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抗AAV2单克隆抗体的制备及特性研究: 2009年; 以纯化的重组AAV2病毒颗粒为抗原免疫小鼠,获得7株稳定分泌抗AAV2衣壳蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,其中B10和G4两株单克隆抗体具有中和活性,抗体亚型分别为IgG1和IgG2a型。对这两株单克隆抗体与rAAV病毒结合的特性进行了研究。单克隆抗体B10和G4对rAAV2病毒颗粒的结合均具有良好的血清型特异性,并且这种特异结合作用不被肝素阻断。这两株抗体都不阻断AAV2病毒与敏感细胞的结合,提示它们与病毒颗粒的结合位点都不处于AAV2病毒与主要受体结合的部位内。Western blotting检测结果显示,B10与AAV2的三种衣壳蛋白VP1、VP2和VP3均能结合,而G4不能与AAV2的这三种衣壳蛋白结合。这说明B10与AAV2结合的位点位于衣壳蛋白VP1、VP2和VP3的重叠部分处并且可能是线性表位,而G4则可能是针对AAV2病毒颗粒构象表位的抗体。这两种结合特性不同的单克隆抗体为研究AAV2病毒颗粒的表面特性和感染特性提供有用的工具。; 谭淑萍袁振华田文洪董小岩吴小兵; 关键词：单克隆抗体中和抗体

含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒免疫效果研究: 2007年; 目的探讨含HIV-1 gag基因的重组腺病毒5型与35型嵌合病毒（rAd5／F35）在BALB／c小鼠中的免疫效果。方法 PCR，间接免疫荧光鉴定HIV-1 gag基因在重组腺病毒（rAd5／F35-mod．gag）的正确插入和体外细胞水平的表达，用rAd5／F35-mod．gag以不同的方式免疫BALB／c小鼠，ELISA检测小鼠血清中的p24特异性抗体，细胞内细胞因子染色法检测小鼠的特异性细胞毒性T淋巴细胞（CTL）应答。结果重组腺病毒rAd5／F35-mod．gag在体外细胞水平可以很好的表达目的基因gag；在小鼠体内重组腺病毒rAd5／F35-mod．gag可诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应，用rAd5／F35单独免疫2次，所诱发的CTL和血清IgG反应最强。但Ad5初次感染后，产生的抗Ad5抗体可以抑制rAd5／F35疫苗的特异性免疫反应。结论重组腺病毒rAd5／F35-mod．gag单独免疫可在小鼠体内诱导特异性的CTL应答和血清IgG抗体反应。只改变Ad5纤突蛋白Fiber，不能避免抗Ad5抗体的抑制作用。; 刘新蕾余双庆冯霞王小利刘红梅张晓梅李红霞周玲李泽琳曾毅; 关键词：HIV-1 艾滋病疫苗腺病毒科

Ad5F35-LMP2重组腺病毒的构建及鉴定被引量：4: 2007年; 目的构建Ad5F35-LMP2重组腺病毒。方法分别以EcoRⅠ单酶切pSH-LMP2和pDC316,将LMP2目的基因片段和线性化的pDC3l6连接,克隆构建pDC3l6-LMP2,以PCR和酶切的方法鉴定插入方向正确。pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架pBHG-fiber5/35共转染293细胞构建重组腺病毒Ad5F35-LMP2,PCR及间接免疫荧光进行鉴定。结果经PCR和酶切鉴定证实pDC3l6-LMP2构建成功。pDC3l6-LMP2与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑,说明二者在293细胞中同源重组并包装成功。经PCR证实重组腺病毒Ad5F35-LMP2构建完成,间接免疫荧光鉴定LMP2蛋白能在细胞膜上有效表达。结论本实验成功构建了含EB病毒LMP2全序列的Ad5F35-LMP2重组腺病毒,为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用Ad5F35-LMP2重组腺病毒对鼻咽癌患者进行基因免疫治疗奠定了基础。; 莫武宁周玲吴小兵王湛唐安洲黄光武曾毅; 关键词：鼻咽癌重组腺病毒基因免疫治疗

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国家自然科学基金(30370067)