国家自然科学基金(30800394)
- 作品数：3 被引量：17H指数：2
- 相关作者：崔毓桂刘嘉茵马翔李瑛高莉更多>>
- 相关机构：江苏省人民医院江苏省计划生育科学技术研究所东南大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省科技厅基金江苏省医学重点学科基金更多>>
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- 人SET基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的SET基因表达产物是SET／TAF-1β蛋白，功能涉及基因表达调控、染色质修饰、翻译后修饰等生物过程，多水平、多通路地调节靶因子，其表达异常与多种疾病相关。为研究SET基因与临床多种疾病发生发展的关系，文中构建表达人SET基因的小分子干扰RNA（siRNA）重组腺病毒载体。方法根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64 bp寡核苷酸。pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后，与退火的寡核苷酸连接，构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA。该穿梭质粒经Not Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后与pAdTrack-CMV连接，构建含有绿色荧光蛋白（green fluorescense protein，GFP）报告基因的穿梭质粒PATC—H1-siRNA。分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒PATC—H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。Pac Ⅰ酶切线性化重组质粒pAd—H1-siRNA后，转染AD293细胞进行病毒包装和扩增。根据GFP报告基因的表达观察重组病毒的产生和感染效率，用Western blot检测人SET蛋白的表达水平。结果穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功；重组腺病毒载体经AD293细胞包装后可观察到GFP表达；获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞。经Western blot检测，SET基因腺病毒载体（AdH1-SiRNA／SET）感染组与未感染腺病毒载体组（空白对照）和感染对照腺病毒载体组（AdH1-SiRNA／NS）相比，SET蛋白表达水平显著降低（P〈0．05），抑制效率为50％～70％。结论成功构建了表达人SET基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA／SET，并在AD293细胞中验证其抑制SET蛋白表达的作用，为进一步研究SET基因参与多种疾病的发生发展提供了材料。
- 许波群李瑛薛凯李梅马翔刁飞扬崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：RNA干扰重组腺病毒载体
- 小鼠Hsp27基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定
- 2010年
- Hsp27是小分子量热休克蛋白亚家族的重要成员之一,主要参与细胞内蛋白质的折叠、抗凋亡、甾体激素合成、氧化应激及信号通路等生理过程。为进一步研究其生理与病理生理功能,本文构建了针对小鼠Hsp27基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体,并在AD-293细胞中与Hsp27超表达载体共同转染,观察其对Hsp27表达的影响。根据siRNA靶序列的设计要求,设计并合成针对小鼠Hsp27的siRNA靶DNA序列,克隆至穿梭载体pShuttle-H1中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在B J5183细菌中进行同源重组,转染AD-293细胞,包装得到含siHsp27的重组腺病毒,在体外与Hsp27超表达载体共转AD-293细胞。通过酶切鉴定、序列测定和W estern b lot鉴定,确定小鼠Hsp27 siRNA重组腺病毒载体构建成功,且该重组腺病毒能降低67%的Hsp27蛋白表达。本文构建的针对小鼠Hsp27基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究Hsp27基因的功能奠定了基础。
- 刘金娟崔毓桂马翔刘嘉茵
- 关键词：HSP27SIRNA腺病毒多囊卵巢综合征
- 胰岛素基因可变重复序列多态性与PCOS的相关性被引量：10
- 2010年
- 目的:探讨胰岛素基因可变重复序列(INS-VNTR)多态性与多囊卵巢综合征(PCOS)易感性之间的关系及其与PCOS发生胰岛素抵抗(IR)的相关性。方法:用聚合酶链反应-限制性片段多态性技术,检测130例PCOS患者(PCOS组)和130例非PCOS妇女(对照组)的INS-VNTR多态性。结果:2组的Ⅰ/Ⅰ、Ⅰ/Ⅲ和Ⅲ/Ⅲ基因型频率分布差别无统计学意义(P=0.196),经Logistic回归分析,Ⅲ/Ⅲ基因型并没有增加PCOS发病的危险性(OR=6.25,95%CI:0.74～52.79)。PCOS胰岛素抵抗亚组(PCOS-IR组,88例)相应位点的INS-VNTR基因型频率及等位基因频率均高于PCOS非胰岛素抵抗亚组(PCOS-NIR组,42例,P<0.05);PCOS患者中Ⅲ/Ⅲ基因型者的INS、IR状态高于Ⅰ/Ⅰ基因型者。结论:VNTR可能不是PCOS发病的易感基因,但是Ⅲ型INS-VNTR可能使PCOS患者发生IR的危险性增加。
- 张琴芬韩素萍崔毓桂李瑛马翔高莉冒韵东刘嘉茵
- 关键词：胰岛素多态现象胰岛素抗药性限制性片段长度串联重复序列
