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国家自然科学基金(813000021006165)

作品数：1 被引量：6H指数：1
相关作者：王宗润房明丽张云峰张力文吴秀丽更多>>
相关机构：吉林大学第一医院吉林大学更多>>
发文基金：国家自然科学基金更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇引物
  • 1篇荧光
  • 1篇荧光定量
  • 1篇实时荧光
  • 1篇实时荧光定量
  • 1篇实时荧光定量...
  • 1篇双歧杆菌
  • 1篇人粪
  • 1篇人粪便
  • 1篇法检
  • 1篇粪便
  • 1篇杆菌

机构

  • 1篇吉林大学
  • 1篇吉林大学第一...

作者

  • 1篇吴秀丽
  • 1篇张力文
  • 1篇张云峰
  • 1篇房明丽
  • 1篇王宗润

传媒

  • 1篇吉林大学学报...

年份

  • 1篇2014
共 1 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌方法的建立及评价被引量：6
2014年
目的：建立利用实时荧光定量PCR法检测人粪便中双歧杆菌浓度的方法，为检测人肠道内菌群浓度提供有效手段。方法：提取60例儿童粪便样本中细菌总DNA。选择细菌种属的特异性基因16SrRNA作为扩增区，依据双歧杆菌的16 SrRNA序列共设计3条引物，以常规 PCR扩增出的16 SrRNA部分基因片段制作标准品，应用 SYBR Green Ⅰ双链嵌合染料，对连续稀释的标准品及待测样本进行分析，建立绝对定量的标准曲线，同时计算出待测样本双歧杆菌浓度；根据可检测到的标准品最低拷贝数计算反应灵敏度；分析 PCR产物熔解曲线评价反应特异性；重复检测梯度稀释的标准品，用相同浓度标准品的Ct值变异系数（CV）评价反应稳定性。结果：常规PCR扩增出双歧杆菌16SrRNA部分基因片段长度约为613 bp，测序结果正确，成功构建了双歧杆菌实时荧光定量PCR反应中的标准品；生成的标准曲线R2＝0.999，最低检测限度为每个反应1.48＆#215;102个拷贝；实时荧光定量PCR产物的熔解曲线为单峰。对待测样本分批进行荧光定量 PCR检测，各组间每微升1.48×10^3～1.48×10^7个拷贝浓度标准品Ct值的变异系数为2.94％、3.39％、3.54％、3.08％和3.34％。60份儿童粪便样本双歧杆菌浓度对数值为7.77±0.86（拷贝数·-1湿便）。结论：本研究所建立的实时荧光定量 PCR法敏感性高、特异性强，且重复性好，适用于检测人粪便中双歧杆菌的浓度。
张力文王宗润吴秀丽房明丽张云峰
关键词：引物双歧杆菌
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