国家自然科学基金(30370014) 作品数:8 被引量:17 H指数:3 相关作者: 张长铠 何培新 吕鹏 何冬旭 王建传 更多>> 相关机构: 山东大学 郑州轻工业学院 河南省科学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 河南省自然科学基金 国家重点实验室开放基金 更多>> 相关领域: 生物学 农业科学 环境科学与工程 更多>>
洋葱伯克霍尔德氏菌L68双加氧酶区基因克隆及序列分析 2006年 克隆洋葱伯克霍尔德氏菌L68双加氧酶区基因并对其进行序列分析。采用邻苯二酚喷洒方法从洋葱伯克霍尔德氏菌L68的基因文库中筛选到了1株含有双加氧酶区基因的重组子,其重组质粒命名为pB2k。重组质粒pB2k含有8030bp的L68基因片断,经BLAST比对,该片断含有11个与已报道的ORF相近的ORF。在该片断的5’端,ORF1和ORF2分别编码两个转移酶基因,tomA1t、omA2t、omA3和tomA4编码酚羟化酶组份,tomA5编码氧化还原酶,phnT编码铁氧还蛋白,phnE编码邻苯二酚2,3-双加氧酶,ORF3编码未知功能蛋白,phnG编码部分2-羟粘糠酸半醛脱氢酶。 吕鹏 张长铠关键词:双加氧酶 基因克隆 火菇素cDNA的初步免疫学筛选 被引量:1 2004年 火菇素是一种具有抗癌活性的简单蛋白 ,从金针菇中分离纯化火菇素的方法如下 :金针菇子实体经乙酸液浸提、硫酸铵和乙醇分级沉淀后 ,通过DEAE SephadexA 5 0除去色素和部分杂蛋白 ,最后经CM SephadexC 5 0离子交换柱层析分离 ,得到了电泳均一的纯化蛋白 .以火菇素为抗原制备的抗血清为探针对构建的金针菇cDNA表达文库进行免疫印记筛选 ,对获得的阳性克隆进行PCR、酶切以及在大肠杆菌中诱导表达等初步鉴定 ,为进一步确证、克隆火菇素基因打下了基础 . 周凯松 薛久刚 黄芳 张晗星 张长铠关键词:火菇素 金针菇 CDNA 免疫筛选 邻苯二酚双加氧酶传感器的研究 被引量:5 2005年 洋葱伯克霍尔德氏菌L68的细胞裂解液经硫酸铵分级沉淀后,依次经DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析,Hydroxyapatite柱层析和Sephadex G-150 凝胶过滤分离,提取到邻苯二酚双加氧酶.经SDS-PAGE检测,达到电泳纯.将酶反应与氧电极偶联,研究了检测水体中邻苯二酚的邻苯二酚双加氧酶传感器.以100mmol/L磷酸钠标准缓冲液(pH7.24)作为该酶传感器的的工作介质,在25℃条件下测得传感器对邻苯二酚标准液的工作曲线线性范围为0.2~3mmol/L,检测限为0.05mmol/L,响应时间为1min,平均回收率达到1.03%. 吕鹏 史建国 冯东 庄重 王建传 凌建亚 张长铠关键词:生物传感器 邻苯二酚 神经致幻型毒菌活性色胺类物质定性检测试纸的研制与应用 被引量:3 2006年 神经致幻型毒菌含有毒素———活性色胺类物质,包括光盖伞辛(Psilocin)、光盖伞素(Psilocybin)、Baeocystin和Norbaeocystin等。利用活性色胺与对-二甲基氨基苯甲醛发生专一性颜色反应的原理,研制了毒素定性检测试纸,并应用薄层层析(TLC)验证了试纸的检测效果。以金针菇为对照,对9种可疑野生毒菌进行了检测。结果2种发生紫色反应,4种发生红棕色反应,对照和另外3种样品没有发生颜色反应。TLC验证结果表明,发生颜色反应的样品都显示出斑点,其中发生紫色反应的样品含有光盖伞辛;而没有发生颜色反应的样品则没有显示斑点。研制的试纸可以用于神经致幻型毒菌所含毒素的初步定性检测,不发生颜色反应的样品确定不是毒菌,发生紫色颜色反应的样品是毒菌的可能性较大。 何冬旭 何培新 张长铠关键词:薄层层析 洋葱伯克霍尔德氏菌L68邻苯二酚2,3-双加氧酶基因克隆、表达和纯化 被引量:4 2006年 采用自行设计的引物,从洋葱伯克霍尔德氏菌L68中PCR扩增得到phnE(邻苯二酚2,3-双加氧酶)基因,亚克隆到高表达载体pET 32a上,转入表达菌株中。经双向测序,证实构建过程中未出现突变。重组子经IPTG诱导后,可以表达有活性的重组双加氧酶。选择26℃进行重组蛋白诱导。薄层扫描显示,表达重组蛋白总量最高可占总蛋白的64.92%。利用金属螯合层析对重组蛋白进行了一步纯化,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白纯度达到95%。 吕鹏 刘大桅 张长铠关键词:邻苯二酚2,3-双加氧酶 克隆表达 金属螯合层析 黄褐裸盖伞驯化栽培及子实体形态多态性研究 2007年 用8种培养基进行了黄褐裸盖伞子实体培养研究,同时观察了人工培养子实体的形态多态性。结果表明,黄褐裸盖伞在多种天然和半合成培养基上都可良好生长和结实,其中土豆系列培养基非常适合黄褐裸盖伞菌丝体生长和结实;人工培养出现4种不同形态的子实体:正常子实体、小型子实体、花椰菜状子实体和无分化子实体。 何培新 孙新城 王丽娟 唐新庆 张长铠三种裸盖伞的伴生菌——点枝顶孢生物学特性研究 被引量:1 2006年 点枝顶孢为四川省分布的黄褐裸盖伞、粪生裸盖伞及裸盖伞205菌株的伴生菌。研究了点枝顶孢对碳素营养和氮素营养的同化利用情况以及菌丝生长的温度和pH值范围。结果表明,点枝顶孢对麦芽糖、可溶性淀粉和葡萄糖同化能力最强,不能利用d-半乳糖、L-山梨糖、L-阿拉伯糖、甘露醇、乳糖和木聚糖;对酵母粉、干酪素钠和琥珀酸铵的同化能力最强,不能利用尿素和亚硝酸钠;菌丝生长的温度范围是5~40℃,最适25℃;菌丝生长的pH值范围较宽(1.5~13.5),最适pH为6.5。点枝顶孢具有明显的遗传多样性,研究作为三种裸盖伞伴生菌的点枝顶孢菌株的生物学特性,具有一定的理论意义。 何培新 张长铠关键词:温度 PH值 改良比色法在神经致幻型毒菌活性色胺类物质检测中的应用 被引量:5 2006年 改良了神经致幻型毒菌活性色胺类物质的比色检测方法。利用白灵菇子实体的稀醋酸提取液替代水作为空白对照,检测结果更为客观、准确;筛选到了不使用硫酸的显色剂配方,降低了操作过程中的危险性。探讨了改良的比色法在毒菌活性色胺类物质半定量和定量检测中的应用。结果表明,该方法可以用于毒菌总活性色胺类物质的半定量检测;结合薄层层析法,还可以用于特定毒素的定量检测。 何培新 郭恒 何冬旭 张长铠关键词:薄层层析