国家自然科学基金(30560109)
- 作品数：6 被引量：18H指数：2
- 相关作者：陈创夫郭志儒魏风李有文张辉更多>>
- 相关机构：石河子大学塔里木大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划塔里木大学校长基金更多>>
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- 山羊痘病毒疫苗株TK基因的克隆与序列分析被引量：1
- 2010年
- 用绵羊睾丸细胞培养山羊痘病毒疫苗株G14-STV44-55,提取其基因组为模板,设计TK基因的特异性引物并进行PCR扩增,获得了2405bp的DNA片段,并将PCR产物克隆至pGEM-TEasy载体。酶切鉴定、PCR鉴定和测序结果表明,成功获得了TK基因,获得的TK基因内存在唯一的ACC65I酶切位点和3′末端早期转录终止信号TTTTTN(T)T。核苷酸和氨基酸同源性分析表明,弱毒疫苗株G14-STV44-55TK基因与基因Bank中发表的13个参考毒株的同源性在96%和95%以上,说明羊痘病毒TK基因具有高度的保守性。
- 李有文魏风郭志儒陈创夫
- 关键词：山羊痘病毒TK基因
- 山羊痘病毒疫苗株RR基因的克隆与序列分析
- 2009年
- 用绵羊睾丸细胞培养山羊痘病毒疫苗株G14-STV44-55,提取其基因组为模板,设计还原酶(RR)基因的特异引物进行PCR扩增,并克隆至pGEM-TEasy载体,蓝白斑筛选,酶切和测序签定,并对目的基因进行了序列分析。结果获得了RR基因的阳性克隆PGM-RR,DNA片段长度2 669 bp,内存在BglII等4个单一限制性内切酶酶切位点,编码区5′端含有早期转录终止信号TTTTTN(T)T。RR基因核苷酸和推测的氨基酸同源性与GENEBANK中发表的9个参考毒株的同源性分别在97%和99%以上,说明羊痘病毒RR基因具有高度的保守性。
- 李有文魏风陈创夫王远志张辉任艳郭志儒
- 关键词：山羊痘病毒
- 绵羊原代睾丸细胞培养及形态学观察被引量：1
- 2008年
- 用胰酶消化法分离培养绵羊睾丸细胞,分别对原代细胞244、8、72、96h的细胞形态用倒置显微镜和电子显微镜进行观察,并对13、、51、2月龄的绵羊的睾丸细胞活力进行生长速度和传代能力进行研究。结果表明,培养前期细胞多呈三角形活多角形,后期细长呈梭形,并且睾丸的年龄越小,生长速度越快,传代次数越多,细胞活力越强。
- 李有文魏风郭志儒陈创夫
- 关键词：细胞培养细胞形态
- 布鲁氏菌omp31基因重组山羊痘病毒的构建
- 目的构建布鲁氏菌omp31基因重组山羊痘病毒,并检测其遗传稳定性和特异性表达情况,为今后研究布鲁氏菌的新型疫苗奠定基础。方法将扩增出的OMP31基因克隆到GTPV(Goatpoxvirus)重组载体上,经PCR、测序鉴定...
- 邵雪花陈创夫乔军张辉刘佳旭
- 关键词：羊种布鲁氏菌外膜蛋白
- 文献传递
- 表达羊传染性脓疱病毒F1L基因的重组山羊痘病毒的构建与特性鉴定被引量：8
- 2014年
- 【目的】本文旨在构建可表达羊传染性脓疱病毒F1L基因的重组山羊痘病毒,并对其生物学特性进行初步研究。【方法】将羊传染性脓疱病毒F1L基因与转移载体pUC-TK12连接,同时插入LacZ报告基因和一双向启动子;将重组转移载体转染已接种山羊痘病毒的BHK-21细胞,通过蓝白斑筛选、纯化,对重组病毒进行连续传代培养,应用PCR、间接免疫荧光和Western免疫印迹等方法进行鉴定,并对重组病毒进行不同温度、酸碱度、有机溶剂和紫外照射等处理,进行TCID50评价。rGpv-F1L免疫小鼠后,经酶联免疫吸附实验检测其特异性抗体水平。【结果】成功构建重组病毒转移载体pTL-F1L,将转移载体转染BHK-21细胞后,通过蚀斑纯化获得了可稳定遗传的rGpv-F1L。间接免疫荧光和Western免疫印迹检测发现其可稳定表达F1L蛋白。55℃30min或紫外照射1h即可灭活重组病毒,且其对强酸、强碱、有机溶剂等较敏感。接种重组山羊痘病毒的小鼠40d内机体可持续产生高水平的特异性抗体,与接种Gpv病毒组相比差异极显著(P<0.01)。【结论】本文获得了可稳定表达羊传染性脓疱病毒F1L的重组山羊痘病毒疫苗候选株,其具有良好的抗原性和生物学活性,为同时预防羊传染性脓疱病和羊痘提供新途径。
- 张倩王震张辉李瑞芳纪太旺赵庆亮陈创夫
- 关键词：重组山羊痘病毒生物学特性
- 山羊痘病毒培养及其细胞病变观察研究被引量：8
- 2009年
- [目的]研究不同处理的细胞对病毒生长的影响。[方法]制备原代绵羊睾丸细胞,并用原代、传代和冻存3种处理的睾丸细胞对我国山羊痘病毒疫苗株分别进行培养,并用倒置显微镜和电子显微镜观察。[结果]病毒在3种处理的细胞上生长出现细胞病变的时间略有差异,并且细胞病变也不尽相同。[结论]不同处理的细胞出现的细胞病变不同。
- 李有文魏风郭志儒陈创夫
- 关键词：山羊痘病毒睾丸细胞细胞病变
- 山羊痘病毒G14-STV44-55疫苗株表达载体的构建
- 2011年
- PCR扩增山羊痘病毒疫苗株G14-STV44-55的TK(Thymidine kinase)基因作为侧翼序列;用XhoⅠ/NotⅠ消化含有报告基因的质粒pLSEG得到痘苗病毒(Vaccinia virus,VV)p7.5启动子调控大肠杆菌黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(E.coli.gpt)作为报告基因;人工合成VV I1L启动子用于调控表达外源基因,用Overlap PCR的方法将VV I1L启动子和VV p7.5启动子调控的gpt连接但使两启动子转录方向相背,并在VV I1L启动子下游引入XhoⅠ位点作为外源基因的插入位点,构建成表达载体元件I1L-P7.5-GPT。将I1L-P7.5-GPT插入TK基因的Acc65Ⅰ位点,构建成表达载体。将构建的载体转染山羊痘病毒G14-STV44-55株感染的羔羊睾丸细胞,用含有霉酚酸(Mycophenolic acid,MPA)等筛选试剂的培养基筛选重组山羊痘病毒(rGTPV)。结果显示,构建成以TK基因为侧翼、以VV I1L启动子调控目的基因,以gpt为报告基因的表达载体pGEM-TK-I1L-GPT,成功筛选到表达gpt的rGTPV,rGTPV至少可稳定传代15代。结果表明,构建了我国山羊痘病毒G14-STV44-55疫苗株的表达载体;TK基因是GTPV G14-STV44-55疫苗株的复制非必需区,以TK基因为插入位点获得的重组病毒可稳定传代15代以上。
- 李有文魏风陈创夫王远志张辉任艳郭志儒
- 关键词：山羊痘病毒启动子报告基因
