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国家高技术研究发展计划(2006AA02A229): 作品数：10 被引量：27H指数：3; 相关作者：周玲曾毅王湛杜海军莫武宁更多>>; 相关机构：中国疾病预防控制中心广西医科大学第一附属医院中国疾病预防控制中心病毒更多>>; 发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划广西壮族自治区自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>

Ad5F35-LMP2重组腺病毒免疫效果的研究被引量：2: 2007年; 目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2），免疫恒河猴的特异性细胞和体液免疫的效果。方法分别使用高剂量（1．5×10^10TCID50/只）、中剂量（1．5×10^9TCID50/只）、低剂量（1．5×10^8TCID50/只）Ad5F35-LMP2重组腺病毒，同时设对照组（PBS4．0 ml／只）。肌内注射免疫恒河猴，每个月一次，共免疫3次，第0、4、8、12周时使用Elispot方法检测猴外周血EBV—LMP2细胞毒性T细胞应答，同时应用免疫酶方法检测血清中LMP2抗体。结果3个剂量Ad5F35-LMP2腺病毒免疫恒河猴均可以诱导出有效的细胞免疫应答及一定的抗体应答，免疫应答水平的高低与病毒剂量的高低有一定的关系，较高剂量产生的细胞及体液免疫应答水平比低剂量的高。结论Ad5F35-LMP2非复制型重组腺病毒疫苗可以有效的诱导恒河猴产生EBV—LMP2特异性细胞和体液免疫反应。; 莫武宁周玲吴小兵王湛唐安洲黄光武余双庆王琦叶树清杜海军曾毅; 关键词：腺病毒疱疹病毒4型膜蛋白质类恒河猴

携带EBV-LMP2基因的DNA疫苗、腺相关病毒疫苗和腺病毒疫苗免疫小鼠的特异性细胞免疫应答被引量：7: 2009年; 细胞免疫应答，尤其是CD3^＋CD8^＋细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphocyte，CTL），在控制病毒感染中扮演着重要角色，鼻咽癌（nasopharyngenl carcinoma，NPC）与EB病毒（epstein-barr virus，EBV）持续感染密切相关，在鼻咽癌疫苗的研究中，人们将研究重点放在增强特异性抗病毒CTL应答上，本研究单独或联合使用表达EB病毒潜伏膜蛋白抗原2（epstein-barr virus latent membrane protein 2, EBV-LMP2）的DNA疫苗、腺相关病毒（adeno-associated virus，AAV）疫苗、非复制5型腺病毒疫苗（Ad5），分别于0，2，4周肌肉注射免疫4-6周龄的雌性Balb／C小鼠，IFN-γ，免疫斑点法检测EBV—LMP2特异性细胞免疫应答水平，疫苗诱导的特异性细胞应答水平与疫苗的免疫策略有关，其中，使用3种载体疫苗联合免疫的效果最好，其次则是先使用DNA疫苗免疫两次，再用腺病毒疫苗加强免疫一次的联合免疫方法，DNA疫苗和AAV疫苗单独免疫能够诱导出特异性的CTL，但与联合免疫相比诱导的应答水平很低，结果表明，使用DNA，AAV和腺病毒载体疫苗联合免疫，能够更好地诱导机体产生特异性细胞免疫应答，为鼻咽癌的防治提供了很好的疫苗策略。; 杨松梅王湛周玲杜海军莫武宁曾毅; 关键词：疫苗重组腺病毒疫苗联合免疫特异性细胞免疫应答

Specific cellular immune responses in mice immunized with DNA,adeno-associated virus and adenoviral vaccines of Epstein-Barr virus-LMP2 alone or in combination被引量：11: 2011年; Cellular immune responses,particularly those associated with CD3+CD8+ cytotoxic T lymphocytes (CTL),are critical factors in controlling viral infection.Nasopharyngeal carcinoma (NPC) is closely associated with persistent Epstein-Barr virus (EBV) infection.NPC vaccine studies have focused on enhancing specific antiviral CTL responses.In this study,three vaccines capable of expressing the EBV-latent membrane protein 2 (LMP2) (a DNA vector,an adeno-associated virus (AAV) vector,and a replication-defective adenovirus serotype 5 (Ad5) vector) were respectively used to immunize female Balb/c mice (4-6 weeks old) at weeks 0,2 and 4,either alone or in combination.Our results suggest that combined immunization with DNA,AAV,and adenovirus vector vaccines induced specific cellular immunity more effectively than any of these vectors alone or a combination of two of the three,constituting a sound vaccine strategy for the prevention and treatment of NPC.; WANG ZhanYANG SongMeiZHOU LingDU HaiJunMO WuNingZENG Yi

Ad5F35-LMP2重组腺病毒修饰DC体外诱导特异性T细胞免疫的研究被引量：1: 2008年; 目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2）修饰的DC能否在体外诱导LMP2特异性细胞毒性T淋巴细胞免疫。方法人外周血单个核细胞在细胞因子诱导下生成树突状细胞，Ad5F35-LMP2感染树突状细胞后激发同源的T细胞，MTT法检测其对T细胞的增殖作用，及激活的特异性CTL对表达LMP2的人CNE-2细胞的特异性杀伤效应。结果Ad5F35-LMP2能有效感染树突状细胞，其激活的特异性CTL对CNE-2细胞有特异性杀伤活性，与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．01）。结论重组腺病毒Ad5F35-LMP2感染的DC可以有效的诱导产生EBV-LMP2特异性细胞毒效应。; 莫武宁周玲王湛唐安洲黄光武曾毅; 关键词：腺病毒科疱疹病毒4型膜蛋白质类

EB病毒LMP2-LMP1Δ融合基因免疫效果的初步研究被引量：7: 2011年; 目的构建EBV LMP2-LMP1Δ融合基因,初步观察融合基因体内诱导EBV特异性细胞免疫应答的效果。方法 (1)应用PCR方法构建包含EBV-LMP2全长和去除致癌基因的EBV-LMP1Δ融合基因,并将融合基因插入到pcDNA3.1(+)-his真核表达载体中,构建重组表达质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ,Western blot和免疫荧光方法检测融合蛋白的表达。(2)使用pcDNA-LMP2-LMP1Δ及携带LMP1Δ和LMP2基因的重组腺病毒单独或联合免疫Balb/c小鼠,末次免疫1周后应用IFN-γELISPOT方法检测小鼠脾淋巴细胞中EBV特异性CTL水平。结果 (1)真核表达质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ能够在293细胞中表达LMP2-LMP1Δ融合蛋白,融合蛋白分子量大小正确,具有免疫原性。(2)重组质粒pcDNA-LMP2-LMP1Δ免疫小鼠能够诱导出EBV特异性的CTL,但诱导的CTL水平很低,1×106小鼠脾淋巴细胞中平均斑点数只有12个,远远低于LMP1Δ、LMP2重组腺病毒平均495个斑点数的免疫结果。但使用pcDNA-LMP2-LMP1Δ和重组腺病毒联合免疫,与只使用重组腺病毒相比,诱导的EBV特异性CTL水平能够显著提高,1×106小鼠脾淋巴细胞中平均斑点数可达1 001个(P<0.01)。结论构建的EBV LMP2-LMP1Δ融合基因能够有效表达LMP2-LMP1Δ融合蛋白,并能够在小鼠体内诱导出EBV特异性的CTL反应,与重组腺病毒联合使用,可以提高特异性CTL应答水平。; 王湛尉秀霞周玲杜海军叶树清曾毅; 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白1 潜伏膜蛋白2 融合基因

不同时间EBV-LMP2重组腺病毒体内细胞免疫效果研究: 2010年; 目的观察携带EB病毒(EBV)潜伏膜抗原2基因(LMP2)的重组5型腺病毒(Ad-LMP2)免疫Balb/C小鼠后,不同时间点的免疫反应。方法每只小鼠通过肌内注射的方式免疫2×109VP的Ad-LMP2重组病毒颗粒,使用γ干扰素酶联免疫斑点检测方法(IFN-γELISPOT),分别于免疫后1、2、3、4、5周检测小鼠脾淋巴细胞中,LMP2特异性释放IFN-γ的细胞数。观察不同时间点特异性CTL反应强度的变化。结果 Ad-LMP2免疫小鼠1周时,就已经产生明显针对LMP2的特异性CTL,1×106个小鼠脾淋巴细胞中,可以检测到约800个特异性释放IFN-γ的细胞。随着时间的延长,与1周时的结果相比CTL水平2、3、4周均没有明显改变,5周时稍有下降(P<0.05)。结论 Ad-LMP2免疫Balb/C小鼠,1周内就能够诱导出LMP2特异性CTL,产生的CTL能够稳定存在。; 王湛周玲杜海军叶树青尉秀霞曾毅; 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白2 重组腺病毒免疫时间

Ad5F35-LMP2重组腺病毒修饰DC体内特异性抗瘤作用的研究: 2010年; 目的了解含有EB病毒潜伏膜蛋白2的非复制型重组腺病毒（Ad5F35-LMP2）修饰的DC能否在体内抑制肿瘤细胞生长.方法人外周血单个核细胞在细胞因子IL-4、GM-CSF和TNF-a诱导下生成树突状细胞.将人的外周血单个核细胞移植入实验组SCID小鼠体内2次,再分别经两次DC与Ad5F35-LMP2-DC免疫SCID小鼠,然后用1×10^6的CNE-2肿瘤细胞接种SCID小鼠皮下,观察肿瘤生长情况.结果 Ad5F35-LMP2-DC组肿瘤的潜伏期明显延长,对照组和DC组小鼠1周左右就出现了肿瘤,而Ad5F35-LMP2-DC组则直到2周左右才出现肿瘤;且肿瘤体积最小,重量最轻,与DC组比Ad5F35-LMP2-DC疫苗组的肿瘤抑制率为64.75%.结论 Ad5F35-LMP2重组腺病毒疫苗修饰的DC在体内可以有效的抑制NPC肿瘤细胞CNE-2生长.; 莫武宁王湛周玲詹少兵唐安洲黄光武曾毅; 关键词：腺病毒科病毒包膜蛋白质类

EBV-LMP2重组腺病毒体内细胞免疫效果及分布研究被引量：1: 2010年; 背景与目的 EB病毒(EBV)潜伏膜抗原2是预防和治疗EBV相关肿瘤的良好靶抗原,本研究以食蟹猴为研究系统,观察携带EBV潜伏膜抗原2基因(LMP2)的重组5型腺病毒(Ad-LMP2)在动物体内引起的细胞免疫应答及病毒载体分布。方法分别使用低、中、高不同剂量的Ad-LMP2,于0周、4周以肌内多点注射的方式免疫食蟹猴,应用流式细胞仪检测动物外周血CD3、CD4、CD8阳性T细胞的比值;γ干扰素酶联免疫斑点法(IFN-γ-ELISPOT法)检测Ad-LMP2诱导的LMP2特异性CTL;RT-PCR方法检测首次和末次注射后,不同时间点外周血中重组病毒的载量,以及8周后,脑、心、肺、肝、脾、肾、睾丸、卵巢和注射局部肌肉的基因分布情况。结果与同期对照组或免疫前比较,Ad-LMP2免疫的动物外周血T淋巴细胞亚群未见差异(P>0.05);低、中、高不同剂量都能够诱导产生LMP2特异性CTL,其中,中、高剂量组反应水平较高;Ad-LMP2肌内注射后15min～1h在血中浓度最高,2～8h后分布到其他脏器。1d后,病毒主要分布在注射局部的肌肉组织中,而在脑、心、肺、肝、脾、肾、卵巢或睾丸等组织内,未检测到重组病毒。结论 Ad-LMP2在食蟹猴体内能够诱导产生LMP2特异性CTL,对T淋巴细胞亚群不产生影响,重组病毒只分布在注射局部肌肉,没有潜在危险。; 王湛孙云霞周玲吴伟娜李洪贞杜海军左从林曾毅; 关键词：EB病毒潜伏膜蛋白2 重组腺病毒细胞免疫

鼻咽癌的临床免疫治疗: 2009年; 鼻咽癌（NPC）是我国南方一些省（自治区）的常见恶性肿瘤之一。在广东、广西发病率可高达50／10万，在两广一些地区NPC占肿瘤病死率的第一或第二位，是我国重点防治的十大肿瘤之一。放射治疗是鼻咽癌治疗的基本方法，国内外文献报道鼻咽癌5年生存率为50％—60％。中晚期鼻咽癌治疗失败原因多是局部复发和远处转移。; 杜海军周玲曾毅; 关键词：中晚期鼻咽癌恶性肿瘤远处转移局部复发

生物素-链霉亲和素放大免疫酶法在鼻咽癌血清学检测中的应用: 2009年; [目的]探讨生物素—链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)应用于鼻咽癌(NPC)IgA/EA血清学早期筛查效果,提高鼻咽癌早期诊断效率。[方法]免疫酶法(IE)检测广西鼻咽癌示范基地筛查血清中IgA/VCA(针对EBV壳抗原VCA的IgA型抗体),IgA/VCA阳性者再用IE法及生物素—链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)分别检测血清IgA/EA(针对EBV早期抗原EA的IgA型抗体),以临床病理检查结果为确诊标准,t检验及χ2检验统计分析改进前后两种方法在鼻咽癌血清学早期检测方面的差异。[结果]IE法检测IgA/VCA阳性血清388例,IE法检测IgA/EA阳性率3.6%(14例),BSA法检测IgA/EA阳性率12.9%(50例),BSA法检出阳性率显著高于IE法(χ2=22.070,P<0.001)。在两种方法检测的血清IgA/EA均阳性的样品中,IgA/EA检测滴度的几何平均值(GMT)分别为1:17.04和1:51.87,BSA法显著高于IE法(t=2.804,P<0.05)。进一步的病理检测确诊鼻咽癌患者16例,BSA法提高了NPC检测灵敏度(χ2=16.347,P<0.001)。[结论]用生物素—链霉亲和素放大免疫酶法(BSA)检测血清EBV相关抗体特异性较高,并且可以提高鼻咽癌血清学早期检测的灵敏度,为在基层开展更有效的流行病学筛查提供了可行的方法。; 詹少兵麦稚平谭珍连钟建明叶树清周玲廖建曾毅; 关键词：EBV 鼻咽肿瘤生物素

国家高技术研究发展计划(2006AA02A229)

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