国家质检总局科技计划项目(2012IK018) 作品数:7 被引量:18 H指数:3 相关作者: 岳志芹 刘荭 郑小龙 赵玉然 李八方 更多>> 相关机构: 山东出入境检验检疫局 深圳出入境检验检疫局 青岛农业大学 更多>> 发文基金: 国家质检总局科技计划项目 公益性行业科研专项 山东省自然科学基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
白斑综合症病毒超分支滚环检测试纸的构建及应用 被引量:1 2014年 依据白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)的囊膜蛋白VP28基因核苷酸序列设计特异的锁式探针,建立了WSSV超分支滚环扩增检测方法并构建试纸条.结果表明,WSSV超分支滚环扩增锁式探针在T4DNA连接酶作用下37℃连接30min,而后在Bst DNA聚合酶大片段作用下61℃反应50min,即能够实现病毒靶序列的有效检出.灵敏度实验表明,WSSV超分支滚环扩增试纸最低检出限为10拷贝/μL,是常规PCR(聚合酶链式反应)法灵敏度的100倍.特异性实验表明,该方法能够保证对WSSV的特异性检测.利用该试纸检测68份虾样本,与PCR方法检测结果基本一致,但更为灵敏和直观. 赵玉然 尹伟力 岳志芹 李八方关键词:锁式探针 对虾白斑综合症病毒 鲤春病毒血症病毒新型液相芯片检测技术的建立 被引量:3 2013年 为建立检测鲤春病毒血症病毒(SVCV)的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中SVCV的G基因进行序列分析,设计SVCV特异性引物和探针并标记生物素,偶联荧光编码微球后与SVCV病毒RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。结果表明液相芯片检测体系能够正确的检测出SVCV。病毒核酸的最低检出量为10pg,检测特异性高,初步建立了检测SVCV的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体全新快速高通量检测平台奠定基础。 尹伟力 方绍庆 刘宁 岳志芹 刘荭 耿金培 许红岩关键词:鲤春病毒血症病毒 液相芯片 超分支滚环试纸检测虾传染性皮下及造血组织坏死病毒 2014年 依据传染性皮下及造血组织坏死病毒(infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus,IHHNV)的非结构蛋白NS1基因序列,设计特异的锁式探针,建立IHHNV病毒超分支滚环扩增(hyper-branched rolling circle amplification,HRCA)检测方法并构建试纸条.结果表明,IHHNV HRCA试纸的检测限可以达到10拷贝/μL,较常规PCR法高约2个数量级,且能够保证对IHHNV的特异性检测.利用该试纸条对国产与进口的42份虾样本进行IHHNV检测,结果显示,HRCA试纸条在灵敏度上优于常规PCR,且方法直观、更易于结果判定. 赵玉然 尹伟力 岳志芹 王莹 李八方关键词:锁式探针 液相芯片技术同时检测真鲷虹彩病毒和锦鲤疱疹病毒方法的建立 被引量:6 2014年 为建立一种同时检测真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中真鲷虹彩病毒的CP基因和锦鲤疱疹病毒的TK基因进行序列分析,设计真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。试验结果表明,液相芯片检测体系能够正确的检测出真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒。真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒病毒核酸的最低检出量为10pg和100pg,检测特异性高,说明初步建立了同时检测真鲷虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体快速高通量检测平台奠定基础。 尹伟力 耿金培 刘宁 岳志芹 郑小龙 刘荭 许红岩关键词:锦鲤疱疹病毒 液相芯片 传染性造血器官坏死病毒液相芯片检测技术 被引量:1 2015年 用DNAStar7.0软件对GenBank中IHNV的N基因进行序列分析,设计IHNV特异性引物并标记生物素,将探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号,建立了传染性造血器官坏死病毒(IHNV)的液相芯片快速检测技术。结果表明液相芯片检测体系对IHNV病毒核酸的最低检出量为100pg,且特异性高,与其他病毒无交叉反应。应用建立的液相芯片技术检测鱼类中IHNV,并与RT-PCR方法进行比较,检测结果基本一致,但该方法比RT-PCR法更灵敏。表明初步建立了检测IHNV的液相芯片技术,为进一步构建其他水生动物病原体快速高通量检测平台提供参考。 尹伟力 林超 刘宁 贾鹏 岳志芹 孙涛 刘荭关键词:液相芯片 液相芯片技术同时检测对虾桃拉病毒和虾黄头病毒的研究 被引量:3 2014年 为建立一种同时检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒的液相芯片快速检测技术,用DNAStar软件对GenBank中对虾桃拉病毒的CP2基因和虾黄头病毒的N基因进行序列分析,设计对虾桃拉病毒、虾黄头病毒特异性引物并标记生物素。探针氨基化修饰,与荧光编码微球偶联后与对虾桃拉病毒、虾黄头病毒病毒RT-PCR产物杂交反应,用液相芯片仪器检测荧光信号。该检测体系对对虾桃拉病毒、虾黄头病毒病毒核酸检测灵敏度高,其最低检测限为100pg,且与白斑病毒、鲤春病毒血症病毒、传染性造血器官坏死病毒核酸等无交叉反应。该方法灵敏度及特异性高,为同时快速检测对虾桃拉病毒、虾黄头病毒提供了简捷快速的技术手段。 尹伟力 张四化 岳志芹 郑小龙 刘荭关键词:液相芯片 迟缓爱德华氏菌可视化核酸试纸条检测方法的研究 被引量:4 2018年 为建立迟缓爱德华氏菌的快速检测方法,本研究根据迟缓爱德华氏菌溶血相关基因eha设计保守引物,建立迟缓爱德华氏菌快速、可视化核酸试纸条检测技术。试验结果显示,该技术快速、灵敏、具有良好的特异性,灵敏度可达到30CFU/mL,比琼脂糖凝胶成像检测技术灵敏度要高近10倍。迟缓爱德华氏菌可视化核酸试纸条检测方法的成功建立对水产养殖过程中迟缓爱德华氏菌病防治具有重要的意义。 房敬真 房保海 徐守振关键词:迟缓爱德华氏菌