国家自然科学基金(31101788)
- 作品数：6 被引量：9H指数：2
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- 相关机构：内蒙古农业大学内蒙古农牧业科学院中华人民共和国农业部更多>>
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- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病毒SU蛋白与Hyal-2蛋白的结合域研究被引量：3
- 2016年
- 试验证明绵羊的Hyal-2不仅可以与绵羊肺腺瘤病毒的囊膜蛋白Env结合,也可以单独与绵羊肺腺瘤病毒SU蛋白亚基结合。为了进一步研究绵羊Hyal-2与SU蛋白可能结合的区域,应用在线生物学软件预测了SU蛋白的膜外区(对应编码基因序列238bp^867bp)将之前已经构建的缺失型SU蛋白真核表达载体pEGFP-C1-(su1-su5)与pDsRed-monomer-N1-hyal-2共转染293T细胞,运用激光共聚焦方法结合免疫共沉淀方法确定SU蛋白和Hyal-2蛋白可能结合区域。激光共聚焦显微镜观察结果表明,SU1-SU5与Hyal-2均存在细胞内共定位。免疫共沉淀方法检测缺失型蛋白SU1-SU5与绵羊Hyal-2均不存在相互作用。su基因所缺失区域238bp^867bp对于SU蛋白与受体的结合都是必不可少的。
- 张月梅赵世华么宏强马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒
- 小鼠金黄色葡萄球菌性关节炎模型的建立及其病理学研究被引量：3
- 2013年
- 为了研究金黄色葡萄球菌的致病机理,试验将金黄色葡萄球菌接种于小鼠关节腔内,成功地建立了小鼠金黄色葡萄球菌性关节炎的病理模型,通过测定足趾厚度及组织病理学检查对所建立的病理模型进行了动态研究。结果表明:从接种金黄色葡萄球菌第4天开始,小鼠关节部位明显肿胀,足趾厚度显著升高,关节组织病变明显,关节滑膜淤血、出血、水肿,并可见大量炎性细胞浸润,滑膜细胞增生并且排列疏散、紊乱等病理变化。说明试验成功建立小鼠金黄色葡萄球菌性关节炎的病理模型。
- 斯日古楞么宏强员宝山
- 关键词：小鼠金黄色葡萄球菌关节炎组织病理学
- 绵羊肺腺瘤病毒缺失型SU蛋白真核表达载体的构建被引量：1
- 2017年
- 试验证明绵羊透明质酸酶2(hyaluronidase 2,Hyal-2)可以作为绵羊肺腺瘤病毒的受体与绵羊表面蛋白(surface protein,SU)亚基结合。为了进一步研究绵羊Hyal-2与SU蛋白可能结合的区域,运用生物信息学软件预测了SU蛋白的膜外区部分,然后分别构建了一系列缺失型真核表达载体,将缺失型SU蛋白真核表达载体pEGFP-C1-(su1~su5)转染293T细胞,激光共聚焦显微镜观察结果显示:SU1-SU5融合蛋白定位于细胞质,Western blot结果显示在66 000处出现阳性条带,表明成功构建了SU蛋白缺失型真核表达载体。
- 张月梅马学恩么宏强赵世华
- 关键词：真核表达载体激光共聚焦
- 绵羊透明质酸酶2的基因分子克隆及序列分析被引量：1
- 2012年
- 根据已发表的绵羊透明质酸酶2(Hyal2)(GenBank中登陆的NM_001009754)基因序列设计两对引物,运用重叠PCR(overlapping PCR)方法,扩增出透明质酸酶2基因,将其亚克隆于PMD19-T载体中,并进行序列测定与分析。该基因包含一个由1431bp组成的完整开放阅读框(ORF),编码476个氨基酸。序列比较显示:该基因与模板核苷酸同源性为99.8%,氨基酸同源性99%。系统进化分析,显示目的基因与牛的基因亲缘关系较近。生物信息学分析表明,该基因编码的蛋白质为亲水性蛋白。
- 张月梅么宏强斯日古楞马学恩
- 关键词：分子克隆生物信息学分析重叠PCR
- 绵羊透明质酸酶-2的真核表达及鉴定被引量：2
- 2012年
- 为了构建绵羊透明质酸酶-2(hyaluronidase 2,Hyal-2)的真核表达载体并实现其在牛乳腺上皮细胞内瞬时表达,根据GenBank中绵羊Hyal-2基因序列(登录号:NM_001009754)设计2对引物,并分别在前段上游和后段下游引物5′端引入HindⅢ酶切位点和BamHⅠ酶切位点,同时在上游引物酶切位点后加入KOZAK序列,进行分段PCR扩增。以扩增的两段产物为共同模板运用重叠(overlapping)PCR技术扩增Hyal-2基因全长。通过连接反应将双酶切并纯化后的目的片段克隆于真核表达载体pEGFP-C1上,并通过脂质体转染法将构建好的真核表达载体转染牛乳腺上皮细胞,运用RT-PCR及West-ern blotting方法分别从核酸及蛋白质水平验证其表达。经测序分析,目的片段与模板核苷酸同源性为99%,氨基酸同源性为99%,且片段插入方向正确。RT-PCR及Western blotting方法检测均出现目的条带,证明成功构建了绵羊透明质酸酶-2的真核表达载体,并在牛乳腺上皮细胞中获得表达。
- 张月梅么宏强斯日古楞马学恩
- 关键词：真核表达RT-PCRWESTERNBLOTTING
- 绵羊肺腺瘤病毒衣壳蛋白杂交瘤细胞系的建立
- 2013年
- 为了制备特异性的抗绵羊肺腺瘤病毒(jaagsiekte sheep retrovirus,JSRV)内蒙株衣壳蛋白(CA)的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞系,以原核表达CA蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠,经4次免疫后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞经杂交瘤技术进行融合,同时以表达蛋白作为包被抗原进行特异性ELISA检测,共筛选到6株阳性杂交瘤细胞株。经过3次亚克隆后,最终得到了5株能稳定分泌抗体的单细胞克隆株;再利用CA真核表达蛋白以间接免疫荧光法,对此5株杂交瘤细胞进行进一步的特异性鉴定。结果显示,有3株具有特异性强荧光反应,也能检测到目的基因的表达产物。本试验获得了3株稳定分泌抗JSRV-NM株CA蛋白McAb的杂交瘤细胞系,为建立检测病原的特异性诊断方法、分析JSRV-NM株CA蛋白的功能及鉴定B细胞抗原表位等奠定基础。
- 斯日古楞么宏强马学恩
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒衣壳蛋白杂交瘤技术酶联免疫吸附试验
