国家自然科学基金(30670947)
- 作品数：10 被引量：32H指数：3
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- 相关机构：中国医科大学附属第一医院中国医科大学沈阳医学院沈洲医院更多>>
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- 重症肝炎患者肠道屏障功能的变化被引量：3
- 2008年
- 目的研究重症肝炎患者肠道IgA、分泌片（SC）和ZO-1、occludin的变化，了解重症肝炎患者伴发腹部症状的原因。方法采用免疫组化方法分别检测肠道IgA、SC和ZO-1、occludin。结果与对照组比较，重症肝炎患者肠道IgA、SC和ZO-1、occludin染色明显减弱。结论重症肝炎患者肠道IgA、SC和ZO-1、occludin表达下降，导致肠道屏障功能发生异常是引起腹部症状的原由之一。
- 刘冬妍鲁学恒刘沛
- 关键词：肝炎肠道屏障IGA分泌片ZO-1OCCLUDIN
- 急性肝衰竭小鼠血清TNFα与血脑屏障通透性的改变被引量：2
- 2011年
- 目的探讨对乙酰氨基酚/扑热息痛(APAP)导致的急性肝衰竭(ALF)小鼠模型中血清肿瘤坏死因子α(TNFα)及血脑屏障(BBB)通透性的改变。方法应用APAP建立ALF小鼠模型,观察死亡率、血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)及TNFα含量及肝组织病理学变化。利用伊文思蓝(EB)在脑中含量检测BBB通透性。结果小鼠注射APAP后4 h开始死亡,6 h死亡率达到高峰。血清ALT水平2 h开始升高,9 h达到高峰。肝脏病理学9 h病变最重,表现为大块或亚大块出血性坏死。6 h组血清TNFα较0小时组显著升高。脑组织EB含量于2 h开始升高,6 h达到高峰。结论在APAP所致的ALF动物模型中,血清TNFα水平明显增高,且与脑组织EB含量的显著升高相一致。TNFα可能是导致ALF时BBB通透性增加的重要细胞因子。
- 王文吕飒周莹刘沛
- 关键词：急性肝衰竭肿瘤坏死因子血脑屏障
- 肿瘤坏死因子α对暴发性肝衰竭小鼠肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的影响被引量：12
- 2007年
- 目的研究 TNFα对暴发性肝衰竭(FHF)小鼠大肠上皮细胞紧密连接蛋白 occludin 表达的影响。方法采用 D-氨基半乳糖(GalN)和内毒素(LPS)联合腹腔注射(ip)制备 FHF 小鼠动物模型,并设立 TNFα组(TNFα 10μg/kg,ip),TNFα抗体组(注射 LPS 和 GalN 前30min 尾静脉注射TNFα抗体100μg/只)。在不同的时间点(6h,9h)处死动物,应用免疫组织化学技术、Western blot及实时定量 PCR 检测各组小鼠大肠上皮细胞紧密连接蛋白 occludin 表达的变化。结果在生理盐水(NS)对照组,几乎整张切片上均可见到沿大肠黏膜上皮细胞膜顶端呈线性分布的 occludin 阳性染色,但 FHF 组及 TNFα组小鼠的阳性染色较之明显减弱,TNFα抗体组 occludin 的阳性反应与 NS 对照组比较无明显减弱。Western blot 结果与免疫组织化学结果相一致,FHF 组及 TNFα组小鼠9h 时occludin 蛋白含量明显下降,与 NS 对照组相比差异有统计学意义(0.36±0.05,0.48±0.02比0.71±0.09,P<0.05),TNFα抗体组与 NS 对照组相比差异无统计学意义(0.74±0.03比0.71±0.09,P>0.05)。实时定量 PCR 结果显示,FHF 组与 TNFα组小鼠6h 时 occludin mRNA 水平最低,与 NS 对照组相比差异有统计学意义(0.72±0.04,0.81±0.03比1.00±0.05,P<0.05),TNFα抗体组与 NS对照组相比差异无统计学意义(1.01±0.10比1.00±0.05,P>0.05)。结论在小鼠暴发性肝衰竭过程中,TNFα介导大肠上皮细胞间紧密连接蛋白 occludin 表达的下降。
- 崔巍王颖马力闻颖刘沛
- 关键词：肝功能衰竭肿瘤坏死因子紧密连接部
- 谷氨酰胺对肿瘤坏死因子-α引起的肠上皮紧密连接损害的保护作用被引量：5
- 2009年
- 目的探讨谷氨酰胺（GLN）保护肠黏膜屏障功能的作用机制。方法Caco-2细胞（20-30代）细胞培养7d后进行实验。实验分4组：对照组加入正常培养液．肿瘤坏死因子（TNF）-α组加入100mg／L的TNF-α，低浓度GLN组加入4mmol／LGLN和100mg／L的TNF-α，高浓度GLN组加入10mmol／LGLN和100mg／L的TNF-α。培养24h后，应用免疫荧光染色检测紧密连接蛋白occludin的定位、表达；并应用不同裂解液制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架，分别进行蛋白印迹杂交以检测磷酸化和非磷酸化的occludin蛋白含量。结果Western blotting分析显示ocdudin蛋白有两种表达形式，一种为65000（非磷酸化occludin），主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中；另一种为85000（磷酸化occludin）。只存在于NP-40不溶性蛋白样品中。各组65000ocdudin蛋白的表达差异元统计学意义。但TNF-α组85000aoccludin蛋白表达较对照组明显下降（P〈0．05）．低浓度GLN组85000aoccludin蛋白表达较TNF-α组有所增加。但差异无统计学意义（P〉0．05）。高浓度GLN组与TNF-α组比较85000aoccludin蛋白含量明显增加（P〈0．05）。结论TNF-α可以引起Caco-2细胞紧密连接蛋白occludin的异常分布和磷酸化的减少，GLN可以抑制这一变化。
- 崔巍周莹刘沛
- 关键词：连接蛋白类肿瘤坏死因子Α谷氨酰胺
- 肿瘤坏死因子对肠上皮细胞分泌片的影响被引量：3
- 2008年
- 目的:研究TNF-α对Caco-2细胞表达SC的影响。方法:采用免疫组化、ELISA、Western blot、Real-time PCR方法检测肠上皮细胞表达SC的变化。结果:与无TNF-α刺激比较,用不同浓度TNF-α刺激后SC阳性细胞、培养上清液中游离SC、Caco-2细胞SC蛋白和SC基因的表达明显增加(P<0.01)。结论:TNF-α上调Caco-2细胞内SC的表达。
- 刘冬妍刘沛
- 关键词：分泌片多聚免疫球蛋白受体肿瘤坏死因子CACO-2细胞
- 肿瘤坏死因子α对急性肝坏死小鼠肠道分泌型IgA变化的影响
- 2010年
- 据报道，重型肝炎患者血清中肿瘤坏死因子（TNF）α明显升高，因此，有学者认为TNF α在急性肝坏死时对肝损伤起重要作用，是导致肝坏死的重要介质之一。我们用脂多糖（LPS）／D氨基半乳糖（GaIN）建立急性肝坏死模型，并用抗小鼠TNF α-IgG抗体和抗小鼠肿瘤坏死因子受体1（TNF α-R1）抗体进行阻断，同时用TNF α代替LPS建立急性肝坏死动物模型，以观察TNF α是否是影响分泌型IgA（SIgA）变化的一个因子，从而探讨TNFⅨ是否在急性肝坏死时对肠道SIgA的变化起作用，并验证SIgA变化是否可导致腹膜炎。
- 刘冬妍丁鹏刘沛
- 关键词：肿瘤坏死因子Α免疫球蛋白A分泌急性肝坏死
- 肿瘤坏死因子受体l在暴发性肝衰竭肠黏膜屏障功能损害中的作用被引量：1
- 2007年
- 肠黏膜屏障对于抵抗肠道病原微生物的侵入具有重要作用。暴发性肝衰竭（FHF）时肠黏膜屏障的通透性增加^[1-4]，细菌及其毒性产物穿透肠壁进人体内，引起自发性腹膜炎甚至败血症。FHF时肠黏膜屏障通透性的增加与肠上皮细胞紧密连接的破坏有关。我们的前期研究发现，在FHF时，肠上皮细胞间紧密连接蛋白occludin表达下降，
- 崔巍刘沛
- 关键词：肝功能衰竭受体肿瘤坏死因子紧密连接蛋白
- 暴发性肝衰竭时肠上皮细胞间紧密连接蛋白claudin-1表达下降被引量：3
- 2013年
- 目的研究在暴发性肝衰竭小鼠中肠道紧密连接蛋白claudin-1表达的改变以及与肿瘤坏死因子-α（TNFα）的关系。方法采用脂多糖（LPS，10μg／kg）联合D氨基半乳糖（D—GaIN，800mg／kg）腹腔注射制作小鼠暴发性肝衰竭模型。同时分别腹腔注射脂多糖（10μg／kg）、D氨基半乳糖（800mg／kg）、生理盐水（2ml／kg）设立各对照组。肝衰竭小鼠给致衰竭药物前尾静脉注射抗TNF—dIgG抗体（100μg／只）设立TNFαIgG抗体组。分别在肝衰竭组小鼠给药2、6、9、12、24h后，各对照组及TNF—OtIgG抗体组给药9h后将小鼠处死，取材大肠组织。应用免疫组织化学技术、Westernblot及实时定量PCR检测暴发性肝衰竭进程中，小鼠大肠上皮细胞间紧密连接蛋白claudin-1的定位、表达及mRNA的变化。结果免疫组化发现claudin-1蛋白主要沿小鼠大肠黏膜上皮细胞膜的顶端和隐窝处呈线状分布。肝衰竭组小鼠给药9h后，claudin-1阳性染色明显减少。Westernblot显示和生理盐水对照组相比，肝衰竭组小鼠给药6、9h后，claudin-1蛋白表达明显减少（6h：0．86±0．0208VS1．0，P〈0．05；9h：0．6633±0．0328VS1．0，P〈0．01）。实时定量PCR显示肝衰竭组小鼠给药6、9、12h后claudin-1mRNA表达明显减少（6h：0．30674-0．1291VS1．0，P〈0．05；9h：0．2233±0．1155VS1．0，P〈0．01；12h：0．52754-0．1222VS1．0，P〈0．05）。TNF-dIgG抗体组给药9h后与生理盐水对照组相比elaudin-1蛋白和基因表达无明显变化（蛋白：0．9533±0．0186VS1．0，P〉0．05；mRNA：0．85±0．1437vs1．0，P〉0．05）。结论在暴发性肝衰竭小鼠模型中，TNF-α可使claudin-1蛋白和mRNA表达减少，从而破坏紧密连接结构，促进自发性细菌性腹膜炎的形成。
- 张树君李国珍汪照函付金龙刘沛
- 关键词：上皮细胞上皮细胞代谢连接蛋白类代谢
- 暴发性肝衰竭小鼠细菌侵袭肠黏膜方式的研究被引量：1
- 2011年
- 目的通过研究细菌侵袭肠黏膜屏障的方式，探讨暴发性肝衰竭（FHF）并发自发性腹膜炎（SBP）的机制。方法取240只雄性BALB／c小鼠，分为等渗盐水（NS）组（40只）、脂多糖（LPS）组（40只）、氨基半乳糖（GaIN）组（40只）、FHF模型组（120只）。分别腹腔注射相同体积的NS、LPS（10μg／kg）、GaIN（800mg／kg）、LPS（10μg／kg）／GalN（800mg／kg）。注射处理后，分别于2、6、9、12h和24h处死小鼠（每个时间点处死8只小鼠）。实验小鼠均在相应时间点摘取眼球，留取血清，并断头处死动物，留肝脏及大肠组织标本。用全自动生物化学分析仪检测ALT；对肝组织和大肠组织进行HE染色检测；透射电镜观察大肠黏膜超微结构及细菌侵袭肠黏膜的方式。用SPSS13．0统计软件进行数据分析，两组间ALT水平的分析采用Mann—WhitneyU检验。结果FHF模型组ALT水平、肝组织病理学检测结果及病死率和临床表现均符合FHF的诊断标准。4组小鼠注射处理后9h，HE染色发现大肠组织仅有轻微水肿及少量炎性细胞浸润，此时，透射电镜下观察发现FHF模型组肠上皮细胞微绒毛断裂、脱落、变短，紧密连接（TJs）不完整，细胞器变化明显，HE染色发现FHF模型组肝脏呈成片的出血性坏死，残存的肝细胞肿胀，出血坏死区见较多炎性细胞浸润，但NS组、LPS组、GaIN组肝脏组织病理形态及大肠黏膜超微结构变化不明显。FHF模型组注射处理后6～9h，细菌以胞饮的形式穿人肠壁，细菌穿入肠壁区域的肠道黏膜绒毛脱落，TJs出现断裂，注射处理后12h发现穿入的细菌以囊胞的形式存在。结论LPS（10μg／kg）／GAIN（800mg／kg）联合注射建立的FHF小鼠模型是成功的。FHF时，肠黏膜TJs的断裂可能为肠道内细菌进入肠黏膜提供了条件，TJS的断裂可能是FHF并发SBP的原因之一。
- 宋红丽吕飒刘沛
- 关键词：肝功能衰竭急性小鼠肠黏膜细菌
- 重症肝炎患者血sIgA和肝脏分泌片的变化被引量：2
- 2007年
- 目的:研究重症肝炎患者血清IgA、sIgA和肝脏IgA、分泌片(SC)的变化,了解重症肝炎患者血清sIgA升高的原因。方法:血清IgA采用免疫速率比浊法,血清sIgA采用放射免疫分析法,采用免疫组化方法检测肝脏IgA、SC的变化。结果:与对照组相比,血清IgA、sIgA明显升高,肝脏IgA沉积,但肝脏SC无明显变化。结论:重症肝炎时血中sIgA可能是肝脏SC脱落进入胆汁与其内的pIgA结合返流入血形成。
- 刘冬妍鲁学恒刘沛
- 关键词：重症肝炎免疫球蛋白A分泌性免疫球蛋白A分泌片
