国家自然科学基金(81071468) 作品数:9 被引量:20 H指数:3 相关作者: 郭常安 阎作勤 潘建锋 范文帅 陈晨 更多>> 相关机构: 复旦大学 上海交通大学附属第六人民医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 上海市自然科学基金 国家教育部博士点基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
CD105-生物素-亲和素促进滑膜干细胞黏附和筛选 2015年 目的 观察CD105-生物素-亲和素系统促进滑膜间充质干细胞的黏附和CD105阳性细胞的筛选,探讨软骨形成的效果.方法 酶消化获取滑膜干细胞,应用流式细胞仪检测细胞表面CD29、CD34、CD44、CD45、CD90、CD105的表达.分3组(A:未处理+干细胞;B:亲和素化+生物素化干细胞;C:亲和素化+ CD105-生物素化干细胞),通过细胞吸光度值和显微镜下随机视野计数分别测定不同时间点细胞黏附数量;免疫荧光检测CD105阳性细胞的筛选.成软骨诱导3周后,通过苏木素-伊红(HE)染色、阿尔新蓝染色和Ⅱ型胶原免疫荧光观察3组软骨形成.结果 滑膜干细胞贴壁生长,呈星形或梭形;CD29、CD44、CD90阳性表达,CD34、CD45阴性表达,CD105阳性率约为42%.C组和B组早期黏附细胞数量增加,与A组比较在1、2h差异有统计学意义(P<0.05),B组虽然多于C组,但差异无统计学意义(P>0.05).免疫荧光显示C组黏附的CD105阳性细胞在1、2h均明显高于B组和A组.软骨诱导培养后,3组均合成了蛋白聚糖和Ⅱ型胶原,但是C组软骨特异性细胞外基质最多.结论 CD105-生物素-亲和素系统既增加了滑膜干细胞的黏附,又筛选了CD105阳性细胞,更好的促进了软骨形成. 范文帅 陈晨 李朔 潘建锋 阎作勤 郭常安关键词:CD105 生物素-亲和素 滑膜间充质干细胞 软骨组织工程 力学因素对间充质干细胞成软骨的研究进展 被引量:1 2014年 关节软骨的磨损是临床上常见的疾病,但是软骨缺乏自身修复能力,以间充质干细胞为种子细胞构建软骨组织工程为软骨的修复带来了新希望。与生物化学因素一样,力学因素也影响干细胞的增殖和向软骨细胞的分化,并在维持软骨的形态和功能上起到重要作用。 范文帅 郭常安关键词:间充质干细胞 成软骨 细胞构建 软骨组织工程 关节软骨 蛋白聚糖 CD105^+滑膜间充质干细胞成软骨能力 被引量:2 2015年 目的 分选CD105^+滑膜间充质干细胞(SMSCs),观察其增殖和向软骨细胞分化的能力.方法 酶消化滑膜组织分离SMSCs,流式细胞仪分选CD105^+ SMSCs;第3、7天采用WST-1测定SMSCs的增殖能力;软骨诱导21 d进行免疫组织化学染色,检测蛋白聚糖和Ⅱ型胶原.结果 酶消化获取的SMSCs为星形或梭形,分选后SMSCs形态无明显变化.免疫荧光显示分选组CD105^+细胞较未分选组明显增多.WST-1增殖检测提示两组细胞吸光度值3 d(0.376±0.012、0.329±0.012)、7 d(0.581±0.009、0.524±0.007)比较差异有统计学意义(P<0.05).成软骨诱导培养21 d后,分选组甲苯胺蓝和Ⅱ型胶原染色均较未分选组多且深,说明CD105^+ SMSCs合成更多软骨细胞外基质.结论 CD105^+ SMSCs具有较强的增殖和成软骨能力,CD105^+ SMSCs可成为软骨组织工程良好的种子细胞. 范文帅 刘嘉 潘建锋 陈晨 阎作勤 郭常安关键词:滑膜间充质干细胞 CD105 软骨组织工程 关节软骨原位再生研究进展 被引量:4 2012年 临床上关节软骨缺损难以自我修复,治疗难度大。传统软骨移植、组织工程技术等方法在一定程度上实现了软骨修复,但存在治疗过程繁琐、安全性不高、疗效不明显等缺点。软骨原位再生技术通过在软骨缺损处放置支架,提供软骨再生所需空间并缓慢释放生物诱导因子,达到促进软骨再生的目的。该文就关节软骨原位再生技术的演变、支架构建、自我作用激活及今后发展动态作一综述。 潘建锋 郭常安 阎作勤关键词:软骨 壳聚糖-明胶支架/滑膜干细胞的相容性 被引量:7 2011年 目的检测壳聚糖-明胶支架与人滑膜干细胞(SMSCs)的相容性。方法接种滑膜干细胞于壳聚糖-明胶支架上,于第3、7和10天进行扫描电镜观察和噻唑蓝(MTT)分析。结果扫描电镜显示支架上有大量滑膜干细胞生长,且细胞形态与对照组无明显差异,MTr分析显示支架组的A值关系为10d(1.43±0.11)≥7d(1.35±0.08)〉3d(0.43±0.08),且第7、10天组的A值明显大于同期对照组(0.64±0.15、0.59±0.13)(P〈0.05)。结论壳聚糖-明胶支架与滑膜干细胞的相容性良好。 鲁小云 郭常安 阎作勤关键词:关节软骨 单抗CD44-生物素-亲和素系统提高软骨细胞与支架黏附能力的研究 被引量:4 2012年 目的观察单抗CD44-生物素(Biotin)-亲和素(Avidin)绑定系统在构建组织工程软骨中能否提高软骨细胞与支架的黏附能力。方法分别制备软骨细胞二维和三维培养体系,分3组:A:壳聚糖+软骨细胞;B:生物素+亲和素化壳聚糖+软骨细胞;C:生物素化单抗CD44+亲和素化壳聚糖+软骨细胞。分别测定细胞展平面积、细胞接种脱落率、细胞增殖率,逆转录-聚合酶链反应(1iT-PCR)法检测Ⅱ型胶原(ColII)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)、sox9的mRNA表达,组织学切片观察壳聚糖支架内细胞黏附生长情况。结果细胞展平面积、细胞增殖率及ColII、aggrecan、sox9的mRNA表达量皆为:C组〉B组〉A组(P〈0.05)。细胞接种脱落率:A组为c组的3.71倍、为B组的2.17倍,而B组为C组的1.71倍,A组〉B组〉C组(P〈0.05)。组织切片显示细胞在支架内C组增殖旺盛、胞外基质表达较丰富,A组增殖较弱、胞外基质表达较弱,B组介于C与A组间。结论单抗CD44.Biotin.Avidin绑定系统能比Biotin.Avidin绑定系统更显著的提高软骨细胞与支架的黏附能力,促进组织工程软骨种子细胞的增殖和软骨细胞表型的表达。 林红 周健 沈龙祥 阮玉辉 戴文达 郭常安 陈峥嵘关键词:生物素 软骨细胞 单克隆抗体CD44-生物素-亲和素技术构建组织工程软骨修复猪膝关节负重区软骨缺损 2014年 目的 观察单克隆抗体CD44-生物素(Biotin)-亲和素(Avidin)绑定(CBA)技术,在体外构建的组织工程软骨移植修复猪膝关节负重区软骨缺损的效果.方法 分3组构建组织工程软骨:常规组:壳聚糖三维支架+软骨细胞;Biotin-Avidin绑定(BA)技术组:生物素+亲和素化壳聚糖三维支架+软骨细胞;CBA技术组:生物素化单抗CD44+亲和素化壳聚糖三维支架+软骨细胞.分4组修复猪膝关节负重区软骨全层缺损:A组植入常规组织工程软骨;B组植入BA技术构建的组织工程软骨;C组植入CBA技术构建的组织工程软骨;D组植入自体软骨.12周后取标本行大体观察并行Moran评分;生物力学方法评估标本弹性模量和刚度;Western blot检测新生软骨组织内的Ⅱ型胶原(colⅡ)、聚集蛋白聚糖(aggrecan)目的蛋白含量;对标本行苏木素-伊红染色、甲苯胺蓝染色并行Wakitani评分.结果 Moran大体评分,D组为(4.48 ±0.23)分,与C组差异无统计学意义(P>0.05),但优于A、B两组(P<0.05);D组弹性模量为(20.61 ±±2.02) mPa,刚度为(72.28±6.16) N/mm、colⅡ及aggreean目的蛋白含量比值分别为1.59 ±0.14和1.44±0.13,均优于其他组(P<0.05);组织学染色及Wakitani评分均显示D组修复效果较好.结论 BA绑定技术比常规接种方法所构建组织工程软骨对猪膝关节负重区软骨缺损修复效果好,但是比较而言,单克隆抗体CBA绑定技术所构建组织工程软骨修复效果更佳,虽仍未达到自体移植修复水平. 林红 周健 王会仁 沈龙祥 郭常安 董健 陈峥嵘关键词:生物素 软骨缺损 滑膜间充质干细胞在五种不同趋化因素作用下迁移的研究 被引量:3 2013年 目的观察血清、转化生长因子(TGF)-β3、血小板衍生生长闪子(PDGF)-AB、骨形态发生蛋白(BMP)-2、成纤维细胞生长因子(FGF)对兔滑膜间充质干细胞(SMSCs)迁移的影响。方法选取含浓度0.1%、0.5%、1.0%、2.0%、5.0%、10.0%、20.0%血清以及含50μg/LTGF-β3、PDGF—AB、BMP-2、FGF的低糖DMEM作用于兔SMSCs,Transwell小室检测其迁移能力。结果 血清、TGF-β3、PDGF—AB、BMP-2、FGF均可趋化兔SMSCs迁移,血清浓度为5.0%时趋化作用较其他浓度组明显,每×100倍视野下迁移细胞数为(169.00±21.74)个,4种因子中PDGF—AB趋化作用较TGF—β3、BMP-2、FGF明显(219.83±11.29比84.50±10.33、146.67±17.91、99.37±12.27)。结论兔SMSCs可在TGF-β3、PDGF—AB、BMP-2、FGF作用下迁移,其中PDGF—AB趋化最明显,可用于促进SMSCs迁移归巢,进行软骨原位冉生的修复研究。 潘建锋 郭常安 沈剑锋 刘嘉 阎作勤关键词:滑膜间充质干细胞 细胞因子 趋化 迁移 第4代陶瓷界面在全髋关节置换(THA)中的应用和初期临床结果 2012年 目的总结第4代陶瓷界面在全髋关节置换术(total hip arthroplasty,THA)中的应用和临床随访(平均10个月)的结果。方法对2010年4月至2011年12月期间复旦大学附属中山医院骨科收治的35例不同髋关节疾病患者应用第4代Delta大直径陶瓷-陶瓷股骨头假体系统行人工THA,采用Harris评分系统进行术前、术后髋关节功能评估,总结临床应用经验和术后并发症等情况。结果对35例实施第4代陶瓷界面THA手术的患者进行疗效随访,21例获随访,男8例,女13例,平均年龄(55.3±21.4)岁(28~77岁),平均随访时间(9.7±7.2)个月(2~22个月),平均术后Harris髋关节评分87.9分。结论在THA中应用第4代陶瓷界面平均10个月以上的早期临床疗效满意。 陈晨 阎作勤 姚振均 夏庆 郭常安关键词:临床疗效