中国博士后科学基金(20100471822)
- 作品数：1 被引量：1H指数：1
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- 内皮祖细胞诱导培养及携带基因腺病毒转染后生物活性变化的观察被引量：1
- 2012年
- 目的:研究用人骨髓诱导培养内皮祖细胞(EPCs)的方法,探讨携带目的基因增殖缺陷的腺病毒对EPCs的转染情况、目的基因的表达情况和转染前后EPCs生物活性的变化。方法:用梯度离心法从人骨髓分离单个核细胞,加入人血管内皮生长因子(VEGF165)诱导培养,用流式细胞仪测定细胞表面标志CD14、CD34、CD45、CD166、CD29、CD44、HLA-DR、CD31、CD106、CD133和VEGFR2(KDR)。增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)作为报告基因,流式细胞仪检测腺病毒载体(Ad-EGFP)对EPCs的感染效率。用携带人干扰素γ(hγIFN)基因的腺病毒载体(Ad-hγIFN)感染EPCs(EPCs-hγIFN),ELISA检测细胞EPCs-hγIFN分泌hγIFN的情况。MTT实验观察EPCs、EPCs-EGFP和EPCs-hγIFN的增殖情况,流式细胞仪检测EPCs、EPCs-EGFP和EPCs-hγIFN细胞CD133、KDR和CD34的表达情况。结果:从骨髓分离的单核细胞经过诱导培养2周后,贴壁的单核细胞开始表达EPCs标志CD133、KDR和CD34。Ad-EGFP感染复数(MOI)为150pfu/EPCs时,感染率即可达90%以上。EPCs-hγIFN培养上清可以测得较高浓度而且浓度稳定的hγIFN。腺病毒转染后,EPCs的增殖活性和表面标志表达无显著性变化。结论:从人骨髓可以培养出EPCs,腺病毒可以把目标基因成功转入EPCs,转入的基因可以稳定地表达,在携带目的基因的腺病毒转染后,EPCs的细胞生物活性无显著性改变。
- 王鈜楼敏荣光华王春平毕京峰许桂林高旭东陆荫英曲建慧白文林曾珍杨永平
- 关键词：内皮祖细胞肿瘤腺病毒骨髓
