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国家自然科学基金(39970630)
国家自然科学基金(39970630)
- 作品数：6 被引量：86H指数：3
- 相关作者：陈家堃蒋义国陈学敏安社娟吴中亮更多>>
- 相关机构：广州医学院华中科技大学广东医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结晶型硫化镍及反式-BPDE恶性转化16HBE细胞hMSH2基因甲基化的研究被引量：1
- 2005年
- 背景与目的:对结晶型硫化镍(Nickelsulfide,NiS)及反式二氢二醇环氧苯并芘(anti_7,8,_dihydrodiol_9,10_epoxidebenzo[a]pyrene,BPDE)恶性转化及成瘤的人支气管上皮细胞(Humanbronchialepithelial,16HBE)hMSH2基因启动子甲基化状况及其mRNA表达进行研究,探讨镍及反式_BPDE的表遗传致癌机制。材料与方法:采用甲基化特异性PCR(Methylation_specificPCR,MSP)法和RT_PCR法检测结晶型NiS及反式_BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子甲基化状况及其mRNA表达,与非转化的16HBE细胞进行比较;并用去甲基化因子5_Azac(5_Aza_2′_deoxycytidine)处理有异常甲基化的细胞。结果:发现结晶型NiS及反式_BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子区存在CpG岛的高甲基化;与非转化16HBE细胞比较,转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因mRNA表达下降;有异常甲基化的细胞经去甲基化处理后甲基化消失。结论:结晶型NiS及反式_BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子区CpG岛的高甲基化使其mRNA表达下降,并可能导致hMSH2基因表达抑制,这可能是结晶型NiS及反式_BPDE诱导16HBE细胞转化和成瘤的一种表遗传致癌机制。甲基化的可逆性对今后研究其表型逆转以及药物治疗提供了重要依据。
- 刘莉莉陈家安社娟吴中亮
- 关键词：HMSH2基因甲基化
- 恶性转化人支气管上皮细胞基因组甲基化观察被引量：2
- 2006年
- 目的对反式二氢二醇环氧苯并芘(anti-BPDE)和结晶型硫化镍(NiS)恶性转化人支气管上皮细胞(Hu-man bronchial epithelia,16HBE)基因组DNA甲基化状况进行研究,寻找DNA甲基化异常的基因片段,探讨反式-BPDE和NiS的表遗传致癌机制。方法采用限制性指纹识别技术(MSRF),对反式-BPDE和NiS分别诱导转化及裸鼠成瘤的4种人支气管上皮细胞株基因组进行分析;对异常甲基化基因阳性片断采用TA克隆技术构建测序载体,对测序结果进行同源性分析比较。结果发现结晶型NiS恶性转化人支气管上皮细胞基因组存在高甲基化的DNA片段,其中一基因片段与编码鼻咽癌易感性蛋白ANKRD11基因序列99%同源。另一基因片段与HOXA3基因序列99%同源;未发现反式BPDE恶性转化人支气管上皮细胞基因组DNA异常甲基化基因片段。结论结晶型NiS恶性转化人支气管上皮细胞DNA的高度甲基化可能导致基因表达抑制。可能是结晶型NiS致癌的一种表遗传机制;反式BPDE致癌过程可能与基因组磷酸胞苷酰(CpG)岛甲基化异常关系不明确。
- 赵艳丰陈家堃吴中亮雷毅雄蒋义国纪卫东王敏安社娟
- 关键词：DNA甲基化基因组
- 苯并(a)芘代谢物反式二羟环氧苯并芘诱发人支气管上皮细胞恶性转化被引量：68
- 2001年
- 以不同浓度的苯并 (a)芘代谢物反式二羟环氧苯并芘 (BPDE)多次处理人支气管上皮细胞 16HBE ,并观察转化细胞的恶性特征。发现BPDE可诱导 16HBE细胞恶性转化 ,形成转化灶。转化灶细胞失去接触抑制 ,排列紊乱 ,无方向性 ,交叉重叠生长。转化的细胞可在软琼脂上生长 ,各浓度处理组细胞集落形成率均显著高于对照组 ,有良好的剂量—反应关系。经BPDE处理的细胞在裸鼠体内成瘤 ,病理学诊断为鳞状细胞癌。本实验以反式BPDE成功地诱发了人支气管上皮细胞恶性转化 ,为后期进一步研究其致癌的分子机制、寻找致癌相关基因提供了理想的生物学材料。
- 蒋义国陈家堃陈学敏
- 关键词：苯并(A)芘二羟环氧苯并芘人支气管上皮细胞恶性转化支气管癌
- 硫化镍诱导转化人支气管上皮细胞基因组DNA甲基化的研究被引量：8
- 2004年
- 目的 对结晶型硫化镍诱导转化及成瘤的人支气管上皮细胞 ( 16HBE)基因组DNA甲基化状况进行研究 ,以寻找DNA甲基化异常的基因片段 ,并探讨镍的外遗传致癌机制。方法 抽提基因组DNA后 ,采用限制性内切酶MseI单独酶切或限制性内切酶MseI与BstuI双重酶切后 ,其酶切产物采用甲基化敏感的限制性指纹识别技术 (MSRF)进行分析 ,显示的异常甲基化基因片断 ,采用TA克隆技术构建测序载体 ,对测序结果进行同源性分析比较。结果 发现结晶型NiS诱导转化及成瘤的 16HBE细胞基因组DNA存在高甲基化的DNA片段。其中一基因片段与位于 16q2 4.3编码鼻咽癌易感性蛋白基因ANKRD11同源 ( 99% ) ,另一基因片段与HOXA3基因序列同源 ( 99% )。HOXA3在脊椎动物中编码转录因子 ,编码调控基因表达 ,形态发生和变异的DNA结合转录因子。结论 结晶型NiS诱导转化及成瘤的 16HBE细胞基因组DNA的高度甲基化可能导致基因表达抑制 ,这可能是结晶型NiS诱导 16HBE细胞转化和成瘤的一种外遗传机制。
- 赵艳丰陈家堃吴中亮雷毅雄安社娟吴根容
- 关键词：DNA甲基化基因组
- cDNA代表性差异分析法筛选二羟环氧苯并芘致癌相关基因片段被引量：1
- 2002年
- 目的 采用cDNA代表性差异分析法 ,分离二羟环氧苯并芘诱导恶性转化的细胞与对照组细胞之间的差异表达基因。方法 先从细胞中提取mRNA并合成双链cDNA ,双链DNA以Sau3AI内切酶消化 ,连接接头并经PCR扩增。以BPDE诱导恶变细胞的cDNA为“检测子”、以对照组细胞cDNA为“驱赶子”进行消减杂交。结果 经 3轮消减杂交后分离出 5个cDNA片段 ,在琼脂糖凝胶上清晰显示 2 10bp以下的 5条条带 ,这些片段分别与总RNA作Northern印迹杂交证实它们均来自BPDE诱变的细胞。结论 cDNA代表性差异分析法是筛选化学致癌相关基因的有效。
- 蒋义国陈家堃陈学敏易菲冯苏妹
- 关键词：二羟环氧苯并芘
- 二羟环氧苯并芘诱导致癌相关差异表达cDNA序列的克隆被引量：10
- 2002年
- 目的 克隆苯并 (a)芘代谢物二羟环氧苯并芘 (dihydroxyepoxybenzopyrene ,BPDE)诱导的人上皮细胞致癌相关差异表达cDNA序列。方法 以BPDE诱导恶性转化的人支气管上皮细胞株16HBE为模型 ,采用cDNA代表性差异分析方法 ,比较转化细胞及正常对照细胞间基因表达的差异 ,分离恶变细胞中差异表达的cDNA片段。分离的片断分别与pGEM T载体连接并转化入JM10 9细菌中 ,对质粒DNA进行测序。以BLASTN程序进行GenBank的同源性检索。结果 克隆的 13条cDNA序列中 ,有 5条为新基因序列 ,已在dbest数据库中注册 ,其登录号分别为BG35 46 91、BG35 46 92、BG35 46 93、BG35 46 94和BG35 46 95 ;8条cDNA有同源序列 ,分别与核糖体蛋白S2 3、MLN137、ACTN4、转移生长因子及G蛋白基因等有同源性。结论 克隆的 13条cDNA序列可能与BPDE诱发细胞恶性转化密切相关。
- 蒋义国陈家堃陈学敏冯苏妹易菲
- 关键词：致癌CDNA序列二羟环氧苯并芘基因克隆
