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口服DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1_((n1-7))抗小鼠结肠癌肝转移被引量：5: 2006年; 背景与目的:血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其主要受体血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2)在肿瘤血管生成过程中起着重要作用。VEG-FR-2在鼠中为flk-1,本研究以减毒沙门氏菌SL3261为载体制备了抗肿瘤血管生成口服DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1(n1-7),研究该疫苗抗小鼠结肠癌肝转移的作用,并探讨其可能的作用机制。方法:RT-PCR法扩增鼠VEGFR-2胞外cDNA全长序列flk-1(n1-7),构建重组质粒pcDNA3.1+/flk-1(n1-7)。将重组质粒转化减毒沙门氏菌SL3261,制备成以SL3261为载体的口服DNA疫苗。将18只小鼠随机分组,口服接种疫苗两周后,用CT-26细胞建立结肠癌肝转移动物模型,15d后处死小鼠,体视学方法计数肝脏的肿瘤结节数目。流式细胞仪检测小鼠外周血CD4+细胞和CD8+细胞变化。结果:构建成重组质粒pcDNA3.1(+)/flk-1(n1-7),制备成以SL3261为载体的口服DNA疫苗pcD-NA3.1(+)/flk-1(n1-7)。疫苗组小鼠肝脏内的肿瘤转移病灶明显低于对照组,P<0.05。结论:成功构建了重组质粒pcDNA3.1(+)/flk-1(n1-7),制备成以SL3261为载体的口服DNA疫苗pcDNA3.1(+)/flk-1(n1-7)。这种疫苗能抑制小鼠结肠癌的肝脏转移。; 陈明清杜伟王熙才伍治平陈艳王志强许岩; 关键词：VEGFR-2 FLK-1 DNA疫苗结肠癌

以血管内皮生长因子及血管内皮生长因子受体为靶点的抗肿瘤血管生成的治疗进展被引量：3: 2008年; 肿瘤生长、浸润和转移都依赖于肿瘤血管生成,而肿瘤血管生成又受多种因子影响.血管内皮生长因子(VEGF)是最重要的血管生成因子,可特异性作用于血管内皮细胞生长因子受体(VEGFR),通过促进内皮细胞增殖,增加血管通透性,而诱导肿瘤血管生成.因而以VEGF及VEGFR为靶点抗肿瘤血管生成已越来越成为人们研究的热点.对以VEGF及VEGFR为靶点抗肿瘤血管生成的治疗进展作一综述.; 李淼陈明清; 关键词：血管内皮生长因子血管内皮生长因子受体抗血管生成肿瘤

抗肿瘤血管生成VEGFR2 DNA疫苗的构建被引量：1: 2006年; 目的构建一种新的抗肿瘤血管生成DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1(n1-4).方法采用RT-PCR技术,从BALB/c胎鼠组织中扩增出鼠血管内皮生长因子受体flk-1胞外区1-4个袢的cDNA片段,并将其插入真核表达载体质粒pcDNA3.1+中,构建成重组质粒pcDNA3.1+/flk-1(n1-4),经DNA序列分析证实后,将重组质粒经脂质体法转染真核表达系统COS-7细胞,通过W estern b lot实验检测重组质粒在真核表达系统COS-7细胞中蛋白的表达.结果RT-PCR扩增产物为1 248 bp大小的基因片段,经过DNA序列分析证明与Gene Bank所公布的flk-1胞外区1-4结构域碱基一致,成功构建了重组质粒pcDNA3.1+/flk-1(n1-4),并且该重组质粒在真核表达系统COS-7细胞中成功得到表达.结论成功地制备了抗肿瘤血管生成DNA疫苗pcDNA3.1+/flk-1(n1-4),为进一步开展有关抗肿瘤血管生成的动物实验和临床应用奠定了基础.; 陈明清王志强杜伟许岩王熙才伍志平; 关键词：血管内皮生长因子受体2 FLK-1 DNA疫苗抗肿瘤血管生成

表达血管内皮生长因子受体2胞外全长片段的重组鼠沙门氏菌对小鼠肿瘤的预防作用: 2008年; 口服重组疫苗菌疫苗SL3261-pcDNA3.1+/VEGFR2(n1-7).通过PCR扩增检测真核表达载体中真核启动子CMV;通过透射电子显微镜下检测重组疫苗菌形态和鞭毛结构,观察连续传代后重组疫苗菌内目的基因能够稳定表达且不影响重组疫苗菌的生长特性.重组疫苗菌经由灌胃对小鼠进行基因免疫后,透射电子显微镜下在小鼠的肝、脾、小肠、大肠组织中可检测到减毒沙门氏菌的分布.2周后用CT-26小鼠结肠腺癌细胞进行攻击,疫苗组小鼠肿瘤生长明显受抑制,且生存期远远超过对照组小鼠(P<0.05),免疫组化显示免疫组小鼠肿瘤组织内CD4+及CD8+T细胞浸润.肿瘤组织超微结构显示疫苗组小鼠肿瘤细胞分化较两对照组为好.本研究证实外源性目的基因能够在鼠减毒沙门氏菌中长期稳定表达,且不影响沙门氏菌的生长特性;并且该重组疫苗菌可将具有治疗性目的基因带入机体并产生抗瘤效应而本身对机体无明显的毒性效应,为减毒沙门氏菌作为口服基因疫苗的载体及其在体内的分布代谢提供了理论依据,为肿瘤的预防和治疗提供一条简便、安全、有效的途径.; 杨军董坚普苹王志强洪敏陈明清; 关键词：减毒沙门氏菌血管内皮生长因子受体2 基因治疗

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云南省自然科学基金(2005C0073M)