广东省医学科学技术研究基金(B2008115)
- 作品数：3 被引量：11H指数：2
- 相关作者：章俊汤珣郭婷婷杜庆生杨蕾更多>>
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- 针对CTGF的siRNA对高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin减少的影响被引量：5
- 2011年
- 目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)在高糖诱导小鼠足细胞nephrin、podocin表达减少中的作用,及针对CTGF基因的siRNA对其影响。方法将体外培养的小鼠足细胞分为6组:(1)正常对照组,1640培养基含D-葡萄糖1 g/L;(2)等渗对照组,1640培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,1640培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于含D-葡萄糖4.5 g/L中的1640培养基中培养。应用Realtime PCR检测nephrin、podocin、CTGF mRNA水平,Western blot检测CTGF、nephrin、podocin蛋白表达水平。结果高糖可诱导CTGF mRNA及蛋白表达增加,下调足细胞的nephrin、podocin mRNA及蛋白水平,而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,CTGF表达减少,同时伴有细胞nephrin、podocin表达升高。结论 CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质,高糖可通过CTGF诱导nephrin,podocin表达减少。针对CTGF的siRNA能明显改善这种损伤,为DN发病机制的研究提供新的实验依据。
- 杨蕾汤珣李萍华杜庆生郭婷婷章俊
- 关键词：结缔组织生长因子小分子干扰RNA足细胞
- 结缔组织生长因子介导高糖诱导肾小管上皮细胞肥大的机制
- 2010年
- 【目的】研究高糖诱导肾小管上皮细胞肥大的作用途径及可能机制。【方法】HK-2细胞分正常对照组(培养基含葡萄糖1g/L),等渗对照组(葡萄糖1g/L+甘露醇3.5g/L)和高糖组(葡萄糖4.5g/L)培养。收集各组培养至24h,48h,96h的细胞,检测结缔组织生长因子(CTGF)、p27kip的mRNA水平、CTGF、p27kip的蛋白水平、细胞增殖活力、细胞周期分布及细胞总蛋白含量。另外检测各组培养30min、1h、24h、48h时的磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)水平。每个检测指标设3个重复样本。【结果】高糖刺激可引起HK-2细胞的CTGF、p27kip的mRNA及蛋白表达水平显著升高,ERK1/2磷酸化激活,阻滞于G1期的细胞显著增多,细胞增殖活力受抑制,细胞肥大主要指标胞内蛋白总含量进行性增高。【结论】证实了高糖可通过上调CTGF激活ERK1/2信号转导,从转录水平上调p27kip,从而使增殖细胞阻滞于G1期诱导细胞肥大。
- 汤珣曾莉蔡德鸿章俊
- 关键词：结缔组织生长因子肥大细胞外信号调节激酶1/2
- 高糖通过结缔组织生长因子诱导足细胞减少podocalyxin的表达被引量：7
- 2011年
- 目的探讨高糖对小鼠足细胞podocalyxin表达的影响及结缔组织生长因子(CTGF)参与其损伤的可能机制。方法构建针对CTGF基因的特异性siRNA质粒并转染至小鼠足细胞。将体外培养的足细胞分为6组(1)正常对照组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5g/L;(3)高糖组,正常足细胞其培养基含D-葡萄糖4.5g/L;(4)高糖+空白对照组:足细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:足细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组:足细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后于高糖培养基中培养。Western blot方法检测小鼠足细胞Podocalyxin、CTGF蛋白表达及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平。结果高糖培养足细胞24、48h时均可下调其Podocalyxin蛋白表达量(P<0.05),并可诱导CTGF蛋白表达增加(P<0.05)。同时高糖可以活化足细胞ERK1/2信号途径,在高糖刺激30min时开始活化,持续活化至24h。特异性siRNA干扰CTGF合成后,ERK1/2活化减少,并且足细胞Podocalyxin表达升高。结论 CTGF是高糖诱导小鼠足细胞损伤的重要介质,可通过ERK1/2途径诱导podocalyxin表达下降,针对CTGF的siRNA能明显改善podocalyxin表达量,为DN的治疗提供新的思路。
- 章俊李萍华杨蕾杜庆生郭婷婷汤珣
- 关键词：结缔组织生长因子小分子干扰RNA糖尿病肾病足细胞
