海南省自然科学基金(807106)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 相关作者：宋海超史学群林明辉张勇符文英更多>>
- 相关机构：海南大学海南出入境检验检疫局三亚市南繁科学技术研究院更多>>
- 发文基金：海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 过表达海藻糖-6-磷酸合成酶拮抗酵母菌工程菌株的构建被引量：2
- 2011年
- 本研究构建了带G418抗性的载体pFL61-G418,从酿酒酵母WT303菌株中克隆了真菌抗逆境基因tps1(海藻糖-6-磷酸合成酶基因),再将tps1基因插入到pFL61-G418载体的NotI位点,构建pFL61-G418-tps1表达载体,并将该表达载体转化进入野生型拮抗酵母膜醭毕赤酵母菌株中。构建过表达海藻糖-6-磷酸合成酶拮抗酵母菌工程菌株,增强拮抗酵母菌的抵抗逆境的生存能力,从而提高其生活力及与病原菌的竞争力。结果表明成功地构建了过表达海藻糖-6-磷酸合成酶拮抗酵母菌工程菌株,说明pFL61穿梭质粒可以用来转化野生型拮抗酵母,G418抗性可以作为转化子筛选的阳性标记。该重组表达载体的成功构建,为野生型拮抗酵母的遗传改良提供了重要的理论依据。
- 宋海超张勇符文英林明辉史学群
- 关键词：海藻糖抗逆性过表达
- 一种适用于RT-PCR的拮抗酵母菌总RNA提取方法被引量：2
- 2012年
- 为了探索提取拮抗膜醭毕赤酵母(Pichia membrane faciens)总RNA的理想方法,以拮抗膜醭毕赤酵母(Pichia membrane faciens)菌株为实验材料,用改良的SDS法、Trizol试剂法和十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法分别对其进行了总RNA的提取,并利用紫外分光光度计法、凝胶电泳法和反转录聚合酶链式反应(reverse transcription polymerase chainreaction,RT-PCR)比较3种不同提取方法获得的总RNA质量和产率。结果表明:改良SDS法提取的总RNA具有较高的质量,OD260/OD280比值为1.980,并且OD260/OD230为2.054。凝胶电泳结果表明,改良的SDS法有28SrRNA、18SrRNA和5SrRNA3条清晰的条带,且很少降解,28SrRNA与18SrRNA亮度比约为2:1;RT-PCR能清楚扩增到特异条带,进一步证实了改良的SDS法提取拮抗酵母膜醭毕赤菌株的总RNA质量最好;CTAB法获得的总RNA质量也较好,只是28SrRNA与18SrRNA亮度比差异不明显;Trizol试剂法提取的RNA质量最差,RNA降解多,总RNA不完整,并有DNA污染。
- 宋海超史学群
- 关键词：总RNA提取
