湖南省自然科学基金(05JJ30043)
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 相关作者：肖建华焦海春胡杰何涛君马安更多>>
- 相关机构：南华大学北京市丰台区南苑医院浙江省医学科学院更多>>
- 发文基金：湖南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- Foxp3在小鼠1型糖尿病模型中的表达情况研究被引量：2
- 2009年
- 目的:研究Foxp3在小鼠1型糖尿病模型中的表达情况,并探讨其在1型糖尿病发病机制中的作用。方法:利用链脲佐菌素(STZ)致诱小鼠1型糖尿病模型,半定量RT-PCR检测脾脏Foxp3mRNA的表达,Westernblot法检测脾脏Scurfin蛋白的表达,流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞亚群比例。结果:模型组Foxp3mRNA及其蛋白产物Scurfin的表达短期内上升,约在7天左右开始下降,到30天左右低于对照组(P<0.05)。7天内,CD4+CD25+Treg细胞亚群比例在模型组与对照组大致相等,而7天后,其比例在模型组逐渐下降(P<0.05)。结论:Foxp3的表达异常,使CD4+CD25+Treg细胞亚群比例下降,以致不能抑制效应性CD4+T细胞的增殖对胰岛的破坏,此机制参与了1型糖尿病的发生。
- 焦海春肖建华崔彦芬胡杰何涛君
- 关键词：FOXP3CD4+CD25+TREG细胞1型糖尿病发病机制
- 小鼠Foxp3抗血清的制备及应用被引量：1
- 2008年
- 目的:制备高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并初步应用于正常小鼠组织的Foxp3表达的鉴定。方法:构建重组质粒pGEX-6p-2/Foxp3,并转化至E.coliBL21(DE3)中进行大量诱导表达,用纯化的重组融合蛋白免疫新西兰兔,制备抗血清。以制备的抗血清为一抗,Western blot检测小鼠组织的Foxp3蛋白的表达。结果:SDS-PAGE及Western blot鉴定,诱导表达及纯化的重组融合蛋白能被抗GST单克隆抗体(mAb)识别,在Mr45000附近有特异条带,与预期融合蛋白大小一致,获得的抗血清效价在1∶12800以上,该抗血清能特异性识别NIH3T3细胞中表达的Foxp3蛋白。Westernblot鉴定结果显示在脾脏、胸腺、淋巴结中Foxp3蛋白有较高表达,胃也有少量的表达,而骨骼肌、脂肪组织未见表达。结论:制备了高效价的特异性小鼠Foxp3抗血清,并可用于正常小鼠组织的Foxp3蛋白的表达鉴定,为进一步研究Foxp3奠定了实验基础。
- 焦海春肖建华何涛君胡杰崔彦芬
- 关键词：FOXP3CD4^+抗血清制备
- IPS-1基因缺失突变体对IFN-β诱生作用及抗HSV-1病毒作用的影响
- 2009年
- 目的：初步研究缺失300—444位氨基酸突变体△IPS-1对IFN-β诱生作用及抗HSV-1病毒作用的影响，进而确定该部位对IPS-1发挥正常功能的作用。方法：通过重叠延伸PCR法获得缺失300～444位氨基酸的△IPS-1，构建突变重组质粒pEF—BOS—FLAG—△IPS-1，并经酶切及测序鉴定。采用磷酸钙体外转染HEK293T真核细胞。经Western blot检测蛋白的表达；ELISA检测细胞上清中IFN—β分泌量；HSV-1病毒感染分别转染了pEF—BOS—FLAG／IPS-1、pEF—BOS—FLAG／△IPS-1质粒的HEK293T细胞，空斑检测各转染细胞组不同时间段细胞上清的病毒滴度。结果：成功构建了缺失300～444位氨基酸的IPS-1基因重组真核表达载体pEF—BOS—FLAG／△IPS-1；与转染pEF—BOS—FLAG／IPS-1质粒组相比转染了pEF—BOS—FLAG／△IPS-1的细胞在不同时间段其上清中IFN—β分泌量有一定量的减少；空斑测定结果表明转染了pEF—BOS—FLAG／△IPS-1质粒组细胞中病毒滴度明显高于pEF—BOS-FLAG／IPS-1质粒组。结论：△IPS-1与IPS-1相比能使HEK293T细胞IFN—β分泌量明显减少，△IPS-1不能完全抑制HSV-1感染细胞产生的细胞病变效应，该突变体抗HSV-1病毒作用有一定程度的减弱。
- 马安肖建华
- 关键词：CPE
