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重组前强啡肽基因35型腺病毒载体的构建: 2009年; 目的构建含前强啡肽（PDP）基因的重组35型腺病毒载体（Ad5／F35）。方法以pUC57-PDP重组质粒为模板扩增PDP基因，将回收的聚合酶链反应（PCR）产物片段克隆入pDC316载体，获得重组质粒pDC316-PDP。骨架质粒pBHG—fiber5／35和穿梭质粒pDC316-PDP共转染293细胞，同源重组产生Ad5／F35-PDP。经PCR鉴定目的基因的表达。结果PCR表明Ad5／F35-PDP质粒构建正确。结论获得的Ad5／F35-PDP可以用于转基因治疗的实验研究。; 项红兵杨叶洋戴双华肖建斌程飚高巨招伟贤; 关键词：腺病毒科

右美沙芬对慢性吗啡耐受小鼠脊髓STAT3表达的影响被引量：1: 2009年; 目的观察吗啡耐受形成过程中腹腔注射右美沙芬对小鼠腰段脊髓背角STAT3表达的影响，探讨STAT3与吗啡耐受的关系。方法清洁级昆明种小鼠24只，体质量18～22g，随机分为g组，每组6只，A组（对照组）：皮下注射生理盐水10mL／kg，30min后腹腔注射生理盐水20mL／kg，每天重复2次，连续9d；B组（慢性吗啡耐受模型组）：皮下注射吗啡10mg／kg，30min后腹腔注射生理盐水20mL／kg；C，D两组：吗啡用药均同B组，吗啡注射30min后分别腹腔注射50，100mg／kg右美沙芬。各组小鼠隔天第1次注射后1h观测辐射热痛阈值变化。第9天最后1次注射后取小鼠脊髓L4-6节段，采用免疫组织化学方法测定腰段脊髓背角浅层STAT3免疫反应阳性产物的变化。结果与给药第1天比较，B组给药第5，7，9天时最大镇痛效率（MPE）降低，C组和D组给药第7，9天时MPE降低（P〈0．05）。与A组比较，B组STAT3表达上调，MPE升高（P〈0．01）。与B组比较，C组和D组STA13表达下调，MPE升高（P〈0．05）。结论腹腔注射右美沙芬抑制了慢性吗啡耐受模型小鼠腰段脊髓背角STAT3表达，STAT3信号通路的激活参与了慢性吗啡耐受的维持。; 廖敏项红兵肖建斌招伟贤; 关键词：吗啡右美沙芬脊髓 STAT3

携带前强啡肽基因的Ad5F35重组腺病毒制备及鉴定: 2009年; 目的用Ad5F35载体制备携带前强啡肽基因的重组腺病毒Ad5F35-PDP并对其进行鉴定。方法利用NheI和Agel分别对合成的目的基因prodynorphin聚合酶链反应（PCR）产物和pDC316-LacZ—a载体质粒进行双酶切。将PDP目的基因片段和线性化的pDC316连接，克隆构建pDC316-PDP。pDC316-PDP与腺病毒骨架pBHG-fiber5／35共转染293细胞制备Ad5F35-PDP重组腺病毒，收获并纯化病毒，检测重组病毒滴度，运用PCR进行鉴定。结果编码PDP的基因序列经测序鉴定证实与GeneBank中的一致，pDC316-PDP构建成功。pDC316-PDP与腺病毒骨架共转染293细胞后见明显的毒斑，说明两者在293细胞中同源重组并包装成功。经PCR证实Ad5F35．PDP重组腺病毒构建完成。病毒滴度为1×10^12v．p．／ml。结论本实验成功制备了含PDP全序列的高滴度、高纯度的Ad5F35-PDP重组腺病毒，为下一步进行该重组病毒生物安全性能和生物学功能研究及今后应用Ad5F35-PDP重组腺病毒对吗啡成瘾患者进行基因治疗奠定了基础。; 肖建斌项红兵司俊丽招伟贤戴双华高巨; 关键词：重组腺病毒基因治疗

股骨癌痛模型病理机制及治疗研究进展被引量：1: 2008年; 临床上乳腺癌、前列腺癌和肺癌等癌症的股骨转移较多见。研究表明,骨髓、矿化骨和骨膜中均存在降钙素基因相关肽、神经纤维丝H抗体和酪氨酸羟化酶免疫反应阳性纤维;骨膜是神经纤维支配最密集的组织,而骨髓是接受感觉神经纤维和交感神经纤维总数最多的组织。近年来许多学者相继应用局部注射方法将不同的肿瘤细胞移植至股骨骨髓腔内,成功建立了股骨癌痛模型,在此平台上应用疼痛行为学和组织学检测等指标评价缓激肽B1受体拮抗剂、抗神经生长因子、阿片类药、非甾体类抗炎药、辣椒素受体-1拮抗剂、放射治疗、二膦酸盐和骨保护素等对股骨癌痛的治疗效应,为癌症股骨转移的研究开拓了新思路。; 项红兵肖建斌招伟贤; 关键词：股骨骨癌痛动物模型病理机制

携带前强啡肽基因重组质粒的构建及鉴定被引量：7: 2008年; 强啡肽（dynorphin）是作用于κ-阿片受体的神经肽，广泛分布于外周和中枢神经系统，涉及到许多生理和病理变化如吗啡耐受和依赖等。我们利用前强啡肽基因（prodynorphin gene）构建pUC57-prodynorphin重组质粒为下一步探讨其在吗啡耐受和依赖中的作用奠定了基础。; 肖建斌程飚项红兵招伟贤戴双华; 关键词：基因重组质粒前强啡肽 Κ-阿片受体吗啡耐受病理变化神经肽

细胞移植镇痛的研究进展被引量：2: 2007年; 近年来已经证实将能够持续分泌脑啡肽、β-内啡肽等神经活性镇痛物质的细胞移植入宿主的中枢神经系统如腰段蛛网膜下腔,这些能分泌抗伤害分子的细胞如同一个生物微泵,发挥缓解疼痛的药理效应。目前,细胞镇痛研究为开发治疗疼痛新疗法有着良好的前景。本文总结近年来细胞镇痛的新进展。; 肖建斌项红兵; 关键词：细胞阿片肽

表达前强啡肽基因的Ad5型腺病毒载体的构建及鉴定被引量：6: 2008年; 目的构建且鉴定含前强啡肽基因（prodynorphin）的血清5型腺病毒载体（Ad5）。方法应用分子生物学方法将前强啡肽基因序列克隆入腺病毒穿梭质粒pDC316-PDP，后者与骨架质粒共转染HEK293细胞，包装得到含前强啡肽转基因的腺病毒Ad5-PDP。用聚合酶链反应（PCR）方法对转基因病毒进行鉴定，TCID50法测定病毒滴度。结果PCR法证实转基因正确插入了Ad5型病毒基因组内，且没有野生型病毒污染，病毒滴度为1×10^12 v．p．／mL。PCR鉴定Ad5-PDP重组成功。结论获得的Ad5-PDP滴度高，感染性好，可以用于转基因治疗的实验研究。; 项红兵肖建斌招伟贤高巨徐珉; 关键词：强啡肽腺病毒

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广东省自然科学基金(06024112)