江苏省高校自然科学研究项目(02KJB32013)
- 作品数：1 被引量：3H指数：1
- 相关作者：徐开林杜冰桑威曾令宇潘秀英更多>>
- 相关机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：江苏省高校自然科学研究项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- shRNA介导的RNA干扰对小鼠T淋巴细胞CD28基因的沉默效应被引量：3
- 2007年
- 目的探讨短发夹状 RNA(shRNA)对 C57BL/6J 小鼠 T 淋巴细胞 CD28共刺激分子基因沉默效应,评价 shRNA 对目的基因干扰效应的时效性和稳定性,筛选出高效的干扰序列用于后期的动物实验。方法首先构建3个载有 CD28特异性 shRNA(shRNA1～3)的表达质粒和1个非特异性shRNA 表达质粒,将其分别转染小鼠脾淋巴细胞,以非特异性的 shRNA 表达质粒组和未转染组分别作为阴性对照和空白对照,采用实时荧光定量 PCR 和 Western blot 方法分别从基因和蛋白质水平评价转染1～20 d 内 CD28 shRNA 对 CD28基因的干扰效应,并筛选出干扰效率最高的序列。结果①成功构建了 CD28 shRNA 表达载体;②3种 CD28 shRNA 均可在 mRNA 和蛋白质水平有效沉默目的基因,与实验对照组比较差异有统计学意义(P<0.01):CD28 mRNA 拷贝数持续降低,3种 CD28 shRNA 转染 C57BL/6J 小鼠脾细胞20 d,小鼠脾细胞 CD28 mRNA 拷贝绝对数分别下降了99.62%、99.89%和99.80%;CD28蛋白表达水平分别降低了(84.90±0.65)%、(96.49±0.03)%和(91.76±0.32)%,以CD28 shRNA 2组的抑制效率最高(P<0.01)。结论①特异性的 CD28 shRNA 可长期、稳定地介导CD28基因沉默;②针对 CD28基因不同位点的不同 shRNA 也有干扰效率的差异。
- 桑威徐开林潘秀英曾令宇杜冰
- 关键词：T淋巴细胞RNA干扰
