黑龙江省普通高校骨干教师创新能力资助计划(1055G059)
- 作品数：1 被引量：10H指数：1
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- 短发夹RNA对人视网膜色素上皮细胞血管内皮生长因子表达的抑制被引量：10
- 2006年
- 目的探讨针对人血管内皮生长因子(VEGF)的短发夹RNA(shRNA)在体外对视网膜色素上皮(RPE)细胞VEGF表达的影响。方法用酶辅助显微分离法分离人RPE细胞,并用细胞角蛋白和S-100进行免疫组化鉴定。设计针对人VEGF的短发夹RNA(shRNAs,P1,P2),P3为阴性对照即不含特异性shRNA,P1、P2退火后双链DNA连接到质粒pSilencer4.1-CMV的BamHⅠ和H indⅢ双酶切位点。转化细菌后,提取的质粒用EcoRⅠ和SamⅠ进行酶切鉴定。实验分5组,第1组:RPE细胞中在含有100μmol/L CoC l2,10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中培养30 h;第2组:在常规含有10%FBS的DMEM培养基中培养30 h;第3、4、5组:分别P1、P2、P3转染细胞24 h后在含有100μmol/L CoC l2的10%FBS的DMEM培养基中培养30 h;用免疫印迹法检测各组细胞VEGF表达水平。结果培养的细胞用细胞角蛋白和S-100免疫组化染色阳性。提取的质粒经酶切后片断相对分子质量分别为3300和1600,说明质粒成功地提取和纯化。VEGF表达水平1组明显高于2、3、4组(均P<0.001)。乏氧(2组与1组比)可以明显增加RPE细胞中VEGF的表达。3、4组(P1和P2)对VEGF表达抑制分别为65.9%和52.4%。5组与1组比差异无统计学意义(P=0.147)。各组间β肌动蛋白表达量差异无统计学意义。结论针对人VEGF的特异性shRNA可以明显降低人RPE细胞VEGF的表达,为RNA干扰治疗新生血管性眼病,尤其是脉络膜新生血管奠定了基础。
- 蔡春梅孙葆忱刘旭阳
- 关键词：RNA干扰血管内皮生长因子A色素上皮细胞视网膜
