国家自然科学基金(30900679)
- 作品数：9 被引量：18H指数：2
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- miR-138靶基因hTERT的生物信息学预测及鉴定
- 2013年
- 目的预测并鉴定miR-138的靶基因人端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)。方法采用生物信息学技术,预测miR-138与hTERT 3'UTR结合位点及结合后稳定性。分别采用RTqPCR、Western blot技术检测过表达miR-138后MKN-45细胞内hTERT在mRNA与蛋白水平的变化。采用双荧光素酶实验及突变实验,验证miR-138与hTERT mRNA的结合位点。结果生物信息学技术预测显示,miR-138可稳定结合于hTERT 3'UTR。miR-138过表达后可明显抑制MKN-45细胞内hTERT蛋白表达水平(P<0.01),但对hTERT mRNA水平无显著影响(P>0.05)。双荧光素酶实验证实miR-138可稳定结合于hTERT 3'UTR相应位点。结论 miR-138通过直接结合于靶基因hTERT 3'UTR抑制hTERT蛋白表达。miR-138可能成为基于miRNA的肿瘤基因治疗的新靶标。
- 陈陵陈先华梁光萍范亚川王国威宋航邹利全
- 关键词：微RNAS端粒逆转录聚合酶链反应
- 微小RNA-29a对人胃癌细胞裸鼠移植瘤生长的影响被引量：4
- 2014年
- 目的 观察微小RNA（miR）-29a对人胃癌SGC-7901细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法 以磷酸盐缓冲液（PBS）为空白对照,以负载cel-miR67的复制缺陷型腺病毒（Ad-cel）为阴性对照,注射负载miR-29a的复制缺陷型腺病毒（Ad-miR29a）液于移植瘤内,观察移植瘤生长曲线和抑瘤率;采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测移植瘤内miR-29a表达丰度;采用免疫组织化学技术检测CD34表达以计算移植瘤内微血管密度（MVD）.结果 与PBS组比较,Ad-miR29a组移植瘤内miR-29a表达显著上调（3.06±0.73比1.00±0.21,P＜0.01）,而Ad-cel组与PBS组比较差异无统计学意义（P＞0.05）;Ad-miR29a组移植瘤生长速度低于PBS组,而Ad-cel组与PBS组差异无统计学意义（P＞0.05）;于第5周末Ad-miR29a组抑瘤率达49.30％;Ad-miR29a组的移植瘤内MVD显著低于PBS组（21.3±8.1比42.6±11.2,P＜0.01）,而Ad-cel组与PBS组比较差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 miR-29a可显著抑制裸鼠胃癌移植瘤生长,其机制可能为抑制移植瘤内MVD,miR-29a有望成为新型的胃癌基因治疗靶标.
- 陈陵王宗华宋航黄一王国威王仙园任辉
- 关键词：微RNAS胃癌微血管密度
- 负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒对人肝癌细胞株增殖的影响
- 2015年
- 目的包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-mi R149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响。方法全基因合成micro RNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒;采用MMT方法检测Ad-mi R149对人肝癌细胞株增殖的影响。结果成功包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒,采用倍比稀释法检测病毒滴度为5×109 pfu/ml。采用电子显微镜技术,观察到HEK293细胞中大量包装病毒颗粒。采用PCR扩增,Ad-mi R149可获得腺病毒及micro RNA-149特异片段,而对照AdLac Z只能扩增出腺病毒特异片段;采用MTT方法发现,Ad-mi R149可显著抑制肝癌细胞株增殖。结论成功包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒并初步证实其对肝癌细胞增殖的抑制作用。
- 王洪斌王宗华陈俊颖邹利全宋航陈陵
- 关键词：人胚肾293细胞腺病毒微小RNAS肝癌
- hTERT启动子特异驱动IL-24重组腺病毒的包装及鉴定
- 2014年
- 目的包装并鉴定人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子特异驱动白介素-24(IL-24)的重组复制缺陷型腺病毒。方法全基因合成优化后的hTERT启动子,插入质粒pGL3-basic的多克隆位点(pGL3-phTERT);从人外周血单核细胞扩增IL-24,插入pGL3-phTERT质粒的hTERT启动子下游获得pGL3-phTERT-IL24;随后将phTERT-IL24插入pShuttle中间质粒,使用AdEasyTMAdenoviral Vector System包装Ad-phTERT-IL24重组腺病毒;同时包装CMV启动子驱动IL-24的腺病毒载体为阴性对照(Ad-CMV-IL24),以空载腺病毒Ad作为空白对照。用20 MOI重组腺病毒感染SGC-7901、MKN-45、HF细胞,采用PCR及Western blot检测IL-24在RNA及蛋白水平的表达。结果成功包装Ad-hTERT-IL24重组腺病毒。感染Ad-hTERT-IL24后,hTERT阳性肿瘤细胞内IL-24表达显著上调,但hTERT阴性的HF细胞则无IL-24表达;感染阴性对照Ad-CMV-IL24后,hTERT阳性或阴性细胞内均有IL-24表达,感染空白对照Ad后,hTERT阳性或阴性细胞内均无IL-24表达。结论 AdhTERT-IL24腺病毒载体可有效介导IL-24特异表达于hTERT阳性肿瘤细胞内。
- 邹利全曹亚玲黄茂涛宋航黄一李学成游斌陈陵
- 关键词：人端粒酶逆转录酶启动子
- 腺病毒介导miRNA-138抑制人胃癌BGC-823细胞增殖的机制研究被引量：1
- 2014年
- 目的探讨负载miRNA-138(miR-138)的重组复制缺陷型腺病毒对人胃癌BGC-823细胞株增殖能力的影响及可能的机制。方法将负载miR-138的重组腺病毒感染人胃癌BGC-823细胞株,采用荧光实时定量PCR检测miR-138表达丰度;采用CCK8方法检测细胞生长曲线;采用Transwell方法检测细胞侵袭能力。结果与Ad-LacZ对照组相比,感染Ad-miR138后,BGC-823细胞内miR-138表达丰度明显升高,差异有统计学意义(1.07±0.07 vs.4.89±0.45,P<0.05);第6天吸光度明显下降,差异有统计学意义(0.52±0.06 vs.0.77±0.06,P<0.05);细胞侵袭能力亦显著下降,差异有统计学意义(32.00±11.00 vs.56.00±12.00,P<0.05)。结论 miR-138体外可显著抑制人胃癌BGC-823细胞增殖及侵袭能力。
- 范亚川梁光萍陈先华胡春燕邹利全李学成陈陵
- 关键词：腺病毒科胃肿瘤微RNAS
- miR-29通过ITGB1抑制胃癌侵袭、转移的分子机制被引量：11
- 2013年
- 目的观察miR-29对胃癌细胞体外侵袭力的影响,探讨miR-29通过ITGB1调节胃癌侵袭和转移的具体机制。方法通过基因芯片筛选胃癌与癌旁组织中差异性表达的miRNA;采用生物信息学预测ITGB1调控相关miRNA,通过比对上述2个结果,筛选出miR-29;进一步以miR-29慢病毒及miR-29mimics过表达miR-29后,用Western blot检测胃癌细胞中ITGB1的表达变化;采用双荧光素酶实验分析miR-29与ITGB1的作用机制;采用Transwell侵袭实验及划痕实验检测miR-29慢病毒感染后细胞体外侵袭能力的变化;qRT-PCR检测60例胃癌患者癌组织和癌旁组织中miR-29的表达差异,并分析miR-29的表达与肝癌患者临床病理之间的关系。结果基因芯片及生物信息学预测发现miR-29在胃癌组织里高表达,同时又可能调控ITGB1;双荧光素酶实验证实miR-29可以结合在ITGB13'UTR,miR-29慢病毒及miR-29mimics过表达miR-29都能在蛋白水平下调ITGB1;qRT-PCR结果显示miR-29家族3条miRNA在胃癌组织中的相对含量均低于癌旁组织[miR-29a:癌旁(32.01±10.38),癌(14.16±6.25);miR-29b:癌旁(26.95±5.05),癌(9.82±1.86);miR-29c:癌旁(53.56±8.05),癌(16.79±1.97),P<0.01];进一步统计学分析表明,miR-29a与淋巴结转移有关(P<0.05),miR-29b在具有远处转移的病例组织中C/P比值较无远处转移的病例组织明显降低(P<0.05)。结论miR-29可以在转录后水平调控ITGB1的表达,从而抑制胃癌细胞的侵袭和转移。
- 何兵余松涛吕沐瀚吴玉云胡长江杨仕明
- 关键词：MIR-29胃肿瘤肿瘤转移
- Orexin神经元调节应激反应的研究进展
- 2013年
- orexin是下丘脑的一种重要神经肽,在摄食、睡眠和药物成瘾等生理心理过程中起着重要作用。近年来发现下丘脑Orexin能神经纤维密集地投向参与应激调控的脑区;orexin基因敲除的老鼠表现为防御反应迟钝;另外,侧脑室微量注射orexin可导致血浆中ACTH水平的上升并诱导出应激样呼吸-心血管反应和行为反应;因此,下丘脑及中枢orexin系统对应激的调控可能起关键作用。其可能机制为强烈刺激能活化下丘脑orexin神经元,诱导中枢神经系统orexin的释放,从而激活CRF通路及蓝斑-交感-肾上腺髓质系统,提高血浆皮质酮与去甲肾上腺素的水平,诱导应激反应,维持机体的稳定。
- 何兵王凯
- 关键词：OREXIN应激蓝斑CRF交感神经系统
- 靶向肿瘤腺病毒介导IL-24抑制人胃癌细胞增殖被引量：1
- 2014年
- 目的探讨人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子特异驱动IL-24的重组腺病毒(Ad-phTERT-IL-24)对人胃癌SGC-7901细胞增殖及侵袭能力的影响。方法将Ad-phTERT-IL-24感染人胃癌SGC-7901细胞,采用荧光实时定量PCR及Western blot检测IL-24表达;采用CCK-8方法检测细胞生长曲线;采用Transwell小室侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果与以PBS代替病毒液处理的SGC-7901细胞相比,感染Ad-phTERT-IL-24的SGC-7901细胞内IL-24表达明显升高(P<0.01),于第5、6 d吸光度明显下降(P<0.05),细胞侵袭能力亦显著降低(P<0.05)。结论 Ad-phTERT-IL-24可有效上调人胃癌SGC-7901细胞IL-24表达,进而抑制细胞增殖及侵袭能力。
- 曹亚玲黄茂涛黄一季代金冯早明李学成陈陵
- 关键词：端粒酶逆转录酶白细胞介素-24胃癌
- miR-29a靶基因VEGF-A的生物信息学预测及鉴定被引量：1
- 2014年
- 目的预测并鉴定miR-29a的靶基因血管内皮生长因子VEGF-A。方法采用生物信息学技术,预测miR-29a与VEGF-A mRNA 3'UTR结合位点;分别采用RT-q PCR、Western blot技术检测过表达miR-29a后,BGC-823细胞内VEGF-A表达水平的变化;采用双荧光素酶实验,验证miR-29a与VEGF-A mRNA 3'UTR的结合位点。结果生物信息学技术预测显示miR-29a可稳定结合于VEGF-A mRNA 3'UTR;miR-29a过表达后可明显抑制BGC-823细胞VEGF-A mRNA 及蛋白表达水平;双荧光素酶实验证实,与阴性对照相比,miR-29a拟似物(mimics)可通过稳定结合于VEGF-A mRNA 3'UTR抑制荧火虫荧光素酶活性(0.48±0.08 vs 1.00±0.22,P<0.05)。结论 miR-29a通过直接结合于靶基因VEGF-A mRNA 3'UTR抑制VEGF-A蛋白表达。
- 陈陵陈俊颖王宗华王国威宋航邹利全张方征
- 关键词：微RNAS人血管内皮生长因子
