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国家高技术研究发展计划(2004AA243060)

作品数：5 被引量：23H指数：2
相关作者：吴婷婷丁炜东曹丽萍李建林张志伟更多>>
相关机构：中国水产科学研究院淡水渔业研究中心南京农业大学莱阳农学院更多>>
发文基金：国家高技术研究发展计划国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
相关领域：农业科学生物学更多>>

文献类型

  • 5篇中文期刊文章

领域

  • 4篇农业科学
  • 1篇生物学

主题

  • 5篇罗非鱼
  • 5篇奥利亚罗非鱼
  • 3篇原核表达
  • 3篇释放激素
  • 3篇激素
  • 3篇促性腺激素
  • 3篇促性腺激素释...
  • 3篇促性腺激素释...
  • 2篇克隆
  • 2篇基因克隆
  • 2篇CDNA
  • 1篇原核
  • 1篇远缘
  • 1篇远缘杂交
  • 1篇杂交
  • 1篇杂交子代
  • 1篇子代
  • 1篇相关肽
  • 1篇免疫
  • 1篇免疫原性

机构

  • 5篇中国水产科学...
  • 2篇南京农业大学
  • 1篇莱阳农学院

作者

  • 4篇吴婷婷
  • 3篇曹丽萍
  • 3篇丁炜东
  • 2篇李建林
  • 1篇俞菊华
  • 1篇杨弘
  • 1篇王金龙
  • 1篇曹谨玲
  • 1篇王光花
  • 1篇张志伟

传媒

  • 2篇中国水产科学
  • 1篇上海水产大学...
  • 1篇生物工程学报
  • 1篇大连水产学院...

年份

  • 2篇2007
  • 3篇2006
共 5 条 记 录，以下是 1-5
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排序方式：
奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素及相关肽基因的克隆与表达被引量：1
2006年
采用RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约386 bp的目的序列GnRH/GAP,先将其克隆到T载体上,通过酶切鉴定、序列测定分析,确认序列的正确性后,将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH/GAP,再转化到大肠杆菌TB1中,经IPTG诱导后成功表达出与预期大小相符的相对分子量约56 000的融合蛋白。
丁炜东曹丽萍李建林吴婷婷
关键词：奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素基因克隆原核表达
奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的原核表达及其免疫原性研究被引量：3
2006年
促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasinghormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。为研究GnRH对奥利亚罗非鱼性腺发育的作用,构建了GnRHcDNA的原核表达载体并进行融合表达。利用RT-PCR方法从丘脑中扩增出长约400bp的目的序列GnRH基因,克隆至T载体中,经酶切鉴定和序列测定分析确认序列的正确性后将此片段克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,并在大肠杆菌TB1中获得了高表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的41.6%。菌体经溶菌酶裂解,制备无细胞抽提液,Amylose-sepharose柱层析后得到分子量为56kD单一条带的目的蛋白。目的蛋白经FactorXa酶切裂解,Amylose-sepharose过柱纯化后得到纯化的GnRH前体蛋白。以80μg/只的剂量4次免疫ICR小鼠,免疫小鼠可以检测到特异性针对GnRH前体蛋白的血清抗体应答,免疫组抗体水平显著高于空白组(P<0.05),且加强免疫第5周后抗体效价为0.707±0.320,达到高峰值,说明表达产物具有免疫原性,可以刺激机体产生免疫应答。
丁炜东曹丽萍吴婷婷
关键词：奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素原核表达免疫原性
奥利亚罗非鱼DMT基因克隆与序列分析被引量：2
2007年
利用RT-PCR和cDNA末端快速扩增法(RACE)分离、克隆奥利亚罗非鱼(Oreochromis aurea)睾丸DMT(DM-do-main gene in testis)基因,并进行序列测定与分析。结果表明,该基因cDNA序列全长1 260 bp,包括74 bp 5’非翻译区,879 bp阅读框以及含poly(A)信号AATAAA的307 bp 3’非翻译区,阅读框共编码292个氨基酸。序列同源性分析表明,不同进化地位动物的DMRT1基因DM域编码序列存在高度同源性,显示DMRT1基因在系统进化上高度保守。生物信息学分析表明:DMT基因编码蛋白无信号肽,无跨膜区域,有多个蛋白激酶C、酪蛋白激酶Ⅱ磷酸化位点和N-糖基化位点,推测其可能在细胞信号传导中发挥作用,且其生物活性可能接受信号途中多种信号的调控。该基因的成功克隆及生物信息学分析不仅为DMRT1基因的分子进化和相似性比较研究提供了新的材料,而且对进一步研究其编码蛋白的结构与功能以及其在鱼类性别调控中的作用具有重要意义。[中国水产科学,2007,14(1):23-31]
曹谨玲俞菊华李建林王光花吴婷婷
关键词：奥利亚罗非鱼DMT克隆
奥利亚罗非鱼(♀)×鳜(♂)远缘杂交子代的遗传结构被引量：16
2007年
采用RAPD和测序的方法,对奥利亚罗非鱼(Oreochromis aurea)(♀)与鳜(Siniperca chuatsi)(♂)的杂交子代组合与父母本的遗传关系进行研究,探讨远缘杂交双亲对子代遗传结构的影响。其中,杂交子代包括A、B、C 3个组合,A组合为奥利亚罗非鱼与鳜杂交的F1代;因A组合无雄性,将其与奥利亚罗非鱼(母本)的雄性回交,所得子代为B组合;C组合为B组合间兄妹交的自交子代。结果表明,奥利亚罗非鱼、鳜、A、B和C组合的多态位点比例分别为19.32%、15.30%、41.33%、29.80%和32.31%。奥利亚罗非鱼和鳜间的遗传相似性系数和遗传距离分别为0.288 5和1.243 2。A、B、C组合与父本的遗传相似性系数分别为0.343 4、0.293 7、0.328 7,遗传距离分别为1.068 9、1.225 1、1.112 5;与母本的遗传相似性系数分别为0.903 7、0.916 8、0.922 5,遗传距离分别为0.101 3、0.086 9、0.080 7。本研究中找到一个在杂交A、B及C组合均出现的与父本共有的条带。测序结果表明,该条带长362 bp,在子代与父本中的一致性为100%。研究结果说明,奥利亚罗非鱼和鳜杂交子代中导入了父本遗传物质,导致子代组合的多态性增加,与父本的遗传差异变小,而且,这些遗传物质能稳定进行遗传;随着A组合与母本的回交及B组合的自交,又使得杂交子代的遗传结构向母本靠近。[中国水产科学,2007,14(1):32-38]
王金龙杨弘吴婷婷张志伟
关键词：奥利亚罗非鱼远缘杂交子代
奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素cDNA的克隆及原核表达被引量：1
2006年
促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,GnRH)是下丘脑分泌产生的神经激素,对脊椎动物生殖的调控起重要作用。本研究通过RT-PCR方法从奥利亚罗非鱼丘脑中扩增出长约400 bp的目的序列GnRH,并将其克隆到T载体中,经酶切鉴定、序列测定分析后表明其与尼罗罗非鱼和乌颊海鲷具有较高的同源性,处于同一个进化分支上;而与日本青、金鱼、拟鲤、壁虎等的同源性较低。将此cDNA片段定向克隆到表达载体pMAL-c2x中构建重组表达质粒pMAL-GnRH,转化到大肠杆菌TB1中,0.3M IPTG诱导4 h后成功表达出与预期大小相符的约56 kD的融合蛋白。表明大肠杆菌表达系统可以成功地体外表达奥利亚罗非鱼GnRH,为进一步制备抗体了解其免疫调节作用奠定基础。
曹丽萍丁炜东
关键词：奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素相关肽原核表达
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