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甲型副伤寒杆菌ompA基因分布及重组表达产物的免疫学鉴定被引量：6: 2010年; 目的构建甲型副伤寒杆菌ompA基因原核表达系统，确定其重组表达产物rOmpA免疫原性和保护作用，检测甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率。方法采用PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增ompA基因，T-A克隆后测序并构建ompA基因原核表达系统。采用SDS-PAGE和Bio—Rad凝胶图像分析系统检测rOmpA表达情况及其产量，采用免疫扩散法、微量肥达试验和Western blot鉴定其抗原性和免疫反应性。采用PCR检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株ompA基因携带率。采用小鼠感染模型，了解rOmpA对甲型副伤寒杆菌50001株感染的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较，所克隆的ompA基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100％。rOmpA表达量约为细菌总蛋白的65％。rOmpA能与其兔抗血清和甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生免疫反应（Western blot），并可在家兔中诱导产生抗体。94．9％（93／98）甲型副伤寒杆菌临床菌株含有ompA基因。100μg和200μg rOmpA对感染小鼠的免疫保护率分别为41．7％（5／12）和58．3％（7／12）。rOmpA免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清对各副伤寒杆菌H抗原的凝集效价为1：5～1：40。结论ompA基因在甲型副伤寒杆菌临床菌株中分布广泛。rOmpA有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用，可考虑为甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原。; 蒋锦琴阮萍丁威孙爱华毛亚飞严杰; 关键词：甲型副伤寒杆菌免疫原性免疫保护性

甲型副伤寒杆菌鞭毛蛋白H1a基因原核表达系统构建及其表达产物的免疫原性和保护作用被引量：4: 2006年; 目的构建甲型副伤寒杆菌(Salmonella paratyphi A)H1a基因原核表达系统,确定表达产物rH1a免疫原性和保护作用,检测甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达情况。方法采用高保真PCR从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中扩增H1a基因,T-A克隆后测序,构建H1a基因原核表达系统pET32a-H1a-E．coli BL21DE3。采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检查rH1a表达情况,Ni-NTA亲和层析法收集rH1a。采用Western blot鉴定其免疫反应性和免疫原性。建立PCR和ELISA检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株H1a基因携带和表达频率。观察rH1a对甲型副伤寒杆菌50001株感染小鼠的免疫保护作用。结果与报道的相关序列比较,所克隆的H1a基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为99．59％。rH1a表达量为细菌总蛋白的60％左右。甲型副伤寒杆菌全菌抗血清能识别rH1a并与之结合。rH1a免疫家兔可产生抗体。100％(98／98)甲型副伤寒杆菌临床菌株均含有H1a基因并表达H1a。500μgrH1a灌喂或皮下注射免疫小鼠受甲型副伤寒杆菌50001株攻击后的存活率均为50．0％,若加入5μg rLTB,存活率分别上升至75．0％和66．7％。结论本研究成功地从甲型副伤寒杆菌临床菌株中构建了H1a基因高效原核表达系统。rH1a有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用。甲型副伤寒杆菌临床菌株广泛存在H1a基因并高频率表达。; 阮萍林晓骥李晶周晓辉严杰; 关键词：甲型副伤寒杆菌原核表达免疫原性

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浙江省医药卫生科学研究基金(2006A116)

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