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18srDNA为内参照的Real-Time-PCR方法检测半夏病毒被引量：3: 2006年; 利用实时荧光PCR方法,以18srRNA为内参照,对半夏植株及相应组培苗携带的黄瓜花叶病毒(Cu-cumber Mosaic Virus,CMV)含量进行了相对定量检测.并以DAS-ELISA和RT-PCR方法检测结果相比较.结果表明,相比原始植株,组培苗的病毒含量大大降低.以带病毒半夏母株为外植体培养的组培苗,其病毒含量以叶片中的相对较高,在块茎和愈伤组织中病毒相对较低.而ELISA方法在检测病毒含量低的样品时有假阴性结果;RT-PCR方法灵敏度可靠但不适宜精确量化.; 何煜波陈集双陈海敏冯俊丽高必达; 关键词：实时荧光PCR 黄瓜花叶病毒半夏

半夏细菌性软腐病原菌的分离及鉴定被引量：25: 2007年; 在浙江省人工栽培的半夏[Pinellia ternata（Thunb．）Breit．]上发现一种新的软腐病害，软腐症状常常表现在块茎上，高温高湿条件可导致叶面腐烂和整株死亡。为了对病原菌进行鉴定，从软腐的半夏病株块茎中分离到10个菌株，分别指定为RF1～RF10，并进行了致病性测定、形态观察和细菌学特性分析，同时对RF1菌株进行了分子鉴定。结果表明，10个菌株均可经人工接种导致半夏、胡萝卜、马铃薯、番茄、黄瓜和白菜软腐。在电镜下菌体呈短杆状，两端钝圆，具有4～6根周生鞭毛。兼性厌氧、革兰氏阴性，DNA中G＋Cmol％为51。RF1菌株的16S rDNA测序和系统发育学分析表明，其与胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种（Pectobacterium carotovorum subsp．carotovorum）M1菌株报告的序列相同点为99％，与该亚种另2个菌株（E161和441）的序列相同点达97％。结果表明，半夏软腐病原菌应归属于胡萝卜软腐果胶杆菌胡萝卜软腐亚种。; 何煜波胡秀芳陈海敏陈集双高必达应飞翔; 关键词：半夏软腐病 RDNA

三叶半夏组培苗的病毒检测被引量：4: 2010年; 组织培养阶段植物细胞中的病毒含量较低,难以用常规方法进行可靠检测。本研究采用DAS-ELISA、RT-PCR和核酸杂交三种方法对不同来源的12个三叶半夏(Pinellia ternata(Thunb.)Breit.)组培苗样品中的黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus,SMV)进行比较检测。结果显示:经DAS-ELISA检测,4个样品携带CMV,4个样品携带SMV,1个样品同时携带2种病毒;经RT-PCR检测,5个样品携带CMV,6个样品携带SMV,1个样品同时携带2种病毒;经核酸杂交检测验证,其结果与RT-PCR的检测结果一致。可见,对于三叶半夏组培苗,DAS-ELISA检测灵敏度不够高,需用灵敏度更高和特异性更强的核酸杂交方法来对其进行病毒检测,确保检测结果准确可靠。; 郭巧萍唐香山陈集双; 关键词：三叶半夏组培苗黄瓜花叶病毒大豆花叶病毒病毒检测

以18S rRNA为内参照的多重RT-PCR检测3种百合病毒被引量：29: 2006年; 本研究对多重PCR体系各成分和循环参数进行了摸索和优化,建立了以18S rRNA为内参照的同时检测3种百合病毒的多重RT-PCR体系,所检测的3种病毒是黄瓜花叶病毒(CMV)、百合斑驳病毒(LMoV)和百合无症病毒(LSV)。它们为侵染我国百合的主要病毒。在RT反应体系中加入3种病毒和18S rRNA的特异性反向引物的混合物,使反应体系中各反向引物终浓度均为0.5μmol/L,反转录酶(AMV)反转录合成各病毒和18S rRNA的互补第一链cDNAs。多重RT-PCR条件实验显示:将标准RT-PCR体系中的TaqHS DNA聚合酶量改为0.100 U/μL,Mg2+浓度改为4.0 mmol/L,各引物浓度选择0.2μmol/L,那么25个循环反应以上就能在一个反应管中以18S rRNA为内参照同时检测百合中的3种常见病毒。用该体系检测了10个百合样品,同时与32P同位素标记膜杂交检测作对照,结果显示,该检测体系检测灵敏度更高。; 王冲陈集双洪健杜志游张华荣陈绍宁; 关键词：多重RT-PCR RRNA 分子检测

三叶半夏的2种病毒检测被引量：16: 2007年; 目的:研究我国主产地栽培及野生三叶半夏的2种病毒病害发生情况和病毒种类。方法:症状观察法,DAS-ELISA及RT-PCR。结果与结论:侵染我国半夏的病毒主要为黄瓜花叶病毒CMV(cucumber mosaic virus)的天南星科株系和大豆花叶病毒SMV(soybeen mosaic virus)的天南星科株系,后者与以前报道的芋花叶病毒D sMV(dasheen mosaic virus)和SMV都有血清学阳性反应。人工栽培的三叶半夏普遍受到这2种病毒的侵染。其中,在早春检测的浙江宁波栽培半夏21个样品中CMV与SMV的检出率分别为71.4%和14.3%,浙江萧山栽培半夏18个样品中的检出率分别为100%和44.4%;河北栽培半夏21个样品中的检出率分别为61.9%和33.3%;安徽栽培半夏12个样品中的检出率分别为50.0%和41.7%;四川栽培半夏12个样品中2种病毒的检出率均为16.7%;北京栽培半夏16个样品中SMV的检出率为31.3%,未检测到CMV。25个来自全国各地的野生三叶半夏样品中CMV和SMV的平均检出率为20.0%。; 申屠苏苏王海丽陈集双何煜波高必达; 关键词：三叶半夏黄瓜花叶病毒大豆花叶病 DAS-ELISA RT-PCR

用透明法观察三种叶型半夏叶的表皮形态(简报)被引量：1: 2010年; 叶表皮特征,特别是气孔器类型的研究一向为植物学家所重视,在分类学或系统学上具潜在的价值。本研究通过透明法对柳叶型,桃叶型,心叶型半夏的表皮特征进行了详细观察。结果显示,采用透明法可以清晰地观察到叶表皮形态及气孔特征,半夏上表皮的气孔分布极不均匀,离叶缘越近,气孔密度越大;且三种叶型半夏的下表皮气孔密度存在差异,心叶型半夏的气孔密度最大,柳叶型次之,桃叶型最小。本研究证明透明法可以用于半夏表皮的观察,为半夏的产业化提供新的研究手段。; 赵志敬郑道光严师节陈集双; 关键词：半夏表皮气孔

三叶半夏花药培养及单倍体植株的获得被引量：1: 2011年; 目的:研究三叶半夏花药培养条件,诱导单倍体植株,为三叶半夏育种研究提供材料。方法:对3种不同叶型的三叶半夏进行花药培养和单倍体诱导。结果:4℃预处理5 d后,三叶半夏花药在N6+2,4-D 1.0 mg.L-1+6-BA 0.5 mg.L-1+5%蔗糖+0.8%琼脂的培养基中,诱导产生愈伤组织的效果最佳。在优化条件下不同叶型的花药都诱导出了愈伤组织,诱导率分别为:桃叶型半夏Bx-t最高,为4.25%,芍药叶型半夏Bx-s为2.08%,柳叶型半夏Bx-l最低,为0.99%。结论:通过半夏花药培养,能够诱导出愈伤组织和单倍体植株。; 张雪白宁宁杨宗岐贾明良陈集双; 关键词：三叶半夏花药培养愈伤组织单倍体

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国家高技术研究发展计划(2002AA24112A)