国家自然科学基金(30500550)
- 作品数：8 被引量：61H指数：5
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- 相关机构：第四军医大学西京医院南京军区南京总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省博士后科研资助计划项目陕西省自然科学基金更多>>
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- 贝伐单抗眼液对兔眼角膜新生血管抑制作用的实验研究被引量：6
- 2010年
- 目的探讨贝伐单抗(Avastin)滴眼液对兔眼碱烧伤或缝线诱导角膜新生血管的抑制作用。方法 54只家兔分别以碱烧伤法(27只)和缝线法(27只)诱导角膜新生血管模型,根据治疗方法不同随机再分为3组:Avastin眼液组、复方硫酸新霉素眼液组和生理盐水组。各组均于诱导后第7天给予相应药物滴眼,4次.d-1,共14d。造模后第7天、第21天、第28天、第56天计算角膜新生血管面积,免疫组织化学法检测角膜组织中VEGF蛋白表达,RT-PCR法检测角膜组织中VEGFmRNA表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测房水内VEGF蛋白表达。结果碱烧伤后第21天、第28天、第56天Avastin眼液组和复方硫酸新霉素眼液组角膜新生血管面积明显较生理盐水组短而稀疏,其中3个不同时间点Avastin眼液组的角膜新生血管面积分别为(26.16±7.02)mm2、(29.71±10.43)mm2、(26.10±10.72)mm2,均明显小于生理盐水组,差异均有统计学意义(均为P<0.01);缝线后第21天、第28天、第56天时Avastin眼液组新生血管面积分别为(18.26±3.88)mm2、(37.24±3.16)mm2、(40.16±3.38)mm2,均明显小于复方硫酸新霉素眼液组和生理盐水组,差异均有统计学意义(均为P<0.01);碱烧伤或缝线诱导后第21天,免疫组织化学结果显示Avastin眼液组角膜上皮层VEGF蛋白表达较生理盐水组均减弱,基质层新生血管较少;RT-PCR显示造模后第21天和第28天时,Avastin眼液组兔角膜组织内VEGFmRNA的表达均明显低于生理盐水组,差异均有统计学意义(均为P<0.01),而造模后第56天时,Avastin眼液组和复方硫酸新霉素眼液组VEGFmRNA的表达均较生理盐水组高,差异均有统计学意义(均为P<0.05);ELISA结果显示Avastin眼液组在碱烧伤和缝线诱导后第21天,房水VEGF蛋白含量分别为(81.0±8.7)ng.L-1、(110.0±9.0)ng.L-1,均明显低于复方硫酸新霉素眼液组和生理盐水组,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。结论 Avastin滴眼液能有效地抑制兔眼�
- 常岩蔡莉王雨生王海燕李曼红
- 关键词：贝伐单抗角膜新生血管血管内皮生长因子
- 小鼠角膜移植排斥反应中植片浸润细胞类型及引流淋巴结细胞表型的变化被引量：2
- 2005年
- 目的:探讨小鼠角膜移植排斥反应中植片浸润细胞类型及引流淋巴结细胞表型的变化。方法:建立小鼠角膜移植模型,术后不同时间点进行临床观察及角膜免疫荧光组织化学染色。采用三色流式细胞术分析移植术后3d颌下淋巴结(SMLN)、颈浅淋巴结(SCLN)的细胞表型变化。结果:角膜移植术后6h,中性粒细胞、树突状细胞、巨噬细胞开始聚集并逐渐浸润植片;24hCD4+和CD8+T细胞出现并侵入植片,2wk时达到高峰;术后12～21d所有植片均被排斥。移植后3dSMLN内CD4+T细胞比例较正常时明显下降(P=0.038),而SCLN各细胞比例无明显变化。结论:角膜移植术后植片迅速出现髓系及淋巴细胞浸润,伴有引流的SMLN内早期CD4+T细胞比例下降,二者间有一定关联。
- 蔡莉惠延年王雨生L KuffovaL DuncanLV Forrester
- 关键词：免疫表型分型淋巴结
- 树突状细胞在角膜移植排斥反应中的免疫调节机制的探讨被引量：4
- 2008年
- 目的观察自体未成熟树突状细胞(iDC)对于小鼠同种异体角膜移植的免疫调节作用,探讨其作用机制。方法PBS或自体iDC尾静脉注射7d后,采用双色免疫荧光染色法及流式细胞术分析小鼠脾脏中CD4+CD28+及CD4+CTLA-4+ T细胞的表达。PBS或自体iDC尾静脉注射7d后进行小鼠同种异体角膜移植,临床观察两组植片的存活时间。结果iDC注射后,脾脏中CD4+CD28+ T细胞的比例下降(P<0.01),而CD4+CTLA-4+ T细胞比例明显升高(P<0.01)。iDC经尾静脉注射后明显延长了同种异体角膜移植片的存活时间(P<0.01)。结论iDC可诱导CD80/CD86-CTLA-4抑制型共刺激信号替代CD80/CD86-CD28信号通路,从而阻断协同刺激信号的传递及T细胞的活化,对于同种异体角膜移植排斥反应具有免疫抑制作用。
- 闫峰蔡莉黄振平丁莉莉惠延年
- 关键词：树突状细胞CD28免疫调节
- 小鼠角膜移植排斥反应中植片内细胞因子表达水平的变化被引量：6
- 2012年
- 背景研究表明细胞因子在角膜移植免疫调节中起重要的作用，但关于角膜移植术后角膜植片内细胞因子表达的变化报道较少。目的探讨角膜移植术后不同时间点细胞因子的表达变化。方法采用雌性6～8周龄BALB／c小鼠及C57BL／6小鼠分别建立小鼠自体角膜移植和同种异体角膜移植模型，每组各10只，自体角膜移植术组供体和受体同为BALB／c小鼠，同种异体角膜移植术组供体为C57BL／6小鼠，受体为BALB／c小鼠。于术后1d开始临床观察角膜植片并对炎症程度进行评分，当植片评分总和≥5分或植片混浊≥2分时为发生植片排斥反应。将BALB／c小鼠随机分为正常对照组3只和同种异体角膜移植术组15只，后者分别于术后6h及1、3、7、14d对角膜植片行逆转录PCR（RT—PCR）检测植片中细胞因子白细胞介素4（IL-4）、γ-干扰素（IFN-γ）、IL-10、肿瘤坏死因子α（TNF—α）表达的变化。结果在60d的观察期中，自体角膜移植术后小鼠角膜植片混浊评分均〈2分，植片的炎症评分之和均〈5分，植片存活率为100％，但同种异体角膜移植术后角膜植片水肿、混浊，伴有角膜新生血管形成，至术后24d角膜植片排斥反应评分之和均≥5分，植片混浊评分≥2分，全部发生排斥反应，角膜植片平均存活时间为（17．80±4．66）d。RT—PCR检测结果表明，正常角膜中IL-4和IFN-γ呈阳性表达，IL-10和TNF-α表达阴性。同种异体角膜移植术后6h可检测到IL-4呈阳性表达，IFN-γ和IL-10表达呈强阳性，而未检测到TNF—α的表达。术后1～3d角膜植片中IL-4呈强阳性表达，IFN-γ阳性表达，TNF—α表达增强，IL-10表达逐渐消失。角膜移植术后7d，可见IL-4表达阴性，而IFN-γ、IL-10和TNF—α仍呈强阳性表达。至术后14d，角膜植片中IL-4、IFN-γ和TNF—α．均未见表达，仅检测到IL-10呈阳性表达。结论TNF-α是角膜移植术后
- 闫峰石尧蔡莉
- 关键词：角膜移植排斥
- 大鼠骨髓间充质干细胞体外可诱导分化为角膜上皮细胞被引量：28
- 2007年
- 目的:探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSC)分化为角膜上皮细胞的可塑性及其重建角膜上皮的可能性。方法:用密度梯度离心法结合贴壁培养法分离纯化大鼠骨髓MSC,经体外与角膜基质细胞共培养诱导分化,免疫荧光法检测角膜上皮细胞特异标志物K12的表达。结果:体外培养的大鼠骨髓MSC表现出很强的增殖潜能,原代培养的骨髓MSCCD29免疫荧光染色阳性,CD34和CD45为阴性,符合骨髓MSC的特征。MSC与角膜基质细胞共培养1wk后大部分细胞分化为间质细胞,少部分细胞形态上相对偏小,免疫荧光检测这部分细胞表达角膜上皮细胞特异性标志角蛋白K12。结论:体外培养的MSC在角膜基质细胞的诱导下可横向分化为角膜上皮细胞。
- 姜廷帅蔡莉惠延年闫峰
- 关键词：骨髓间充质干细胞角膜上皮细胞分化
- TGFβ2-DC对小鼠同种异体角膜移植排斥反应的抑制作用被引量：5
- 2007年
- 目的:观察自体TGFβ2-DC对于同种异体角膜移植术后免疫排斥反应的调节作用。方法:PBS或已摄取供体抗原的自体TGFβ2-DC经小鼠尾静脉注射7d后,建立小鼠同种异体角膜移植模型,临床观察两组植片混浊程度等情况,比较植片存活时间。结果:TGFβ2-DC注射后,植片发生移植排斥反应的时间延迟,植片存活时间明显延长,PBS组及TGFβ2-DC尾静脉组植片的存活时间分别为17.8±3.01d和37.6±1.65d(P<0.01)。结论:摄取供体抗原的不成熟自体DC可以诱导受体获得供体抗原的特异性免疫耐受,使小鼠同种异体角膜移植的免疫排斥反应延迟,植片存活时间明显延长。
- 闫峰蔡莉惠延年王雨生孟浩
- 关键词：树突状细胞角膜移植角膜移植排斥反应
- 经角膜基质细胞诱导的大鼠骨髓间充质干细胞在人羊膜上构建角膜上皮移植片被引量：10
- 2008年
- 目的:研究将骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)诱导分化后在羊膜表面培养构建角膜上皮移植片的可行性。方法:取SD大鼠骨髓间充质干细胞和角膜基质细胞,分别培养并传2代后进行共培养,取共培养7d后的MSC覆载于新鲜人羊膜,再培养7d。对MSC及诱导后MSC进行免疫荧光染色和扫描电镜检查;对覆载细胞的羊膜进行HE染色及免疫荧光染色。结果:MSC在体外培养条件下贴壁生长,免疫荧光染色CD29和CD44阳性,CK12阴性。经角膜基质细胞诱导分化后,MSC细胞CK12染色转为阳性。诱导后MSC接种到羊膜表面,迅速贴壁生长,组织学特性无明显改变,CK12染色仍为阳性。结论:经角膜基质细胞诱导的MSC表现出角膜上皮细胞特征,在羊膜上生长后保持不变。
- 戢维颖蔡莉惠延年姜廷帅
- 关键词：骨髓间充质干细胞上皮细胞羊膜
- 小鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的分离纯化及鉴定被引量：8
- 2009年
- 目的:调节性T细胞(Treg)是近年来免疫学研究的热点。文中研究获取高纯度Treg的方法及其表型的鉴定。方法:流式细胞术(FACS)分析正常小鼠脾脏中CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25-3个细胞亚群的表型;采用二步磁性细胞分选法(MACS)纯化小鼠脾细胞中CD+CD25+Treg,并对分离后的细胞表型进行鉴定。结果:①依CD25表达水平不同将小鼠天然CD4+T细胞划分为3群,转录因子Foxp3、细胞毒T淋巴细胞相关分子-4(CTLA-4/CD152)、糖皮质激素诱导肿瘤坏死因子受体(GITR)、CD69在CD4+CD25+细胞亚群呈显著性高表达(P<0.01),CD4+CD25+T细胞主要存在于CD45RB低表达细胞亚群,CD28的表达在CD4+CD25+细胞亚群明显下降(P<0.05)。②使用二步MACS法从正常小鼠脾脏中分离CD4+CD25+T淋巴细胞的得率为1%～1.2%,纯度为87.29%～92.04%。FACS分析结果显示,Foxp3优先表达于CD4+CD25+T细胞亚群,表达率为(66.60±1.03)%,而在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群呈低水平表达,分别为(23.97±2.00)%和(16.78±3.24%)。CTLA-4在CD4+CD25+T细胞亚群表达率为(77.37±1.67)%,明显高于在CD4+和CD4+CD25-T细胞亚群的表达[(21.97±2.39)%和(18.04±3.16)%]。纯化的CD4+CD25+T细胞亚群表现为CD127的低表达。结论:MACS阴性加阳性二步分选法避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+Treg细胞表型及功能特征的细胞。
- 闫峰黄振平蔡莉薛春艳丁莉莉
- 关键词：调节性T细胞流式细胞术分析
