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PRRSV SX-1株的分离与NSP2和ORF5基因的克隆及变异分析被引量：5: 2009年; 从山东莘县恒顺猪场发病猪群中分离到PRRSV病毒(SX-1株)。用RT-PCR法对该分离株的NSP2和ORF5基因进行了扩增和克隆,并对其进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV SX-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与JXA1毒株相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.8%、94.9%、88.9%,氨基酸同源性分别为99.0%、93%、87.5%。基因系统发育树分析结果显示,SX-1与JXA1、HUN株的亲缘关系很近,与CH-1a亲缘关系较近,与VR2332、CC-1、RespPRRS/ReproMLV等毒株处于不同分支。; 张金强吴家强朱向福于美芳白华孟斌任素芳王文志王金宝; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 ORF5基因

两株高致病性PRRSV ORF6和ORF7基因克隆及序列分析被引量：6: 2008年; 应用RT—PCR方法从实验室分离的两株高致病性PRRSV SX、ZQ株中扩增出ORF6和ORF7，将其分别克隆、测序。用DNAStar软件分析所测序列，并与VR-2332株、LV株、周边国家及国内分离株进行核苷酸和推导氨基酸同源性比较，并绘制系统进化树，结果ORF6、ORF7核苷酸与北美洲型的同源性为91．1％～100％，与欧洲型的同源性为66．2％～70．7％，推导氨基酸与北美洲型的同源性为91．2％～100％，与欧洲型的同源性为62．3％～82．3％。证明新分离到的PRRSVSX株、ZQ株仍属北美洲型。SX株ORF6、ORF7核苷酸与国内新分离到的高致病性PRRSV JXA1株同源性分别为99．8％、100％；ZQ株ORF6、ORF7核苷酸与国内新分离到的高致病性PRRSV JXA1株同源性分别为99．6％、99．7％。; 时建立李俊徐绍建赵鸿雁张秀美王金宝; 关键词：高致病性PRRSV ORF6 ORF7

PRRSV SX-1株的分离与NSP2基因和ORF5基因的克隆及变异分析: ＜正＞1材料与方法1.1材料山东省某大型猪场的发病死亡猪病料;细胞、载体、菌种Marc-145细胞、受体菌E.coliDH5a。根据GeneBank中已发表的猪繁殖与呼吸综合征病毒JXA1毒株,设计合成目的基因引物。1....; 张金强吴家强朱向福于美芳白华孟斌任素芳牛钟相; 文献传递

多重RT-PCR检测PRRSV和CSFV及PRRSV ORF5基因遗传变异分析被引量：4: 2011年; 根据猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪瘟病毒（CSFV）的基因组序列设计了2对特异性引物,建立了同时检测PRRSV和CSFV的多重RT-PCR方法。2008年1月至2009年12月期间,采集山东各地71个不同规模猪场及农村散养户212份病料,采用建立的多重RT-PCR技术同时检测PRRSV和CSFV的感染状况。检测结果显示,病料中高致病性PRRSV占57.1%（121/212）,CSFV占29.2%（62/212）。应用RT-PCR方法扩增山东不同地区16株PRRSV的ORF5基因,并进行了序列分析。结果表明,16株PRRSV的ORF5基因核苷酸同源性为97.0%~100.0%;与参考变异毒株JXA1、传统毒株VR2332核苷酸同源性分别为98.0%~99.5%和86.4%~87.7%。推导的氨基酸序列分析表明,16株毒株GP5蛋白氨基酸不存在缺失,但存在位点突变。12株在非中和表位29位点与准种进化34位点发生了突变,分别由V→A和N→S;1株在非中和表位185位点发生突变,由A→V;这与2007年流行的PRRSV毒株JXA1、HUN等不同。; 张金强吴家强孟斌郭文龙王希辉李坤于江刘少宁张玉玉王金宝; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ORF5基因

猪繁殖与呼吸综合征病毒WF-1株的分离鉴定及NSP2和ORF5基因的变异分析被引量：2: 2010年; 从山东某大型猪场患"猪高热病"的病料中分离到1株病毒,该病毒可在Marc-145细胞上增殖,产生细胞病变。经RT-PCR鉴定证明,该病毒为美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV),将其命名为WF-1株。用RT-PCR法分别扩增该分离株的NSP2基因和ORF5基因,并进行核苷酸序列测定和分析。结果表明,PRRSV WF-1株的NSP2发生30个氨基酸的不连续缺失,缺失位置与PRRSV参考变异株JXA1相同;ORF5基因与JXA1、CH-1a、VR2332核苷酸同源性分别为98.0%、94.2%、86.4%,氨基酸同源性分别为97.5%、94.0%、87.5%。基因遗传进化树分析结果显示,WF-1株与2006～2008年期间分离的JXA1、SX-1等高致病性变异株的亲缘关系很近,与1996年分离的中等毒力毒株CH-1a亲缘关系较远,与VR2332、CC-1、MLV等弱毒株或疫苗株处于不同的分支。; 李坤吴家强张金强李俊于江刘洋张玉玉刘少宁王兆周顺王金宝; 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2基因 ORF5基因

猪繁殖与呼吸综合征病毒传统毒株与变异毒株的鉴别诊断被引量：1: 2009年; 从山东各地猪场采集了50份疑似猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)感染的病料,采用RT-PCR技术扩增出PRRS病毒(PRRSV)的ORF7基因和Nsp2基因,并对Nsp2基因进行了序列同源性比较和遗传进化树分析,从RT-PCR阳性病料中进行病毒分离,然后应用Nsp2单克隆抗体对分离毒株进行鉴别诊断。结果表明,从8份病料中同时扩增出病毒的ORF7基因和Nsp2基因,序列分析显示其中6株病毒的Nsp2缺失30个氨基酸,与Nsp2单克隆抗体不发生反应,属于变异毒株;另外两株病毒的Nsp2未见氨基酸缺失,与Nsp2单克隆抗体发生特异性反应,属于传统毒株。序列同源性和系统进化分析表明,6株变异毒株与其他高致病性毒株亲缘关系很近,而与经典毒株的遗传距离较远。; 于美芳吴家强张金强李俊张秀美景田军王雪红王金宝; 关键词：繁殖与呼吸综合征病毒变异株

PRRSV山东变异缺失株SX-1的全基因序列分子特征分析被引量：2: 2011年; 对从山东某发病猪场采集的猪繁殖与呼吸综合征疑似病料中分离到的PRRSV病毒(SX-1株),应用RTPCR方法分段扩增出PRRSV SX-1毒株的各基因片段,扩增后的产物分别克隆于pMD-18T载体鉴定后测序。序列号GQ875656。序列分析结果表明SX-1株基因组全长15 320nt(不包括poly尾),包含9个开放阅读框,5′UTR长189 nt,3′UTR长150 nt;SX-1株在分子遗传演化上属于PRRSV变异毒株,与参考毒株JXA1的核苷酸同源性为98.9%;与CH-1a和VR2332的同源性为94.8%和89.5%;而与LV的同源性仅为59.3%。基因系统发育树分析结果显示,SX-1与JXA1、GDBY1株的亲缘关系很近,与CH-1a亲缘关系较近,与VR2332、CC-1、RespPRRS/Repro MLV等毒株处于不同的分支。; 张金强吴家强石峰孟斌刘少宁牛钟相; 关键词：PRRSV 全基因组

山东PRRSV流行株ORF5、ORF6、ORF7基因序列的遗传演化和系统发育关系: 采用RT-PCR技术对2001～2007年分离自山东地区10株(ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ、SD1、SD2、SD3、SD4、SD5、SD6和SD7)猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)进行ORF5、OR...; 李俊徐绍建时建立吴家强温建新王金宝; 关键词：PRRSV 高致病性PRRSV ORF5 ORF6 ORF7; 文献传递

山东PRRSV流行株ORF5、ORF6、ORF7基因序列的分子特征被引量：1: 2009年; 采用RT-PCR技术对2001-2007年分离自山东地区10株（ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ、SD1、SD2、SD3、SD4、SD5、SD6和SD7）猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）进行ORF5、ORF6和ORF7基因的扩增、克隆和测序,与已知序列的毒株的相应片段进行同源性分析比较,并对其分子特征进行分析。结果表明：该10株病毒仍属北美洲型,其中2001-2002年分离的SD1株、SD2株和2006年分离的SD6株核苷酸序列之间的ORF5、ORF6、ORF7同源性分别为99.2%,99.8%,100%,均与北美洲原型代表株（VR-2332株）和疫苗毒MLVRe-spPRRS Repro USA遗传距离较近,同属一大分支;2006-2007年分离的PRRSV ShanDong-3、SD-JN、SD-ZQ、SD3,SD4,SD5,SD7分离株ORF5、ORF6、ORF7同源性分别为97.8%-100%,99.4%-99.8%,99.2%-99.7%,均与国内96年Ch-1a和2002年HB-1株及2006年分离鉴定的国内高致病性分离株（JXA1、Shanghai、HEB1）同属一个大的分支。首次证实目前山东省同时存在高致病性PRRSV和传统PRRSV,并且有由传统PRRSV向高致病性PRRSV演化的趋势。; 李俊徐绍建时建立吴家强温建新王金宝; 关键词：PRRSV 高致病性PRRSV ORF5 ORF6 ORF7 分子特征

副猪嗜血杆菌荧光定量PCR检测技术的建立与应用被引量：18: 2010年; 根据GenBank中的副猪嗜血杆菌(HPS)的infB基因的序列(DQ781808.1),利用分子生物学软件Premier 5.0设计一对特异性引物,建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测HPS的技术。试验采用煮沸法从HPS培养物中提取DNA,进行PCR扩增。将鉴定正确的目的基因片段克隆入pMD18-T载体中,转化大肠杆菌DH5α,经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为阳性标准品。结果表明,该方法对HPS具有良好的特异性,不与其它猪源细菌发生交叉反应,其敏感性比常规PCR高100倍,而且非常稳定,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%。临床应用表明本方法的建立实现了对HPS的快速诊断和定量的检测。; 于江吴家强张玉玉王兆李俊丁鹏李坤刘洋张金强徐绍建刘少宁周顺王文志王金宝; 关键词：副猪嗜血杆菌 SYBR I 荧光定量PCR

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