浙江省医药卫生科学研究基金(2009A176)
- 作品数：3 被引量：8H指数：2
- 相关作者：沈林海孔庆鑫王英红倪晓平邱丽华更多>>
- 相关机构：杭州市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 高分辨率熔解曲线分析检测家蝇cyp6d1基因突变被引量：4
- 2012年
- 目的探讨家蝇溴氰菊酯抗性机制。方法使用高分辨率熔解曲线(highresolutionmelting,HRM)分析与半分析定量PCR相结合的方法,分析家蝇抗性基因cyp6d1突变和扩增情况。通过对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系相比,抗性品系cyp6d1基因的mRNA表达量显著增加(P=0.0002),抗性品系cyp6d1基因的mRNA表达量是敏感品系的50.7倍;使用HRM对cyp6d1进行突变分析,将其分为3种基因型,分别为A型(Tm=85.5℃)、B型(Tm=87.3℃)和C型(Tm=88.5℃);经测序,该HRM分析结果分别与3类基因序列型相对应。A型基因型为纯合的1087G、1101T和1155A(对应GenBank序列号U22367.1);C型基因型为纯合的1087A、1101G和1155G;B型基因型为A型和C型的杂合型。生物信息学分析表明,该突变为无意义突变。结论杭州市家蝇抗性品系cyp6d1基因mRNA表达量显著增加,可能是家蝇抗性增加的原因之一。
- 王英红孔庆鑫邱丽华韦凌娅沈林海倪晓平
- 关键词：高分辨率熔解曲线家蝇抗性基因突变
- 高分辨率熔解曲线分析检测家蝇kdr基因突变被引量：2
- 2012年
- 目的探讨kdr基因在家蝇溴氰菊酯抗性增加中的作用。方法首次将高分辨率熔解曲线(high resolution melting,HRM)分析与半定量PCR相结合,用于分析家蝇抗性基因kdr扩增和突变情况。对扩增的PCR产物进行测序来验证HRM准确性。结果与敏感品系家蝇相比,kdr的mRNA表达量在现场品系家蝇中没有显著改变(P>0.05)。使用HRM对kdr进行突变分析,发现所有样本均为同一基因型。经核酸测序,该扩增片段没有突变位点。结论杭州家蝇溴氰菊酯抗性增加与kdr基因无关。
- 王英红孔庆鑫邱丽华韦凌娅沈林海倪晓平
- 关键词：高分辨率熔解曲线家蝇抗性
- 用高分辨率熔解曲线做PCR条件优化被引量：4
- 2012年
- 目的:确定高分辨率熔解曲线分析方法可用于PCR条件优化。方法:对家蝇抗性基因cyp6d1和kdr进行温度梯度PCR,其产物分别使用高分辨率熔解曲线分析和溴化乙锭琼脂糖凝胶电泳方法判定最佳退火温度,并将结果进行比较分析。结果:根据高分辨率熔解曲线判定cyp6d1和kdr基因的最佳退火温度分别为65℃和63.8℃,与根据溴化乙锭琼脂糖凝胶电泳判定的退火温度相同。结论:可用高分辨率熔解曲线判断PCR最佳退火温度。
- 王英红孔庆鑫沈林海倪晓平
- 关键词：高分辨率熔解曲线
