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大鼠肺动脉平滑肌细胞缺氧后STAT3活性变化与细胞增殖关系的研究被引量：2: 2006年; 目的:探讨信号转导及转录活化因子3(STAT3)对缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响及作用机制。方法:组织块法原代培养PASMCs,用AG490预孵育后进行缺氧处理,半定量RT-PCR,Western blot法分别检测缺氧2h、6h、12h、16h、24h组STAT3酪氨酸活性水平变化;半定量RT-PCR检测缺氧条件下上述时相点c-myc mRNA水平变化;3H-TdR掺入法观察缺氧条件下细胞增殖变化。结果:Western blot定量分析显示缺氧培养6h组STAT3酪氨酸磷酸化水平升高,12h组达高峰,16h略有下降;缺氧培养2h组c-myc mRNA表达升高,4h达高峰,6h下降,12h恢复至正常水平;3H-TdR掺入法结果显示缺氧6h组细胞3H-TdR掺入量的增加,并随缺氧时间延长变化更为显著。AG490抑制缺氧诱导STAT3酪氨酸磷酸化及c-myc mRNA表达。结论:①STAT3活化和c-myc表达参与缺氧PASMCs增殖;②在缺氧PASMCs增殖过程中STAT3上调c-myc表达。; 白莉余祖滨钱桂生李淑萍; 关键词：缺氧肺动脉平滑肌细胞

复合培养对肺动脉平滑肌细胞周期的影响被引量：1: 2003年; 目的　探讨肺微血管内皮细胞 (L MVEC)与肺动脉平滑肌细胞 (PASMC)复合培养时 LMVEC对 PASMC周期的影响。方法　L MVEC滤膜培养后 ,与 PASMC复合培养 ,采用流式细胞仪检测 PASMC周期的变化。结果　不同明胶浓度处理滤膜、不同种植密度相同、不同孵育时间处理滤膜对 LMVEC生长数量有明显的影响 ,但不同孔径滤膜对 LMVEC生长的影响无显著性差异。用 1‰明胶处理滤膜 ,1 0 5/cm2的种植密度及孵育 2 d即可获得较好效果。复合培养后 ,PASMC的 G1 期细胞数减少 ,S+G2 /M期细胞数增多 ,即促进细胞生长 ;使 LMVEC的 G1 期细胞数增多 ,S+G2 /M期细胞数减少 ,即抑制细胞生长。结论　复合培养后 ,促进 PASMC细胞生长 ,抑制 L MVEC细胞生长 ;但对两种细胞的凋亡影响不明显。; 李淑萍于彬周德山白莉关崧; 关键词：肺动脉平滑肌细胞肺微血管内皮细胞周期

一氧化碳促进肺动脉平滑肌细胞血红素氧合酶基因的表达被引量：2: 2002年; 目的 :观察低浓度一氧化碳 (CO)和低氧处理肺动脉平滑肌细胞 (PASMC )后 ,血红素氧合酶 (HO)基因表达的状况。方法 :培养大鼠PASMC成功后并进行鉴定 ,应用免疫组织化学、逆转录聚合酶链式反应 (RT -PCR)和Westernblot的方法研究低浓度CO和低氧作用后PASMC的HOmRNA及HO蛋白质含量。结果 :①HO - 1抗体免疫组织化学染色低氧组细胞胞浆呈黄色 ,中等强度 ;CO处理组的细胞胞浆呈棕黄色 ,强阳性 ,比低氧组的颜色显著深。HO - 2抗体染色各组细胞胞浆均呈淡黄色 ,弱阳性。②低氧组细胞HO - 1mRNA的表达水平为 1.2 5± 0 .37,明显高于常氧组细胞 (0 .12± 0 .0 4 ) ;低浓度CO组细胞HO - 1mRNA的表达水平为 3.5 2± 0 .6 8显著高于低氧组。各组细胞HO - 2mRNA的水平无明显差异。③低氧 4 8h组细胞HO - 1的蛋白含量为 1.0 7± 0 .15 ,高于低氧 2 4h组细胞(0 .5 2± 0 .0 4 ) ;低浓度CO组细胞HO - 1的蛋白含量为 3.6 5± 0 .4 3,显著高于低氧组细胞 ,4 8h蛋白质含量为最高。结论 :低浓度CO和低氧处理PASMC ,可以促进HO - 1mRNA和蛋白质的表达 ,而HO - 1在细胞低氧损害中发挥调节作用。; 王关嵩钱桂生蔡文琴关崧; 关键词：平滑肌细胞一氧化碳肺动脉血红素氧合酶逆转录聚合酶链式反应

人糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及其活性研究被引量：1: 2006年; 目的构建人糖皮质激素受体变异体表达载体,研究其表达和功能。方法运用RT-nested PCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD(ligand b ind ing dom ain)的cDNA序列,将PCR产物定向克隆至pEGFP-N2质粒载体,测序筛选重组质粒;荧光显微镜观察重组质粒转染表达情况;相对荧光素酶法检测GR转录激活活性。结果扩增出长1 601 bp的cDNA序列,测序证实:克隆片段与Genbank该基因序列同源性为100%;重组质粒表达产物定位于细胞核;转染组细胞转录激活活性增强。结论成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性。; 张方钱桂生吴学玲谢永宏王兴友陈维中; 关键词：糖皮质激素受体 LBD 转录激活活性

血红素氧合酶的分布和作用研究进展被引量：2: 2003年; 王关嵩钱桂生; 关键词：血红素氧合酶神经发育缺血再灌注

Gax基因转染对低氧性PASMCs增殖及原癌基因表达的影响被引量：2: 2007年; 目的:探讨生长终止特异性同源盒Gax基因转染对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)中原癌基因c-fos、c-jun mRNA表达及细胞增殖的影响。方法:腺病毒介导Gax基因(Ad-Gax)转染PASMCs。在常氧(21%O2)和低氧(2.5%O2)12h条件下,利用RT-PCR和免疫细胞化学法分别测定转染组和未转染组PASMCs中Gax mRNA和蛋白表达,以及c-fos、c-jun mRNA表达变化;[3H]-TdR掺入法检测各组PASMCs增殖情况。结果:RT-PCR和免疫细胞化学法证实Gax基因转染后PASMCs中Gax能稳定过表达;转染组细胞c-fos、c-jun mRNA表达水平在常氧和低氧均低于未转染组细胞(P<0.05,P<0.01);未转染组低氧时[3H]-TdR掺入量比常氧时高(P<0.01);在常氧和低氧时转染组[3H]-TdR掺入量均低于未转染组(P<0.05,P<0.01)。结论:Gax基因过表达可能通过下调c-fos、c-jun基因的表达来抑制低氧性PASMCs的增殖。; 夏世金胡明冬白莉钱桂生; 关键词：缺氧原癌基因肺动脉平滑肌细胞细胞增殖

SOCS3基因转染对低氧条件下大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖的影响被引量：1: 2004年; 目的　探讨SOCS3基因对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)增殖的影响。方法　以脂质体为载体将pEFSOCS3和pSV2neo共转染至体外培养的PASMCs ,应用RT PCR和免疫细胞化学法测定转染前后细胞中SOCS3mRNA和蛋白表达。低氧处理PASMCs ,采用Westernblot法检测转染前后常氧 (N)、低氧 6h(H6)、低氧 12h(H12 )PASMCs中STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平变化 ;流式细胞仪、3 H TdR掺入法检测转染前后各时相点细胞增殖情况。结果　RT PCR和免疫细胞化学证实转染后细胞中有SOCS3mRNA和蛋白稳定表达 ;与同时相对照组 (包括未转染组和转染空载体组 )相比 ,SOCS3基因转染组细胞中STAT3蛋白酪氨酸磷酸化水平显著下降 (P <0 0 1) ;流式细胞仪分析显示SOCS3基因转染组细胞各时相点G0 /G1期细胞比例显著增多 (P <0 0 1) ,S +G2 /M期细胞比例显著减少 (P <0 0 1) ;SOCS3基因转染组细胞在常氧和低氧条件下 3 H TdR掺入量显著低于同时相点对照组细胞 (P <0 0 1)。结论　SOCS3蛋白可能通过降低STAT3酪氨酸磷酸化水平抑制PASMCs增殖。; 白莉余祖滨钱桂生李淑萍关崧; 关键词：低氧信号传导肺动脉平滑肌细胞

大鼠缺氧肺动脉高压模型肺组织信号转导与转录激活因子的表达被引量：3: 2003年; 目的　通过观察大鼠常压缺氧肺动脉高压模型肺组织信号传导与转录活化因子(STATs)的表达水平 ,探讨其在低氧性肺动脉高压 (HPH)形成过程中参与的可能机制。方法　健康成年雄性Wistar大鼠 6 0只 ,随机分为缺氧组和健康对照组 ,缺氧组大鼠复制HPH模型。用逆转录 (RT) 聚合酶链反应 (PCR)和Northernblot检测 2组大鼠肺组织STATsmRNA的表达水平 ,免疫组化检测大鼠肺组织STATs蛋白的含量。结果　RT PCR扩增显示 ,缺氧 1周大鼠肺组织STAT 1、STAT 2、STAT 3、STAT5mRNA表达水平升高 ,缺氧 2周表达水平最高 ,缺氧 3周表达水平降低 ,但明显高于健康对照组 ;且缺氧 2周的表达水平高于其他缺氧时间 (P <0 0 5 ) ;STAT 4未检出。Northernblot显示 ,缺氧 2周大鼠肺组织STAT 1、STAT 3、STAT 5mRNA表达高于其他缺氧时间 (P <0 0 1)。缺氧 3周大鼠肺组织STAT3和STAT 5组化染色可见 ,肺泡壁细胞、支气管壁细胞、小血管壁细胞及巨噬细胞的胞核呈紫蓝色 ;图像定量分析显示 ,缺氧 3周大鼠肺组织STAT 3和STAT 5蛋白表达含量最高 ,缺氧 4周含量降低 ,但仍高于健康对照组 (P <0 0 1)。结论　大鼠常压缺氧肺动脉高压模型肺组织STATsmRNA和蛋白表达增高 ,提示STAT可能参与了HPH的发病机制。; 王关嵩钱桂生白莉陈琰吴国明周德山钱频; 关键词：肺性高血压信号转导转录激活因子

RNA干扰技术抑制糖皮质激素受体在大鼠肺泡巨噬细胞表达及活性的研究被引量：1: 2005年; 目的利用RNA干扰技术,建立糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor,GR)基因阻断的大鼠肺泡巨噬细胞模型。方法构建2个针对GR的RNAi表达载体,分别命名为psilencer3.1GR1和psilencer3.1GR2,经测序确认后,转染大鼠肺泡巨噬细胞。RT PCR、WesternBlot分别检测GRmRNA水平和蛋白水平表达变化;相对荧光素酶活性法检测GR转录激活功能的变化。结果经测序证实:成功构建2个针对GR的RNAi表达载体(psilencer3.1GR1和2);转染psilencer3.1GR2可明显降低细胞内GRmRNA的丰度及GR蛋白表达,细胞GR转录激活活性明显降低;转染psilencer3.1GR1与对照组相比无显著变化。结论成功地构建并筛选出一个特异而高效地阻断GR表达及功能的质粒表达载体,为进一步研究糖皮质激素受体的功能提供新方法。; 张芳钱桂生钱频陈维中苏踊跃; 关键词：糖皮质激素受体肺泡巨噬细胞 RNA干扰

大鼠糖皮质激素受体变异体cDNA序列克隆和表达及功能研究被引量：2: 2005年; 目的 :构建大鼠糖皮质激素受体变异体表达载体 ,研究其表达和功能。方法 :运用RT -nestedPCR扩增糖皮质激素受体不含有编码LBD结构域的cDNA序列 ,将PCR产物定向克隆至pEGFP -N2质粒载体 ,测序筛选重组质粒 ;荧光显微镜观察重组质粒转染后的表达情况 ;相对荧光素酶法检测转录激活活性。结果 :扩增出长 16 12bp的cDNA序列 ,测序证实 :克隆片段与Genebank该基因序列同源性为 10 0 % ;重组质粒表达产物定位于细胞核 ;转染组细胞转录激活活性增强。结论 :成功构建糖皮质激素受体变异体的表达载体 ,该变异体具有不依赖激素的转录激活活性。; 张芳钱桂生钱频陈龙李树钧陈维中; 关键词：糖皮质激素受体 LBD 转录激活活性

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