实验用小型猪地方标准研究
- 作品数：6 被引量：41H指数：3
- 相关作者：赵德明尹晓敏乔俊文苏晓鸥孙淑华更多>>
- 相关机构：中国农业大学中国医学科学院北京协和医学院河北农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)检测方法的建立被引量：12
- 2009年
- 根据GeneBank中已经发表的PRRSV毒株的ORF6基因高度保守序列，设计并合成了一对特异性引物，建立了用于检测PRRSV的RT—PCR诊断方法。从感染PRRSV—QD的Marc-145细胞中提取病毒RNA，然后经RT—PCR扩增，获得预期266bp的目的片断，而猪伪狂犬病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒（PCV）细胞培养物及Marc-145细胞进行同条件检测，结果为阴性；PRRSV扩增产物测序结果与GeneBank中已发表的PRRSV毒株序列同源性达94．4％～97．4％且应用本研究检测方法对已知基因型的10株PRRSV盲检，检出率100％。上述研究结果表明，所建立的RT—PCR诊断方法特异性好、敏感性高，可进一步应用于猪繁殖与呼吸综合征的临床诊断。
- 苏晓鸥李玉荣乔俊文赵德明
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征PRRSVORF6RT-PCR
- 北京地区实验用小型猪设施环境因子检测与评价
- 2010年
- 目的检测北京地区实验用小型猪设施环境因子控制状况,为制定北京市实验用小型猪环境设施等级标准提供基本数据。方法GB14925-2001附录A～H规定的检测方法。结果普通环境小型猪设施5个,7次静态检测,3次动态检测。屏障环境小型猪设施3个,3次静态检测。检测指标包括温度、相对湿度、工作照度、动物照度、噪声、气流速度、换气次数、落下菌、空气洁净度、压力梯度、氨浓度(动态)等环境因子。检测结果基本控制在GB14925-2001要求范围内。结论北京地区实验用小型猪设施环境控制基本符合国家标准的要求,现在没有小型猪普通环境及屏障环境的国标与地标,但且忽略了小型猪不同生长阶段对环境因子的特殊要求。
- 王艳蓉孙淑华孟金萍杨旭刘云波
- 关键词：小型猪环境因子
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立被引量：1
- 2009年
- 以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)重组核衣壳蛋白(rN蛋白)为抗原,初步建立了检测PRRSV抗体的rN-ELISA方法。根据GenBank公布的PRRSV VR2332株编码核衣壳蛋白的ORF7基因序列设计合成了一对引物,成功扩增出ORF7基因。将其克隆到PET-30a构成原核表达载体,转化宿主菌BL21(DE3)并获得表达。通过SDS-PAGE和Western blot检测证实rN蛋白获得了高效表达,且具有良好的免疫学活性。以纯化的重组蛋白为抗原建立检测PRRSV抗体的间接ELISA法。试验证明,该方法与IDEXX公司生产的PRRSV抗体检测ELISA试剂盒对同批临床血清样本的检测结果完全相符,且对其他常见的6种猪疫病阳性血清检测均为阴性,无交叉反应。本研究建立的rN-ELISA方法敏感性高、特异性强,可用于猪繁殖与呼吸综合征常规诊断及流行病学的调查研究。
- 苏晓鸥乔俊文赵德明杨利峰周向梅尹晓敏杨建民
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白ORF7基因
- 实验用小型猪环境条件控制指标比较被引量：1
- 2009年
- 本文比较了中国、美国、欧洲、加拿大等国家及两个主要生产和实验企业关于小型猪环境条件指标控制情况,提出我国实验用小型猪环境条件控制标准的建议。
- 孟金萍张琨杨旭孙淑华王艳蓉刘云波
- 关键词：小型猪环境指标
- 国内外小型猪资源概况被引量：22
- 2009年
- 猪和人在解剖学、生理学上有极大的相似性,而小型猪还具有品系繁多、遗传性能稳定等诸多优点,因此,作为实验动物已经被广泛应用于生物医学研究的多个方面。本文主要介绍了从40年代末美国开始培育小型猪以来,国内外小型猪的主要品系、培育、开发研究的发展情况以及国内培育小型猪的优势。
- 王桂花尹晓敏孙霞赵德明
- 关键词：小型猪基础群实验动物
- 小型猪微卫星标记多重PCR体系的建立与应用被引量：5
- 2009年
- 目的建立实验用小型猪微卫星标记的多重PCR体系和进行实验猪群的遗传监测。方法利用3种不同荧光标记的微卫星引物结合ABI3700遗传分析仪测序的方法,通过筛选和优化反应条件,建立可用于实验用小型猪遗传质量控制的稳定的多重PCR反应体系。在此基础上进一步检测实验用小型猪近交群体的遗传变异以验证建立体系的效率。结果筛选出了2组理想的组合:组合1包括SW742、S0228和S0218座位,复性温度58℃和56℃;组合2包括S0155、SW902和S0227三个座位,复性温度为60℃和58℃。组合内不同座位标记不同的荧光染料。还以此检测了实验用小型猪群体中的遗传变异。结论初步建立了中国三种实验用小型猪微卫星标记检测的多重PCR体系,为快速、大通量、准确的小型猪遗传监测提供了初步的技术基础。
- 公维华张宁波程佳月杨述林黄宏刚冯书堂王爱德甘世祥李奎
- 关键词：微卫星多重PCR
