国家教育部博士点基金(20050678004)
- 作品数：11 被引量：32H指数：3
- 相关作者：金克炜阮永华高倩闫凤彩王志强更多>>
- 相关机构：昆明医学院昆明医学院第一附属医院第二军医大学更多>>
- 发文基金：国家教育部博士点基金国家自然科学基金云南省教育厅科学研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- P53、MDM2、P21、P16在云锡矿粉诱导的人支气管上皮恶性转化细胞中的表达被引量：3
- 2007年
- [目的]研究P53通路相关蛋白在云锡矿粉诱导的细胞恶性转化过程中的变化情况。[方法]采用免疫荧光细胞化学染色技术分别检测正常人支气管上皮细胞株(BEAS-2B)、矿粉作用后第25代细胞(BEAS-MD-25)及软琼脂克隆形成细胞(BEAS-MD-C)中P53、MDM2、P21、P16的表达。[结果]P53、MDM2蛋白在BEAS-2B细胞中表达呈阴性,而在BEAS-MD-25及BEAS-MD-C细胞中均呈阳性;P21、P16蛋白在BEAS-2B细胞中表达呈阳性,随细胞转化进程表达不断下降;在BEAS-MD-25细胞中呈弱阳性;在BEAS-MD-C中呈阴性。[结论]转化细胞中P53、MDM2、P21、P16的表达异常,提示其P53通路已发生改变,第25代细胞P53蛋白的阳性表达,提示P53基因异常可能是细胞发生恶性转化的关键步骤之一。
- 周莉金克炜张天宝
- 关键词：P53通路免疫荧光细胞转化
- 个旧矿粉诱导的肺癌细胞中分化抗原9的表达及基因突变分析
- 2007年
- 目的探讨分化抗原9(CD9)在个旧矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)恶性转化为肺癌细胞过程中的异常表达和基因突变。方法以BEAS-2B为对照组(20瓶),以个旧矿粉体外诱导BEAS-2B所产生的恶性转化细胞为实验组(20瓶)。采用免疫细胞化学技术检测CD9蛋白在BEAS- 2B和恶性转化细胞中的表达。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测CD9 mRNA在BEAS-2B和恶性转化细胞中的表达;并对其RT-PCR产物进行DNA序列测定。结果CD9蛋自在BEAS-2B中的表达率(100%,20/20)与其在恶性转化细胞中的表达率(35%,7/20)差异有统计学意义(P<0.01)。CD9 mRNA在BEAS-2B中的表达强度(0.91±0.09)明显高于其在恶性转化细胞中的表达强度(0.34±0.14),差异有统计学意义(P<0.01)。DNA序列测定显示,在BEAS-2B的恶性转化细胞中CD9基因存在2处点突变,在第231位置发生G-→T转换;在第119位置发生T→A转换,而且这2处的替代引起的错译突变均导致了编码氨基酸的改变,第40位氨基酸由谷胺酰胺(Gln,Q)变为组氨酸(His,H);第3位氨基酸由缬氨酸(Val,V)变为天冬氨酸(Asp,D)。结论CD9的表达缺失或下调以及基因突变在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞的过程中可能发挥重要作用。
- 梁锐金克炜王志强畅继武马富玲王一高倩
- 关键词：矿物质肺肿瘤
- 生存素和增殖细胞核抗原在个旧矿粉诱导的肺癌细胞中的表达
- 2007年
- 背景与目的云南个旧为矿工职业性肺癌的高发区,既往本课题小组以永生化人支气管上皮细胞(i mmortalized human bronchial epithelial cells,BEAS-2B)为靶细胞,以采自井下作业面的个旧矿粉为染毒物,成功建立了个旧矿粉体外诱导的恶性转化细胞模型。本研究旨在探讨生存素(survivin)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞过程中发挥的作用。方法采用免疫荧光细胞化学和免疫组织化学技术检测survivin和PCNA在BEAS-2B及其恶性转化肺癌细胞中的表达。结果①免疫荧光细胞化学:survivin蛋白在BEAS-2B中无表达,在其恶性转化肺癌细胞中表达阳性;PCNA蛋白在BEAS-2B中低表达,在其恶性转化肺癌细胞中高表达。②免疫组织化学:survivin蛋白在BEAS-2B中无表达,显著低于在其恶性转化肺癌细胞中的表达率(85%,17/20)(P<0.001);PCNA蛋白在BEAS-2B中的标记指数(labelling index,LI)显著低于其恶性转化肺癌细胞(P<0.001);survivin表达阳性的恶性转化肺癌细胞中PCNA的LI明显高于survivin表达阴性者(P<0.001)。结论①survivin在恶性转化肺癌细胞中表达上调,提示其可能在个旧矿粉诱导BEAS-2B恶性转化为肺癌细胞的过程中发挥重要作用,为揭示个旧矿工肺癌的致癌机制提供依据,其有可能作为个旧矿工肺癌的检测和治疗的新靶点。②PCNA在恶性转化肺癌细胞中表达上调,提示细胞增殖过程可能在该恶性转化过程中发挥重要作用。③sur-vivin可能通过PCNA的介导促进细胞的增殖,二者可能在该恶性转化过程中发挥协同作用。
- 梁锐金克炜王志强赵作辉王芳高倩阮永华
- 关键词：生存素增殖细胞核抗原肺肿瘤永生化人支气管上皮细胞
- 云锡矿粉诱导永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B恶性转化被引量：8
- 2006年
- 背景与目的研究云锡矿粉对人支气管上皮细胞的致癌转化效应,以探讨云锡矿工肺癌病因及其机制。材料与方法采用永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B细胞,设200μg/ml及50μg/ml剂量的2个氧化矿染毒组和1个溶剂对照组,细胞染毒72h后,隔代染毒直至第9代。系统观察转化过程中细胞的生物学特性及血清抗性、锚着独立性生长能力等转化表型特征。结果第20代时各组细胞均未表现出血清抗性,第25代200μg/ml组细胞出现血清抗性和倍增时间增长、染色体畸变率增高;第30代时200μg/ml组细胞在软琼脂上可形成小的细胞集落,至第40代时,200μg/ml及50μg/ml剂量组细胞均能在软琼脂上形成克隆。结论云锡矿粉能体外诱发人支气管上皮细胞恶性转化。
- 周莉金克炜张天宝
- 关键词：永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B矿粉恶性转化
- 个旧矿粉诱导的支气管上皮转化细胞cDNA消减文库的构建
- 2009年
- 目的构建永生化人支气管上皮细胞BEAS-2B与其受个旧矿粉体外诱导的恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库。方法以BEAS-2B为对照组，以采自个旧井下作业面的矿粉为染毒物在体外成功诱导的恶性转化细胞为实验组，分别提取总RNA；应用SMARTcDNA合成技术，获得充足的dscDNA；应用抑制性消减杂交（SSH）技术分离BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的基因片段；再通过T／A克隆和蓝白筛选实验，克隆BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的基因片段，构建二者之间差异表达的cDNA消减文库。结果通过SSH和T／A克隆等技术成功构建了具有较高消减效率的BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库，文库经扩增后得到107个白色克隆和41个蓝色克隆。结论应用SSH技术成功构建了具有较高消减效率的BEAS-2B与其恶性转化细胞之间差异表达的cDNA消减文库，为进一步研究个旧矿粉致肺癌发生的分子生物学机制奠定了基础。
- 梁锐金克炜王志强高倩阮永华王芳
- 关键词：抑制性消减杂交支气管上皮细胞恶性转化
- 云锡矿粉诱导成纤维细胞活化蛋白表达及与上皮细胞共培养对其表达的影响
- 2010年
- 目的研究云锡矿粉诱导成纤维细胞活化蛋白(FAP)表达及与上皮细胞共培养对其表达的影响。方法选用100 mg/L的云锡矿粉处理永生化人支气管上皮细胞(BEAS-2B)及人胚肺成纤维细胞(WI-38),每次处理72 h,隔代处理直至第9代。自第11代将上述细胞分组共培养。分组如下:W组、W(B)组、W(B100)组、W100组、W100(B)组、W100(B100)组。应用免疫印迹检测第16代、26代及36代各组成纤维细胞中FAP的表达,以β-actin作为内参,结果通过Quantity One软件进行分析,FAP水平=样本FAP灰度值/同一样本β-actin灰度值。结果免疫印迹检测WI-38中无FAP表达;第16代各组WI-38均未检测到FAP表达;至第26代时,W(B)组及W(B100)组FAP仍呈阴性表达,而W100组、W100(B)组及W100(B100)组则可检测到FAP表达,但3组间表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。第36代时,W100组、W100(B)组及W100(B100)组FAP表达水平较第26代增强,但W100组和W100(B)组FAP表达水平无明显差异,惟W100(B100)组FAP表达水平明显强于前2组(P<0.05);且W(B100)组也出现了FAP表达。结论云锡矿粉能诱导WI-38表达FAP,矿粉诱导的上皮细胞可提高其表达水平。
- 边莉何永文阮永华高倩王春艳金克炜
- RAS相关区域家族与肺癌关系研究进展
- 2006年
- 闫凤彩金克炜
- 关键词：RASSF1S相抑制肿瘤细胞生长克隆形成率肺癌细胞株
- 云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化和成纤维细胞活化过程中的相互作用被引量：4
- 2009年
- 目的探讨云锡矿粉诱导人肺上皮细胞转化及成纤维细胞活化过程中的相互作用。方法常规培养永生化人支气管上皮细胞（BEAS-2B）及人胚肺成纤维细胞（WI-38），每6天传代1次；100μg／ml的云锡矿粉隔代诱导BEAS-2B及WI-38至第9代，共诱导5次，自第11代分组共培养至第40代。刀豆凝集素A及锚着独立性生长实验检测细胞恶性转化，流式细胞术检测细胞周期变化，免疫细胞化学法检测成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达。结果（1）与正常BEAS-2B细胞相比，矿粉诱导的BEAS-2B细胞单独培养至第28代细胞形态开始出现改变；与WI-38细胞共培养后，细胞形态改变提早至第20代；与矿粉诱导的WI-38细胞共培养后，细胞形态改变进一步提早至第16代。矿粉诱导的BEAS-2B细胞培养至第26代时凝集实验出现阳性；与WI-38细胞及矿粉诱导的WI-38细胞共培养后，细胞凝集时间缩短。与WI-38细胞共培养的矿粉诱导BEAS-2B及与矿粉诱导WI-38细胞共培养的矿粉诱导的BEAS-2B细胞分别在第26及第36代锚着独立性生长实验出现阳性，第36代的克隆形成率分别为6．00‰±1．00‰和15．33‰±2．52‰，且差异有统计学意义（P〈0．05）。矿粉诱导的各组上皮细胞S期细胞所占比例随培养代数增加逐渐升高，细胞发生恶性转化。（2）100μg/ml矿粉诱导的成纤维细胞培养至第26代出现α—SMA表达；与上皮细胞共培养后，成纤维细胞α-SMA表达增强，且随培养代数的增加，阳性表达细胞数明显增多，着色程度增强。结论个旧矿粉能诱导支气管上皮细胞恶性转化及成纤维细胞活化；肺上皮细胞是矿粉诱癌的主要靶细胞；肺上皮细胞的转化和成纤维细胞的活化相互影响，相互促进。
- 边莉何永文阮永华唐莹高倩王春艳金克炜
- 关键词：上皮细胞成纤维细胞
- 1例肺腺癌组织的原代培养及异种移植检测被引量：1
- 2006年
- 目的选取1例云南宣威女性肺腺癌组织进行原代培养,观察其生长增殖及异种动物接种成瘤情况,建立理想的实验模型.方法以手术切除的无菌肺癌组织标本进行原代培养,以有限稀释法获克隆化生长的肺腺癌细胞,通过光镜、生长曲线、异种动物成瘤实验、免疫组化等对其生物学特性进行分析.结果体外培养细胞生长稳定、状态良好,细胞形态学、增殖动力学实验表明该细胞系符合恶性肺腺癌细胞特征;动物接种成瘤率为100%,表明肿瘤对正常组织的侵袭能力,免疫组化结果证实瘤细胞为腺癌细胞,与原患者的病理切片相同.结论通过一系列对该细胞的体外研究证实本细胞株为恶性肺腺癌细胞,是一株具有地区特异性的肺腺癌细胞株,对研究肺癌癌变、侵袭转移、生物学特征以及开发抗肺癌新药等均有十分重要的理论和临床意义.
- 闫凤彩王秦秦阮永华马丽菊张林唐睿珠金克炜
- 关键词：肺腺癌细胞培养异种移植免疫组化
- 云南个旧和宣威地区肺癌hTERT mRNA与Mad1蛋白表达的研究被引量：1
- 2009年
- 目的研究hTERT mRNA和Mad1蛋白在个旧地区矿工肺癌及宣威地区农民肺癌组织中的表达，探讨hTERT mRNA和Mad1蛋白的相互关系。方法采用免疫组化S-P法，分别检测40例个旧地区矿工肺癌（个旧矿工肺癌组）和20例宣威地区农民肺癌（宣威农民肺癌组）以及20例正常肺组织（正常肺组织组）中Mad1蛋白的表达；采用原位杂交方法检测上述标本中hTERT mRNA的表达情况。染色阳性结果应用计算机图文分析系统进行定量分析。结果个旧矿工肺癌组和宣威农民肺癌组Mad1蛋白表达的阳性单位分别为16．77±6．01，19．36±4．54，与正常肺组织组（46．05±7．26）比较明显降低，差异有统计学意义（P〈0．01）。个旧肺癌组、宣威肺癌组Mad1蛋白表达的阳性率明显低于正常肺组织，差异有统计学意义（P〈0．01）。个旧矿工肺癌组hTERT mRNA表达的阳性单位为（72．10±13．07），宣威农民肺癌组为（74．20±15．17），明显高于正常肺组织组（10．70±2．21），差异有统计学意义（P〈0．01）。个旧肺癌组、宣威肺癌组hTERT mRNA表达阳性率明显高于正常肺组织，差异有统计学意义（P〈0．01）。hTERT mRNA和Mad1蛋白表达的阳性单位和阳性率均呈负相关关系（r^1=0．9881、r^2=0．999，P〈0．05）。结论hTERT mRNA在肺癌的发生发展中可能起重要作用，hTERT mRNA表达上调和Mad1蛋白表达缺失与肺癌的发生密切相关。
- 程锦霖阮永华高倩金克炜张林
- 关键词：肺肿瘤基因表达
