国家自然科学基金(30500523)
- 作品数：10 被引量：15H指数：3
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- 人隔蛋白7的真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2007年
- 目的构建人隔蛋白7(SEPT7,hCDC10/SEPT7)的表达载体并对U251人脑恶性胶质瘤细胞系进行转染且检测其表达。方法RT-PCR方法扩增SEPT7cDNA片段,并将扩增的片段插入pCDNA3真核表达载体,构建成含SEPT7cDNA的重组载体pCDNA3/SEPT7,以脂质体介导该质粒转染人脑恶性胶质瘤细胞系U251,应用RT-PCR和免疫荧光染色鉴定转染细胞中hCDC10/SEPT7的表达。用流式细胞术对转染前后的U251细胞进行细胞周期分析。结果成功构建含SEPT7cDNA的重组载体pCDNA3/SEPT7,并使其稳定转染U251细胞,在转染的细胞中,证实有SEPT7mRNA表达上调。细胞周期检测结果G0/G1期细胞增多,SPF降低。结论成功构建SEPT7表达载体,并在人脑恶性胶质瘤细胞系获得表达,延迟细胞周期进展。
- 贾志凡浦佩玉康春生王广秀张志勇裘明哲黄强
- 关键词：质粒构建胶质瘤细胞细胞周期
- 隔蛋白7逆转裸鼠移植胶质瘤的恶性表型被引量：3
- 2008年
- 目的探讨隔蛋白（SEPT）7对胶质瘤恶性表型的影响。方法建立SEPT7表达缺失的人胶质瘤TJ905细胞的裸鼠皮下移植瘤模型，将荷瘤鼠分为治疗组（SEVIT／pcDNA3）、空载体组（pcDNA3）和对照组（PBS），观察各组肿瘤的大小及生长速度；采用免疫组化法检测各组肿瘤组织标本中SEPT7、增殖细胞核抗原（PCNA）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、侵袭相关因子[基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9]、细胞周期因子（CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinE、p21、p16）以及凋亡相关因子（bcl-2、caspase-3）的表达；原位末端标记（TUNEL）法检测肿瘤细胞的凋亡。结果治疗组肿瘤的生长速度明显减慢，6d后肿瘤体积明显小于对照组和空载体组（P〈0．05）；治疗组肿瘤标本中SEV17、p21、p16和caspase-3的表达上调，PCNA、MMP-2、MMP-9、CDK2、CDK4、cyclinD1、cyclinE和bcl-2的表达下降，且GFAP呈阳性表达；TUNEL法检测治疗组肿瘤细胞凋亡增加。结论SEPT7可抑制肿瘤生长、增殖和侵袭，并诱导肿瘤细胞凋亡，对胶质瘤的恶性表型具有逆转作用。
- 贾志凡浦佩玉康春生王广秀张志勇裘明哲黄强
- 关键词：细胞周期因子增殖
- SEPT7与神经肿瘤的关系
- 2007年
- 人隔蛋白7(SEPT7)是隔蛋白家族成员,参与调控细胞内许多重要的生物学行为,现已初步发现SEPT7在神经肿瘤中表达下调,提示SEPT7与神经肿瘤具有相关性,文章对SEPT7与神经肿瘤的关系以及在酵母分裂过程中表达的与SEPT7高度同源的CDC10的资料进行了总结。
- 贾志凡浦佩玉
- 关键词：神经肿瘤细胞周期
- 人隔蛋白7的真核表达载体的构建及表达
- 2008年
- 目的构建人隔蛋白7（SEPT7，hCDC10／SEPT7）的表达载体并对U251人脑恶性胶质瘤细胞系进行转染且检测其表达。方法RT-PCR方法扩增SEPT7cDNA片段，并将扩增的片段插入pCDNA3真核表达载体，构建成含SEPTTcDNA的重组载体pCDNA3／SEPT7，以脂质体介导该质粒转染人脑恶性胶质瘤细胞系U250，应用RT-PCR和免疫荧光染色鉴定转染细胞中hCDC10／SEPT7的表达。用流式细胞术对转染前后的U251细胞进行细胞周期分析。结果成功构建含SEPT7cDNA的重组载体pCDNA3／SEPT7，并使其稳定转染U251细胞，在转染的细胞中，证实有SEPT7mRNA表达上调。细胞周期检测结果G0／G1期细胞增多，SPF降低。结论成功构建SEPT7表达载体，并在人脑恶性胶质瘤细胞系获得表达，延迟细胞周期进展。
- 贾志凡浦佩玉康春生王广秀张志勇裘明哲黄强
- 关键词：胶质瘤细胞细胞周期
- 隔蛋白7在神经上皮肿瘤中的表达被引量：2
- 2007年
- 目的研究隔蛋白7（SEPT7）在神经上皮肿瘤中的表达。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测47例胶质瘤标本以及4个胶质瘤细胞系中SEPT7的mRNA表达水平，以及免疫组化法研究了肿瘤标本以及组织芯片中SEPT7的表达状况。结果胶质瘤中SEPT7的表达水平随肿瘤恶性程度增加而明显降低，低恶度胶质瘤与高恶度胶质瘤的mRNA、蛋白表达水平差异有统计学意义；胶质瘤细胞系TJ905、TJ899未检测到SEPT7的表达，U251、TJ862细胞系中SEPT7表达水平较正常组织显著降低。结论RT—PCR和免疫组化检测表明SEPT7在神经上皮肿瘤中表达下调，可能与肿瘤的发生、发展有关联，值得进一步研究。
- 贾志凡浦佩玉康春生王广秀张志勇裘明哲黄强
- 关键词：基因表达神经胶质瘤
- SEPT7基因抑制人胶质瘤细胞系U251MG侵袭的研究
- 2008年
- 目的研究SEPT7基因对人胶质瘤细胞系U251MG侵袭的抑制作用及其可能的分子机制。方法以腺病毒为载体转导SEF／7（rAd5-SEPT7）人U251人脑胶质瘤细胞系；Transwell法和3-D Matrigel法观察U251胶质瘤细胞侵袭能力的变化，划痕实验和2-DMatrigel法观察细胞迁移能力的变化。应用蛋白印记检测MMP2，MMP9，MT1-MMP，TIMP1和TIMP2的表达变化，蛋白印记和免疫荧光检测整合素α，β3的表达，以及应用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白tubulin—α结构的变化。结果转染SEF17后U251MG细胞的侵袭和迁移能力明显受到抑制、细胞MMP2、MMP9、MT1-MMP和整合素α，β3的表达下调、TIMP1和TIMP2的表达则上调；肿瘤细胞的微管蛋白tubulin—α结构出现了重新分布，发生了扭曲及聚集现象，接近于正常的非肿瘤细胞的tubulin-α结构。结论SEPT7基因可以抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力，其分子机制可能通过逆转MMPs／TIMPs的失衡状态，降低整合素α，β3的表达，以及改变细胞骨架tubulin—α的结构而实现的。SEPT7可作为基因治疗胶质瘤的重要候选基因。
- 徐嵩贾志凡黄强王广秀张安玲刘晓智周旋许鹏浦佩玉
- 关键词：胶质瘤基因治疗
- SEPT7基因抑制U251MG裸鼠皮下荷瘤侵袭的体内实验研究被引量：2
- 2009年
- 目的探讨SEPT7基因在体内抑制胶质瘤生长和侵袭的作用。方法建立人脑胶质母细胞瘤U251细胞来源的裸鼠皮下胶质瘤模型，并给予SEPT7治疗，定期测量肿瘤体积变化，检测肿瘤组织中SEPT7以及侵袭相关蛋白MMP2、MMP9、MT1-MMP、TIMP1、TIMP2和整合素αvβ3的表达。结果SEPT7显著抑制肿瘤生长。治疗组肿瘤体积明显小于对照组（P〈0．01）。SEPT7治疗组中，肿瘤组织细胞内SEPT7表达明显上调。MMP2、MMP9、MT1-MMP和整合素αvβ3，的表达下降，而TIMP1、TIMP2的表达明显升高。结论SEPT7基因对于胶质瘤的侵袭和生长具有抑制作用。
- 徐嵩贾志凡黄强康春生王广秀张安玲浦佩玉
- 关键词：神经胶质瘤基因治疗MMPSTIMPS整合素
- 隔蛋白7对胶质瘤细胞系U251细胞周期的影响被引量：4
- 2008年
- 目的检测SEPT7对胶质瘤细胞系U251的细胞周期、增殖、侵袭以及凋亡的影响。方法流式细胞术分析转染SEPT7对细胞周期的影响，Western blot检测细胞周期因子表达变化，MTT法和Annexin V法评价SEPT7对U251细胞的增殖活性和凋亡的影响，Martrigel三维立体培养分析转染SEPT7后U251细胞侵袭能力的变化。结果SEPT7使U25I细胞G0／G1期阻滞，S期细胞比例（SPF）降低，增殖活性和侵袭能力明显受到抑制，并可诱发细胞凋亡。结论SEPT7抑制U251细胞侵袭、增殖，促进凋亡。结果提示，SEPT7是对胶质瘤具有抑制作用的基因。
- 贾志凡浦佩玉康春生王广秀张志勇裘明哲黄强
- 关键词：神经胶质瘤细胞周期细胞凋亡
- SEPT7基因抑制人胶质瘤细胞系TJ899侵袭的研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究隔蛋白7（SEPT7）基因对人胶质瘤细胞系TJ899侵袭的抑制及其分子机制。方法Transwell法和3-D Matrigel法、划痕实验和2-D Matrigel法观察转染SEPT7的TJ899胶质瘤细胞侵袭、迁移能力变化，蛋白印记和免疫组织化学检测MMP2、MMP9、MT1-MMP、TIMP1和TIMP2的表达变化，蛋白印记和免疫荧光检测整合素αV β3的表达，应用激光扫描共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白tubulin-α结构的变化。结果Transwell法和3-D Matrigel法观察转染SEPT7后TJ899细胞的侵袭能力下降了59．86％、43．36％，划痕实验和2-D Matrigel法观察和迁移能力下降了65．45％、24．02％。转染SEPT7后，MMP2、MMP9、MT1-MMP和整合素αVβ3的表达分别下调了54．03％、39．13％、76．06％、53．09％，TIMP1和TIMP2的表达则上调了62．50％、77．78％。肿瘤细胞的微管蛋白Tubulin-α结构出现了重新分布，由高密度型变化为稀疏型，这种变化接近于正常的非肿瘤的细胞的微管蛋白Tubulin-α结构。结论SEPT7基因可以抑制胶质瘤细胞的侵袭和迁移能力，其分子机制可能通过逆转MMPs／TIMPs的失衡状态，降低整合素αVβ3的表达，以及改变细胞骨架tubulin-α的结构而实现的。SEPT7可作为胶质瘤基因治疗的重要候选基因。
- 徐嵩贾志凡黄强康春生王广秀浦佩玉
- 关键词：胶质瘤基因治疗
- SEPT7对胶质瘤细胞系TJ905生物学特性的影响被引量：9
- 2007年
- 目的研究 SEPT7对胶质瘤细胞系 TJ905的生物学特性的影响。方法 SEF17表达缺失的人脑胶质瘤细胞系 TJ905转染 SEFF7构建体,pcDNA3载体转染组为空载对照,应用蛋白印迹鉴定转染是否成功。采用 MTF 法检测转染 SEPT7构建体的细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期分布变化,Annexin V 法评价细胞的凋亡,Martrigel 三维立体培养法分析侵袭能力。结果转染SEPT7后,胶质瘤细胞增殖活性降低,细胞周期分析结果为 S 期细胞比例(SPF)降低、G0/G1期阻滞;蛋白印迹检测细胞周期因子显示正向调节因子 cyclin D1、cyclin E、CDk2、CDk4表达下降,负向调节因子 p21、p16表达升高,肿瘤细胞侵袭能力明显受到抑制,并可诱发细胞凋亡。结论 SEPT7转染人胶质瘤细胞系 TJ905,可使细胞 SPF 降低、G0/G1期出现阻滞、抑制细胞侵袭和增殖、促进凋亡。
- 贾志凡浦佩玉康春生王广秀张志勇裘明哲黄强
- 关键词：细胞周期胶质瘤
