国家自然科学基金(30670977)
- 作品数:1 被引量:0H指数:0
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- 钠氢交换子1短发夹RNA抑制醛固酮引起的系膜细胞纤连蛋白增生
- 2007年
- 目的构建钠氢交换子1(NHE1)的短发夹RNA(shRNA),用来抑制NHE1表达,进一步明确NHE1是否直接介导醛固酮引起的细胞外基质增生。方法构建靶向NHE1的短发夹状双链RNA的真核表达质粒(shRNA-NHE1),并将该质粒转染体外培养的大鼠肾小球系膜细胞。分别于转染后1、3、4 d用荧光定量PCR(real-time PCR)和Western印迹观察NHE1 mRNA和蛋白的表达。选择shRNA-NHE1质粒转染后第4天,给予醛固酮(10^-7mol/L)干预24 h,用ELISA法检测培养上清液中细胞外基质成分纤连蛋白(FN)的表达。结果PCR结果显示转染后24 h,shRNA-NHE1组NHE1 mRNA表达下降36.9%;转染第3、4天NHE1 mRNA表达降低69.2%和77.9%。Western印迹显示转染后24 h NHE1的蛋白表达无明显变化;3 d后蛋白水平显著下降,4 d后抑制作用更明显。ELISA结果显示,在未转染的系膜细胞中,醛固酮刺激后上清液中FN水平比对照组明显升高[(51.78±1.15)比(17.74±1.38)μg/L,P〈0.05],而当细胞转染shRNA-NHE1质粒后,醛固酮的上述作用被明显抑制[(28.07±1.73)μg/L,P〈0.05]。结论靶向NHE1的shRNA真核表达载体导入可以特异性抑制大鼠肾小球系膜细胞NHE1的表达,同时显著抑制醛固酮引起的FN增生,提示NHE1在醛固酮诱导的肾小球硬化中起重要作用。
- 张敏敏顾勇赖凌云陈靖郝传明林善锬
- 关键词:短发夹RNA醛固酮系膜细胞细胞外基质