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鳜皮肤黏液IgM样蛋白的纯化被引量：8: 2007年; 对经嗜水气单胞菌全菌疫苗浸泡免疫后的鳜皮肤黏液中的免疫球蛋白采用盐析法、重组蛋白A(HiTrap rProteinA Sepharose)亲和层析法及鼠抗鳜血清IgM单克隆抗体偶联的Sepharose 4B亲和层析法分离纯化,并通过SDS-PAGE及Western-blot技术对纯化蛋白的部分特性进行分析比较。结果表明:50%硫酸铵溶液可以沉淀黏液中大部分蛋白,条带仍较多,约十几条,其中含有72 ku和29 ku的条带,因此仅可作为免疫球蛋白粗提的方法;Sepharose 4B亲和层析法所提取鳜黏液Ig经SDS-PAGE检测,只含有72 ku和29 ku 2个条带(初步认为鳜黏液Ig的重链和轻链),与鳜血清IgM的重、轻链分子量相同;rProteinA亲和层析法所提蛋白除具有上述重链(72 ku)和轻链(29 ku)外,还含有43 ku的蛋白带(可能为鳜黏液Ig另外一种形式的重链)。Western-blot显示,兔抗鳜Ig多克隆抗体可与72 ku及43 ku条带发生发应。两种亲和法所提蛋白纯度较高,但含量较低,条带较淡,仅可作为实验室小量提纯鳜黏液Ig的有效方法。; 罗霞潘厚军巩华石存斌刘瑞明吴淑勤; 关键词：盐析

实时荧光定量PCR检测鳜IgM mRNA标准品质粒的构建被引量：2: 2008年; 利用SYBR Green I荧光定量PCR技术,建立鳜IgM-DNA定量标准品的制备方法。从浸泡免疫后的鳜头肾中提取总RNA逆转录合成cDNA,对目的片段进行PCR扩增、电泳纯化、T-A克隆及测序鉴定。将所得预期质粒梯度稀释后构建标准曲线并进行融解曲线分析。结果表明,当标准品的浓度在3.29×102～3.29×108拷贝/μL时,模板浓度与循环阈值(Ct)间的线性关系良好,相关系数r2达到0.999;融解曲线分析显示具特异的单个峰,表明扩增产物特异性非常好。此法制备的重组质粒标准品可用于对鳜IgM基因的转录水平进行测定。; 刘雨果潘厚军陈偿巩华石存斌吴淑勤; 关键词：实时荧光定量PCR

鳜胸腺组织学结构及抗体分泌细胞的免疫组织化学被引量：4: 2007年; 使用常规组织学和免疫组织化学方法对鳜胸腺进行研究。观察到鳜胸腺位于鳃盖与背的联合处,呈三角形,对称分布;胸腺实质随年龄增长分叶逐渐明显,大体可分三个区,外区、中区和内区,中区和内区分别相当于哺乳动物的皮质区和髓质区。外区主要由扁平上皮细胞和粘液细胞组成,中区可观察到大量网状纤维和淋巴细胞,内区主要由排列较疏松的淋巴细胞组成。此外,光镜下还观察到哈氏小体和髓质上皮囊的存在。免疫组织化学结果显示胸腺中抗体分泌细胞主要分布在外区和中区,胸腺分叶部位尤为明显。阳性细胞胞膜着色明显,呈清晰棕黄色。; 马红常藕琴石存斌潘厚军吴淑勤李湘林; 关键词：胸腺组织学免疫组织化学

硬骨鱼类黏膜免疫机理研究概况被引量：16: 2006年; 鱼类黏膜是抗原、病原等异己物质进入机体的屏障,在免疫反应中占有重要的地位。文章总结了硬骨鱼类黏膜免疫研究所涉及的组织器官,如皮肤、鳃和肠道等,以及在这些组织器官中与黏膜免疫功能相关的细胞;描述了黏膜免疫反应中的抗原在黏膜表面被抗原递呈细胞和MHC分子摄取、递呈给效应位点淋巴细胞,引起免疫应答,发生免疫保护记忆的过程;从鱼类血清和黏液中的免疫球蛋白结构、黏液抗体的峰值以及来源等方面,讨论了黏膜免疫和系统免疫之间的关系,分析了存在观点分歧的原因,并提出了鱼类黏膜免疫的研究方向。; 巩华吴淑勤潘厚军; 关键词：硬骨鱼类黏膜免疫机理

温度对鳜皮肤黏膜抗体产生的影响被引量：3: 2007年; 应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）技术测定不同水温下鳜经嗜水气单胞菌GYK1株全菌灭活疫苗浸泡免疫后皮肤黏液中抗体,以研究抗体动态变化,揭示温度对抗体产生的影响。结果表明：27.0-29.8℃水温（下称“较高温”）下,鳜皮肤黏膜抗体滴度于第7天达到峰值211,而水温介于19.8-23.9℃（下称“较低温”）时,抗体滴度于第11天达到峰值26,说明温度较高时,抗体形成快,峰值出现时间早,并且抗体滴度明显升高。另取不同温度下经上述疫苗浸泡免疫的鳜皮肤黏液,采用硫酸铵盐析、离心、浓缩等生物化学技术粗提鳜皮肤黏液中的免疫球蛋白,SDS-PAGE检测发现,较高水温下,高渗免疫组（加10 mg/mL食盐）鳜皮肤黏液蛋白中目标条带（72×103和29×103）深度较其他3个实验组（同温度下全菌组、较低水温下高渗及全菌组）有所增加,ELISA检测该组抗体效价为211。; 罗霞潘厚军巩华石存斌吴淑勤; 关键词：嗜水气单胞菌疫苗浸泡免疫温度影响

鳜浸泡嗜水气单胞菌全菌疫苗后皮肤黏液抗体的变化被引量：19: 2007年; 应用间接ELISA方法,研究经嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)疫苗浸泡免疫后鳜(Siniperca chuatsi)皮肤黏液中抗体消长规律,以揭示鳜局部黏膜免疫在免疫保护中的作用及浸泡免疫的保护效果。结果表明,鳜皮肤黏液中抗体滴度在免疫后第7天达到峰值211,抗体从开始形成到消失持续21 d;添加佐剂(IMS1312、葡聚糖、莨菪碱、食盐)可以提高鳜皮肤黏液及血清中抗体滴度和相对免疫保护率,其中添加IMS1312组免疫保护率最高,达77.8%,免疫保护与抗体滴度成正相关(R2=0.79,P<0.05);以溶菌酶为代表的非特异性免疫在免疫后1周内即抗体未形成时,对鱼体起主要保护作用。此外,通过比较鳜血清与皮肤黏液中的抗体消长规律,发现血清中抗体滴度峰值出现时间较迟(第14天),抗体持续时间较长(42 d),初步推断鳜皮肤黏膜中可能存在相对独立于全身免疫系统的局部黏膜免疫系统。; 罗霞潘厚军巩华刘瑞明石存斌吴淑勤; 关键词：嗜水气单胞菌疫苗浸泡免疫

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广东省自然科学基金(04001503)