“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09307)
- 作品数：5 被引量：29H指数：4
- 相关作者：饶春明王军志陶磊高凯李响更多>>
- 相关机构：中国食品药品检定研究院中国药品生物制品检定所中国药科大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生理学更多>>
- 人源化抗表皮生长因子受体抗体质控方法和质量标准研究
- 目的建立人源化抗表皮生长因子受体抗体的质控方法。方法应用体外细胞生长抑制实验测定该抗体的生物学活性;电喷雾(ESI)质谱法与还原SDS-PAGE法测定其准确分子量;去封闭后用Edman降解法测定其N-末端氨基酸序列;SD...
- 陶磊饶春明王兰韩春梅李响高凯王军志
- 关键词：表皮生长因子受体人源化抗体
- 文献传递
- LC-MS／MS法对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定被引量：3
- 2012年
- 运用液质联用、两种串联质谱对融合蛋白FP3的氨基酸全序列测定,确证其一级结构。将样品还原烷基化后,通过胰蛋白酶酶解蛋白,PNGase F去除多肽混合物中糖肽的糖基化,将去糖后的总肽用于液质联用系统,通过液相分离后,运用Q-TOF和线性离子阱两种串联质谱测定各个肽段的b,y碎片离子,分析测定融合蛋白FP3的氨基酸全序列。通过LC-ESI-Q-TOF完成了融合蛋白FP3的76%氨基酸序列测定,通过LC-ESI-Trap完成余下24%氨基酸序列测定。液质联用、串联质谱法测定蛋白质氨基酸序列快速、灵敏、准确,是对重组蛋白结构分析和确证的重要手段。
- 李响高向东陶磊裴德宁郭莹饶春明王军志
- 关键词：液质联用融合蛋白氨基酸序列
- 重组嵌合抗CD20 IgG1型单克隆抗体的结构验证被引量：13
- 2010年
- 本文选择一种重组嵌合抗CD20 IgG1型单抗,应用液质联用仪及N-末端测序仪对其进行结构验证。对该单抗进行还原、烷基化、酶解等处理后,对其氨基酸序列、二硫键配对方式、糖链类型及糖基化位点进行分析测定。结果显示,该单抗轻、重链氨基酸序列与理论一致。通过液质肽图的解析,对单抗10条二硫键的配对方式进行了验证;通过比较单抗重链切糖前、后的相对分子质量,预测单抗所含糖链类型为岩藻糖化的双触角复杂型N-糖,糖基化位点位于重链的Asn301上。本方法可为该类重组单抗制品的质量控制及其参考品的结构确证提供参考。
- 陶磊饶春明高凯史新昌赵阳王军志
- 关键词：高效液相色谱-质谱联用
- 糖链切除对IgG1型单抗结构及功能的影响被引量：5
- 2011年
- 目的:分析IgG1型单抗中糖链切除对其结构与功能的影响。方法:分别测定糖链切除前后该抗体的圆二色谱、抗原结合能力以及体外补体依赖的细胞毒(CDC)活性,分析糖链切除对该单抗结构与功能的影响。结果:糖链切除后抗体的圆二色谱发生改变,抗原结合能力下降,体外CDC活性基本消失。结论:糖链是维持该IgG1型单抗正常的结构和功能的重要组成部分。
- 陶磊饶春明高凯史新昌赵阳王军志
- 关键词：生物技术药物糖链圆二色谱细胞毒性
- 人源化抗表皮生长因子受体单克隆抗体质控方法的建立被引量：7
- 2013年
- 目的建立人源化抗表皮生长因子受体(Epithelial growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体的质控方法。方法采用体外细胞生长抑制试验测定人源化抗EGFR单抗的生物学活性;质谱法和还原型SDS-PAGE法测定其准确相对分子质量;去封闭后用Edman降解法测定其N-末端氨基酸序列;SDS-PAGE和分子排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)法测定其纯度;反向液相色谱(RP-HPLC)法测定其肽图;定量PCR法和狭缝杂交法测定其外源性DNA残留量;其余项目按《中国药典》三部(2010版)要求进行。结果人源化抗EGFR单抗原液和成品的相对生物学活性分别为(100±20)%和(94±14)%;质谱法测得该单抗参考品轻、重链的相对分子质量分别为23 370.75和50 341.00,相对误差分别为0.005%和0.006%;还原型SDS-PAGE测得该单抗轻、重链的相对分子质量为27 000和53 400;轻、重链N-末端氨基酸序列均与理论一致;单抗原液的还原型SDS-PAGE纯度为98.5%;SEC-HPLC原液纯度为(98.39±0.05)%和成品SEC-HPLC纯度为(98.17±0.04)%;肽图图谱与理化参考品一致;定量PCR测得其外源DNA残留量小于100 pg/剂量;其他各项指标均符合《中国药典》三部(2010版)要求及其他相关要求。结论初步建立了人源化抗表皮生长因子受体单克隆抗体的质控方法,可用于该制品的常规质量控制。
- 陶磊饶春明王兰韩春梅李响高凯王军志
- 关键词：表皮生长因子受体人源化抗体
- 融合蛋白FP3等电点毛细管等电聚焦电泳分析方法的建立被引量：4
- 2012年
- 目的建立融合蛋白FP3等电点毛细管等电聚焦(Capillary isoelectric focusing,cIEF)电泳分析方法。方法采用中性涂层的毛细管,有效长度为20 cm,总长度为30 cm,内径为50μm;分离温度20℃;检测波长280 nm;20 Psi压力进样99 s,电压20 kV分离聚焦20 min,电压25 kV化学迁移25 min。比较不同两性电解质(PharmalyteTM3-10和AmpholineTM3.5-10)、增溶剂类型及浓度、聚焦电压(15、20、30 kV)对样品分离效果的影响,并验证系统的适应性、方法的重现性及系统的稳定性。结果建立的cIEF方法可使样品的电荷异构体有效分离,样品主峰与次主峰的分离度为1.249(USP)。AmpholineTM3.5-10可使样品的各个电荷异质性组分更有效地分离;6 mol/L尿素能提供良好的增溶环境;20 kV聚焦电压即可获得良好的分离效果。连续5次进样,主峰和次主峰迁移时间相对标准偏差(RSD)分别为1.29%和1.32%,样品主区带等电点范围为6.33～6.90,样品在24 h内检测结果稳定。结论建立了融合蛋白FP3等电点cIEF分析方法,该方法具有分离度高、重现性好、方法稳定和结果准确等优点,为该类制品的质量控制提供了更好的手段。
- 李响高向东田宏饶春明
- 关键词：融合蛋白等电点
