国家自然科学基金(30670893)
- 作品数：15 被引量：123H指数：7
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- 发现1个新的无效RHD等位基因被引量：1
- 2010年
- 目的鉴定1个疑似新的无效RHD等位基因。方法采用常规血清学方法检测1名孕妇的Rh血型抗原,间接抗球蛋白试验确认RhD抗原阴性,并用吸收放散试验排除D放散型(Del);先后分别采用商品化试剂盒、序列特异性引物PCR(SSP-PCR)技术以及DNA序列分析技术,分析该名个体的RHD基因。结果血清学试验为Rh-dCcEe,吸收放散试验阴性;基因型检测为杂合型RHD+/RHD-;商品化试剂盒和SSP-PCR结果都显示该个体携带的RHD阳性基因与正常Rh阳性表型的基因一致。对该标本编码区全长序列分析结果显示:第1外显子的第78位核苷酸缺失1个碱基"C",至第112位氨基酸时形成终止密码子。结论经GenBank检索发现该例为1个新的无效RHD等位基因,并完成注册RHD78delC(GenBank GQ477180)。
- 庄乃保吴凡徐华邵超鹏
- 关键词：RHD基因碱基突变血清学试验基因型检测
- DEL型个体抗体筛选的调查分析被引量：23
- 2009年
- 目的探讨DEL型个体是否对D抗原产生体液免疫应答。方法对经间接抗球蛋白试验确认为Rh(D)阴性的1030名献血者和89名孕妇做抗体筛选,对抗体筛选为阳性的献血者用10个O型谱细胞和筛选特异细胞做抗体鉴定。对产生抗-D的Rh(D)阴性献血者和孕妇用DEL特异性引物鉴定检测DEL型;对117名Rh(D)阴性献血者以吸收放散试验检测DEL型,对DEL阳性的献血者做抗体筛选。结果10名献血者和5名孕妇产生抗-D,他们的DEL基因分型均为阴性;117名Rh(D)阴性献血者DEL吸收放散试验检测阳性24名,并且抗-D阴性。结论在产生抗-D的个体中未检出DEL型,在DEL型的个体亦未检出抗-D。
- 章旭林凤秋李剑平邵超鹏
- 关键词：RH血型吸收放散试验免疫应答
- 汉族DEL型孕妇可免去抗-D产前检查被引量：24
- 2010年
- 目的鉴于占我国汉族Rh(D)阴性人群约25%的DEL型红细胞具有基本完整的D抗原表位,临床观察汉族DEL型孕妇妊娠Rh(D)阳性胎儿是否产生同种免疫反应。方法跟踪观察和测定207名有妊娠史的Rh(D)阴性孕妇产前和产后血清抗-D,根据RhCcEe表型和PCR检测RHD1227A等位基因鉴别DEL型和真实Rh(D)阴性表型。结果 207名Rh(D)阴性孕妇中,DEL型个体46名(22.2%)均未检测到血清抗-D,即使5名个体有2次或以上生育史,亦未见同种免疫反应。161名真实Rh(D)阴性个体中检出40例抗-D阳性(24.8%);80名有生育史的真实Rh(D)阴性孕妇中30例抗-D阳性(37.5%);20名有2次或以上生育史的真实Rh(D)阴性孕妇中12例存在抗-D(60.0%)。结论 DEL型孕妇妊娠Rh(D)阳性胎儿发生抗-D同种免疫反应的可能很小,我国Rh(D)汉族阴性孕妇中的DEL个体可免去定期的产前抗-D检测,以及免去预防性Rh免疫球蛋白的使用。
- 邵超鹏徐华徐群孙国栋李剑平张伯伟梁晓华刘忠周英李丹庄乃保
- 关键词：RH血型抗-D同种免疫产前检查
- 不同储存时段血小板膜凋亡蛋白表达的变化
- 2007年
- 目的：分析不同储存时段血小板膜磷脂酰丝氨酸（PS）的表达变化，评价储存期间血小板的质量状况。方法：以凋亡受体Fas（CD95）体外诱导血小板凋亡，建立流式细胞术检测血小板PS的实验方法。测定不同储存时段30份血小板PS的静止表达率，同时检测经CD95刺激的血小板PS的诱导表达率。结果：在0、1、5、7和8d储存时间，静止血小板膜PS表达持续升高，表达率分别为2．03％±0．91％、3．26％±1．86％、8．98％±4．60％、26．68％±21．28％和38．85％±26．43％，各组间比较差异有显著性（P〈0．05～P〈0．001）。在CD95诱导作用下，各储存时间组血小板膜PS诱导表达率明显高于新鲜血小板0d组，组间比较差异有显著性（P〈0．01）。储存7d静止血小板PS表达率与CD95诱导0d组的诱导表达率比较（26．68％±21．28％和25．29％±18．90％）差异无显著性（P〉0．05）。结论：血小板膜凋亡蛋白PS的表达随储存时间延长而显著增加。新鲜血小板有抗凋亡诱导作用。血小板储存至7d，仍可能保持正常功能。
- 熊文刘雅娟张欢欢张艳芳张印则邵超鹏
- 关键词：机采血小板流式细胞术
- 钠-氢交换蛋白1小干扰RNA对抗霉素A诱导人肾小管上皮细胞缺血再灌注损伤的保护机制被引量：2
- 2008年
- 目的通过构建钠-氢交换蛋白1（NHE-1）小干扰RNA（siRNA）抑制肾小管上皮细胞NHE-1的表达，探讨其对细胞缺血再灌注损伤的保护作用机制。方法根据人NHE-1全长基因序列设计并合成NHE-1-siRNA，转染人肾小管上皮细胞系（HKC），以无关siRNA转染组作为对照。利用10μmol／L抗霉素A诱导细胞来模拟缺血缺氧环境。用RT—PCR、Western印迹法检测NHE-1的表达。用BCECF／AM、Fluo-3／AM和SBFI-AM标记HKC，通过激光共聚焦显微镜分别检测其细胞内pHi、Ca^2＋和Na^＋浓度的变化。用Hoechst 33342染色技术及AnnexinV／PI染色结合流式细胞仪技术检测细胞凋亡情况。利用荧光探针JC-1检测细胞线粒体膜电位的变化。结果特异性NHE-1-siRNA能有效抑制HKC的NHE-1表达，与无关siRNA转染组相比，NHE-1-siRNA转染组NHE-1 mRNA和蛋白表达水平明显下调（均P〈0．05）。抗霉素A刺激后，2组细胞NHE-1 mRNA及蛋白表达水平显著上调，而NHE-1-siRNA转染组低于无关siRNA转染组；同时NHE-1-siRNA转染组细胞凋亡率（8．9％±2．9％）明显低于抗霉素A处理组（18．8％±3．2％）和抗霉素A＋无关siRNA转染组（17．4％±3．6％）（均P〈0．05）；NHE-1-siRNA转染组线粒体膜电位明显增高；与无关siRNA转染组相比较，NHE-1-siRNA转染组经抗霉素A处理后，细胞内钠离子、氢离子及钙离子增高的幅度较低（P〈0．05）。结论NHE-1-siRNA可抑制肾小管上皮细胞内NHE-1的表达，对抗霉素A诱导肾小管上皮细胞的缺血再灌性损伤有一定的保护作用。其机制可能通过抑制NHE-1表达，延缓细胞内Na^＋的积聚，减轻细胞内钙离子的超载，抑制损伤细胞的线粒体膜电位下降，减少细胞的凋亡。
- 洪权吴镝冯哲张雪光汪杨吕杨陈香美
- 关键词：缺血再灌注损伤肾小管上皮细胞
- DEL cDNA序列分析及蛋白质三维结构的模建被引量：5
- 2010年
- 目的 分析DEL血型的cDNA序列,模拟并分析DEL血型蛋白质三维结构.方法 采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术和cDNA序列分析技术,得到DEL血型的cDNA序列并测序分析.通过同源比较模建（Homology comparative modeling）的思想,构建和分析正常阳性RHD和DEL9两种蛋白质的三维结构.结果 DEL血型个体有复杂的mRNA形式,共检测到6种形式的RhD转录子.DEL血型不存在正常的RhD mRNA.对正常RHD和与正常RHD序列相似度最高的DEL9蛋白质结构进行比较分析.结构显示DEL9蛋白属于α螺旋结构蛋白,其在膜外部分与正常RhD蛋白基本一致.结论 DEL血型可能具有正常RhD的抗原表位.
- 庄乃保张印则吴凡邵超鹏苏晓东
- 关键词：RH血型DELCDNA转录子蛋白质三维结构
- Rh血型抗-D阳性个体中未见DEL型被引量：2
- 2010年
- 目的分析Rh血型系统抗-D抗体阳性个体的RhCcEe表型及检测DEL等位基因,观察产生抗-D同种免疫反应个体中是否存在DEL型。方法对因输血或妊娠产生抗-D同种抗体的个体,采用间接抗人球蛋白试验(IAT)排除部分D型或弱D型,然后进行RhCcEe表型检测,同时采用PCR方法检测RHD1227A等位基因鉴别DEL型和真实Rh(D)阴性表型。同时检测99名IAT确认的、抗-D抗体阴性的Rh(D)阴性健康人作对照。结果 99名抗-D抗体阴性组共检出C抗原阳性(包括CC或Cc)个体44名(44.4%);DEL型24名(24.2%)。抗-D抗体阳性组经IAT确认共118名Rh(D)阴性,C抗原阳性22名(18.6%),未发现DEL型个体,均与抗体阴性组存在显著性差异(P<0.01)。结论抗-D抗体阳性组未见DEL型,提示DEL型个体或不会因输血或妊娠针对Rh(D)抗原发生抗-D同种免疫反应;由于DEL型多携带C抗原,因此造成抗-D阳性组C抗原频率显著降低。
- 邵超鹏徐群孙国栋徐华李剑平张伯伟梁晓华刘忠周英李丹庄乃保
- 关键词：RH血型抗-D抗体DEL同种免疫
- 弱D15红细胞膜D抗原表位测定被引量：14
- 2009年
- 目的分析弱D15型个体的红细胞膜表面的D抗原的表位情况。方法采用间接抗球蛋白试验通过12种抗D抗原不同表位的人抗-D单克隆抗体,检测2名通过基因测序确认的已知弱D15型个体的红细胞膜D抗原表位,分别以Rh阳性、Rh阴性作为对照。结果弱D15型个体的红细胞膜D抗原12个抗原表位中有7种检测为阳性,5种检测为阴性。结论弱D15型个体红细胞膜D抗原除分子数量减少外,还存在"质"的变化,提示其可能具有"部分D"的抗原特性。
- 周丹熊文张艳芳邵超鹏
- 关键词：单克隆抗体
- RHD第9内含子全长序列分析
- 2009年
- 目的了解RHD第9内含子碱基变异对其正常剪切是否存在影响。方法采用PCR方法扩增和测序分析中国汉族1名正常Rh阳性个体和2名DEL(D放散型)表型个体[携带RHD(1227A)等位基因]的RHD第9内含子,并做相互比对,同时通过NCBI Basic BLAST与参考序列(GenBank BN000065)加以比对。结果在3名中国汉族个体的第9内含子中,共观察到28处碱基变异(EMBL/GenBank/DDBJ EU372940～2),其中7处变异相同,可能为中国人第9内含子的特异性碱基变异;另有1处碱基变异仅在DEL样本中检出,在正常Rh阳性个体中未发现,可能为DEL特异性。结论未发现中国汉族人DEL第9内含子存在可能影响正常拼接的碱基变异,提示DEL mRNA缺失第9外显子相应的序列的分子机制即1227A>G碱基突变造成错误拼接所致。
- 邵超鹏李桢熊文周丹
- 关键词：RHD基因内含子PCR中国汉族
- D_(el)红细胞膜D抗原分子定量分析被引量：17
- 2008年
- 目的定量分析Del红细胞膜D抗原的分子数量。方法用已知D抗原分子数目的红细胞样本作为标准,采用流式细胞技术定量分析4例携带RHD1227A等位基因的Del样本的红细胞膜D抗原的分子数量。结果3份Del样本红细胞膜D抗原数目均低于流式定量检测的域值(<22个/RBC),1例Del样本定量为28个抗原分子/RBC。结论携带RHD1227A等位基因的Del个体的单个红细胞D抗原数目不到30个。
- 朱美玲周丹谢亚琴熊文邵超鹏
- 关键词：RH血型DEL输血抗-D
