北京市自然科学基金(7131005)
- 作品数：11 被引量：86H指数：4
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- ether-a-go-go相关基因通道在胰岛β-细胞中的作用
- 2019年
- 目的探究ether-a-go-go相关基因(ether-a-go-go related gene,ERG)通道在胰岛β-细胞中的作用。方法提取野生型(wild type,WT)与ERG基因敲除型(knockout,KO)小鼠胰岛β-细胞,利用全细胞膜片钳技术记录钾离子电流与动作电位,分析敲除ERG基因后钾电流与动作电位的变化。对两组小鼠进行腹腔注射葡萄糖耐量实验,分析基因敲除后小鼠糖耐量的变化,探究ERG基因是否对体内血糖浓度有影响。结果在两组小鼠胰岛β-细胞中记录到的钾离子电流均呈现内向整流趋势,KO组钾离子电流明显减小,动作电位时程明显延长。动物实验中,KO组小鼠糖刺激2 h后血糖浓度较WT组显著降低。结论 ERG通道电流是胰岛β-细胞中钾离子电流的重要组成部分,可显著影响动作电位时程,进而影响体内血糖浓度。
- 赵苗妙元沙沙李奇卢晶黄海霞黄海霞
- 关键词：胰岛Β-细胞膜片钳血糖
- β位淀粉样前体蛋白裂解酶2基因敲除斑马鱼动物模型的构建及其初步应用
- 2015年
- 目的构建β位淀粉样前体蛋白裂解酶2(β-site APP-cleaving enzyme 2,BACE2)基因敲除斑马鱼动物模型并及其初步探索其应用。方法运用CRISPR/Cas9技术,在斑马鱼中设计针对靶点的gRNA,使之诱导靶点突变,经测序鉴定得到突变体。结果BACE2纯合突变体在早期部分无法存活,RT-PCR结果显示BACE2基因在斑马鱼的早期发育中持续表达。结论 BACE2基因敲除的斑马鱼动物模型将为进一步研究BACE2基因在斑马鱼胰腺发育中的作用和针对糖尿病的药物靶点筛选提供有效工具。
- 卢晶吴谦谢荣荣仇海燕程呈杨金奎
- 关键词：基因敲除斑马鱼
- 基于CRISPR/Cas9研究RFX6对斑马鱼胰腺发育的影响被引量：4
- 2015年
- 目的构建RFX6基因敲除斑马鱼动物模型及初步探究RFX6对斑马鱼胰腺发育的影响。方法应用CRISPR/Cas9技术,设计针对靶点的gRNA,诱导靶点突变,经测序鉴定得到突变体。结果成功构建了RFX6基因敲除斑马鱼动物模型,初步研究发现RFX6纯合突变体生长发育迟滞、体型瘦小、呈现糖尿病消瘦体型并且不能产生后代。结论 RFX6在斑马鱼胰腺的发育中占据重要地位,是控制斑马鱼胰腺发育的关键因子。
- 程呈吴谦卢晶仇海燕李倩杨金奎
- 关键词：基因敲除斑马鱼胰腺发育
- 糖尿病肾病早期诊断标志物的研究新进展被引量：56
- 2017年
- 糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)是2型糖尿病病人(type 2 diabetes mellitus,T2DM)最常见、最严重的慢性合并症,发病率逐年升高,已成为危害人类的重大疾病。早期经治疗后多可逆转,晚期则发展成终末期肾病。因此,及早诊断和预测DKD对临床治疗显得尤为重要。目前,临床上以微量白蛋白尿(microalbuminuria,MAU)作为诊断2型糖尿病肾损害的早期指标,然而,其预测价值受到质疑。近年来,人们发现蛋白质组学可能成为诊断糖尿病肾病的新工具,触珠蛋白(haptoglobin,HP)这种多功能的急性期时相蛋白可能与DKD的发生及发展密切相关。因此,本文就触珠蛋白与糖尿病肾病发病机制的研究进展进行综述。
- 宋丽妮刘敬怡张怡尘曹曦袁明霞杨金奎
- 关键词：糖尿病肾病微量白蛋白尿触珠蛋白
- 血管紧张素转化酶2减少胰岛细胞的氧化应激及凋亡被引量：4
- 2017年
- 目的探讨血管紧张素转化酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)在胰岛素分泌中的作用及可能的机制。方法提取C57BL/6小鼠的胰岛,用棕榈酸诱导氧化应激及凋亡。用ACE2及对照GFP的腺病毒对胰岛进行感染。ELISA方法检测胰岛素分泌功能。DHE探针检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)浓度。蛋白质印记(Western blotting)方法检测糖代谢及凋亡水平。结果 1)ACE2腺病毒感染后,胰岛素分泌增加。2)ACE2腺病毒感染降低了氧化应激水平。3)ACE2腺病毒感染减低胰岛凋亡。结论 ACE2改善胰岛素分泌功能,其机制可能与ACE2对氧化应激和凋亡的保护作用有关。
- 史婷婷杨芳远曹曦卢晶卢晶袁明霞谢荣荣
- 关键词：肾素血管紧张素系统血管紧张素转化酶2胰岛素氧化应激凋亡
- hERG钾通道通过降低氧化应激改善肝细胞糖代谢被引量：2
- 2017年
- 目的研究hERG钾通道(human ether-α-go-go related gene channels)在肝细胞中与糖代谢的关系。方法用hERG钾通道过表达载体转染人类肝癌细胞系(liver hepatocellular carcinoma,HepG2)细胞,通过荧光定量PCR(real-time PCR,RTPCR)和蛋白印迹(Western blotting)法检测糖代谢、糖异生、氧化应激及还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide 2'-phosphate,NADPH)相关亚基的表达。结果 hERG钾通道蛋白可在肝脏细胞中表达,将hERG钾通道过表达于HepG2细胞后,糖异生相关基因葡萄糖-6-磷酸激酶(glucose-6-phosphatase,G6Pase)表达显著降低,而磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(phosphoenolpyruvate carboxykinase,PEPCK)表达有降低。胰岛素表达相关基因葡萄糖转运蛋白2(glucose transporter type 2,GLUT2)、胰岛素受体底物2(insulin receptor substrate,IRS-2)和腺苷酸活化蛋白激酶α亚基2[(adenosine 5’-monophosphate(AMP)-activated protein kinase),AMPKα2]的表达水平均显著增高。NADPH4种亚基p22、p47、p67和p91表达均显著降低。结论 hERG钾通道可以通过降低氧化应激改善肝细胞内糖代谢。
- 卢晶沈涵程呈程呈张怡尘宋丽妮袁明霞杨金奎
- 关键词：氧化应激糖代谢
- KCN基因对小鼠脂代谢的影响及其机制初探
- 2017年
- 目的研究钾离子电压门控通道(potassium voltage-gated channel,KCN)基因对小鼠脂代谢的影响及其相关信号通路,为治疗糖尿病的脂肪异常提供新的治疗靶点。方法采用KCN基因敲除的小鼠模型及对照C57BL/6野生小鼠动物模型,检测三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇等脂代谢相关指标。HE染色观察小鼠肝脏组织脂肪变。Western blotting法测定小鼠肝脏组织腺苷酸激活蛋白激酶[adenosine 5'-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]通路相关蛋白的表达。结果 KCN基因敲除小鼠较野生型对照小鼠血清中三酰甘油、总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇浓度均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)高密度脂蛋白明显降低,肝脏HE染色显示基因敲除小鼠肝脏内脂滴的数目和体积均与野生型有明显差异,Western blotting结果显示KCN基因敲除小鼠肝脏组织中磷酸化蛋白激酶B(phosphate-protein kinase B,Phos-AKT)、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶(phosphate-acetyl CoA carboxylase,Phos-ACC)、phos-AMPK浓度均较正常对照组小鼠表达量降低,phosACCα水平较正常对照组小鼠明显增高差异有统计学意义(P<0.05)。结论 KCN基因对小鼠血脂代谢有保护作用,其作用机制与AMPK的脂肪酸氧化有关。
- 刘敬怡卢晶卢晶
- 关键词：VOLTAGE-GATED脂代谢
- 初诊2型糖尿病病人血清维生素D浓度与甲状腺功能及临床指标的关系被引量：7
- 2017年
- 目的探讨初诊2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)病人血清维生素D与甲状腺功能及临床指标的关系。方法选择北京市垂杨柳医院内分泌科2015年5月至2016年10月的初诊2型糖尿病病人239例,根据血清25-羟维生素D[25-hydroxy vitamin D,25(OH)D]值分为:≥30 ng/mL为正常组、20 ng/mL≤25(OH)D<30 ng/mL为不足组、10 ng/mL≤25(OH)D<20 ng/mL为缺乏组、<10 ng/mL为严重缺乏组,比较血清25(OH)D与临床指标及甲状腺功能的关系。结果初诊2型糖尿病病人血清维生素D缺乏的患病率为56.9%,随着血清25(OH)D下降,年龄、糖化血红蛋白(glycosylate hemoglobin,HbA1c)、促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)逐渐增加,各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。线性回归分析结果显示血钙(calcium,Ca)、甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)与血清25(OH)D呈独立正相关(P<0.05);性别、年龄、吸烟、HbA1c、TSH与血清25(OH)D呈独立负相关(P<0.05)。结论女性、年龄、吸烟、HbA1c、TSH是初诊2型糖尿病病人血清25(OH)D缺乏的独立危险因素。
- 崔丽梅刘翠平傅汉菁严晔华郑晓敏陶静冯建萍袁明霞袁明霞
- 关键词：2型糖尿病维生素D甲状腺功能促甲状腺激素
- 血管紧张素1-7降低脂肪细胞氧化应激增加脂联素表达被引量：7
- 2014年
- 目的研究血管紧张素(1-7)[Ang-(1-7)]/Mas轴对于高糖培养脂肪细胞氧化应激及脂联素表达的作用。方法用前脂肪细胞株3T3L1诱导分化成成熟细胞,分别在培养基中加入外源性的Ang-(1-7)10-9mol/L,Mas受体抑制剂A779 10-6mol/L,同时加入Ang-(1-7)及A779。分别用DHE荧光探针通过流式细胞术及用NBT染色法检测脂肪细胞内活性氧(ROS)含量。实时定量PCR方法检测脂联素及炎性反应因子的表达。无血清培养基培养脂肪细胞2 h后分别加入葡萄糖氧化酶(GO)50mU/mL、100 mU/mL作用12 h建立氧化应激模型,研究Ang-(1-7)对于脂肪细胞氧化应激的作用及对脂联素表达的影响。结果①Ang-(1-7)通过Mas受体降低脂肪细胞活性氧的产生。Mas受体抑制剂A779可逆转此作用。②构建氧化应激模型,脂肪细胞中的脂联素表达水平随着葡萄糖氧化酶浓度的增高而减少。③加入Ang-(1-7)可以逆转氧化应激导致的脂联素表达降低,抑制剂A779可以对抗Ang-(1-7)的这一作用。④Ang-(1-7)对于白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达水平没有影响。结论 Ang-(1-7)/Mas轴可以减少氧化应激产生的活性氧水平。Ang-(1-7)/Mas轴对氧化应激的保护作用可以增加抗胰岛素抵抗因子脂联素的表达。
- 刘畅曹曦杨芳远张雪莲袁明霞杨金奎
- 关键词：氧化应激脂联素
- 胃肠动力药西沙比利对表达于HEK293细胞的人ether-a-go-go相关基因2通道的影响被引量：2
- 2014年
- 目的：研究胃肠动力药西沙比利对于在 HEK293细胞异源性表达的人 ether-a-go-go 相关基因2（human ether-a-go-go related gene 2,hERG2）通道性质的影响。方法用 Lipofectamine 2000将 hERG2（AF311913）瞬时转染至 HEK293细胞,使其表达hERG2通道,利用全细胞膜片钳技术记录 hERG2电流。加入西沙比利（终浓度分别为0.001,0.01,0.1,1.0,10.0μmol/ L）,分别记录加药前和加药后2~8 min 的 hERG2电流,分析西沙比利浓度和作用时间对此通道电流的影响。结果西沙比利各浓度实验组中,hERG2时间依赖性电流和尾电流幅度均下降。在去极化电压为＋20 mV 时,随西沙比利浓度升高,电流抑制率逐渐增加。西沙比利的抑制作用随时间延长逐渐增强,西沙比利浓度为1μmol/ L 时,电流在8 min 内完全消失。结论西沙比利对HEK293细胞表达的 hERG2通道的时间依赖性电流和尾电流均有抑制作用,该抑制作用具有浓度依赖性和时间依赖性,即浓度越高,时间越长,抑制效果越明显,直至电流降低至稳态或消失。
- 元沙沙黄海霞杨金奎
- 关键词：HEK293细胞膜片钳延迟整流钾通道西沙比利
