT-PCR扩增的狂犬病病毒ERA株P蛋白基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA,构建重组质粒pFastBacHTA-P,并转染昆虫细胞Sf9包装形成重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示重组质粒pFastBacHTA-P转染的Sf9细胞中出现了分子量约为42 kDa的蛋白条带,Western blot证实分子量约为42 kDa的蛋白能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)分析进一步显示Sf9细胞表达的P蛋白与抗P蛋白单克隆抗体能特异性结合。这些实验证明,狂犬病病毒P蛋白不仅在Sf9细胞中获得表达,而且具有良好的免疫反应性。狂犬病病毒P蛋白杆状病毒表达体系的建立,为蛋白结构的解析和诊断试剂的研制奠定了基础。
- 许运斌徐洁萍张金阳昝洁阮系真周继勇
- 关键词：狂犬病病毒杆状病毒表达系统
