广东省自然科学基金(021851)
- 作品数：8 被引量：54H指数：3
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- 相关机构：中山大学附属第二医院中山大学解放军第161医院更多>>
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- 肝细胞生长因子诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞被引量：28
- 2004年
- 目的 :探讨肝细胞生长因子 (HGF)体外诱导骨髓间质干细胞 (MSC)定向分化心肌细胞的一种新方法。方法 :分离SD大鼠骨髓MSC ,培养至 4 - 6代后 ,添加HGF(终浓度 10 μg/L)持续培养 30d ,倒置显微镜下动态观察分化细胞的自律性搏动和对 0 1%异丙肾上腺素和无Ca2 + 孵育液的反应 ,并行心肌肌凝蛋白表达鉴定。结果 :分化第 14 - 2 0d骨髓间质干细胞增殖形成集落 ,10 % - 5 0 %克隆中开始出现持续节律收缩的细胞群体 ,节律频率为 70- 90次 /min ,异丙肾上腺素加快其搏动速率 ,无Ca2 + 孵育液则抑制之。细胞心肌肌凝蛋白表达鉴定为心肌细胞。结论 :HGF可诱导骨髓间质干细胞分化为心肌细胞 。
- 方天翎闵军邓小耿钱世鵾褚忠华陈亚进邵静魏菁陈积圣
- 关键词：肝细胞生长因子心肌分化
- 肝细胞生长因子诱导小鼠胚胎干细胞分化的实验研究被引量：2
- 2005年
- 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)诱导小鼠胚胎干细胞(ESC)体外定向分化为肝细胞的能力.方法对ESC体外悬浮培养5～7天形成的拟胚体,观察ESC自主分化、HGF诱导分化的情况.观察和检测经诱导4周的细胞的HE染色,糖原染色,尿素氮及甘油三酯合成,心肌MHC、白蛋白、AFP、CK18的表达,以及吲哚氰绿(ICG)染色情况.结果 ESC自主分化难以控制.HGF可促进ESC向内胚层进一步分化,但更可能诱导其向心肌分化.表达白蛋白、AFP、CK18、ICG和FDA染色阳性.结论 HGF可诱导ESC分化出肝细胞,但HGF的单一作用能力有限,提示肝细胞的诱导分化可能需要多种因素共同作用.
- 傅玉如陈玥方天翎闵军
- 关键词：肝细胞生长因子细胞分化
- 胚胎干细胞体外分化为功能性肝细胞过程中肝细胞生长因子诱导系统中瘀胆血清的促进作用(英文)
- 2007年
- 背景:目前各种诱导胚胎干细胞(ESC)分化为肝细胞的方法中,大多忽略了对分化细胞功能的诱导与鉴定。是否表达肝细胞功能应作为ESC向肝细胞分化的鉴定指标之一。目的:观察在肝细胞生长因子(HGF)体外诱导小鼠胚胎干细胞向肝细胞分化的体系中,瘀胆血清病理环境对分化细胞表达肝细胞功能的作用。设计:观察对比,体外细胞学实验。单位:中山大学附属第二医院肝胆外科。材料:实验于2004-10/2007-02在中山大学附属第二医院医学研究中心完成。小鼠E14ESC系由中山大学干细胞与组织工程中心提供;SD大鼠20只,鼠龄2周,购自中山大学动物实验中心。实验过程中对动物的处置符合动物伦理学要求。方法:对SD大鼠施以胆总管结扎切断手术,制作瘀胆模型,饲养10d后取全血制备瘀胆血清。用悬滴培养ESC发育5～7d的拟胚体,将其离散细胞种植于不同的分化体系,分别进行自主分化、20μg/L肝细胞生长因子、5%瘀胆血清+20μg/L肝细胞生长因子诱导分化。主要观察指标:①倒置显微镜下动态观察细胞形态变化。②分化4周时进行白蛋白、甲胎蛋白、CK18/19、糖原及吲哚氰绿和荧光二乙酯染色。③采用相应试剂盒每3天检测细胞合成白蛋白、三酰甘油及尿素氮功能。结果:①ESC自主分化难以控制,分化为3个胚层的细胞。肝细胞生长因子促进ESC向内脏内胚层和中胚层(心肌)分化,但两者仅能表达低水平的肝细胞特异性功能。②引入瘀胆血清的肝细胞生长因子诱导体系中ESC能分化为较为形态均一的多角形细胞,其糖原、吲哚氰绿和荧光二乙酯染色均为阳性;白蛋白、三酰甘油和尿素氮合成能力显著高于自发分化和肝细胞生长因子诱导结果(P<0.05～0.01)。结论:采用瘀胆血清体外模拟病理性微环境可促进HGF诱导的ESC源性肝细胞表达高水平的肝特异性代谢功能。
- 闵军方天翎陈亚进邓小耿商昌珍刘璐曹君陈积圣
- 关键词：胚胎干细胞肝细胞生长因子肝细胞
- P21^(Cip/WAF1)及P27^(Kip1)与增殖细胞核抗原在人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中的表达被引量：3
- 2009年
- 背景:P21Cip/WAF1、P27Kip1是两种重要的细胞周期的负调控因子,增殖细胞核抗原是反映干细胞增殖的指标。目的:观察体外诱导人骨髓间充质干细胞向肝细胞分化过程中P21Cip/WAF1,P27Kip1及增殖细胞核抗原的表达变化。设计、时间及地点:细胞学基因水平观察,于2006-12/2007-06在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。材料:骨髓来源于中山大学附属第二医院行骨髓穿刺的健康供者。方法:全骨髓贴壁筛选法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,传至第5代后,加入含20μg/L肝细胞生长因子、10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基向肝细胞诱导分化。主要观察指标:诱导后RT-PCR检测细胞内P21Cip/WAF1,P27Kip1及增殖细胞核抗原基因mRNA的表达。结果:骨髓间充质干细胞向肝细胞定向诱导后0,1,3,5,7d,细胞内P21Cip/WAF1mRNA表达的相对量逐渐升高(P<0.01),P27Kip1mRNA表达的相对量无明显差异(P>0.05),增殖细胞核抗原mRNA表达的相对量除诱导后0,1d无明显差异(P>0.05)外,其余各时间点均逐渐降低(P<0.01)。结论:P21Cip/WAF1高表达抑制了骨髓间充质干细胞增殖,同时在其向肝细胞分化过程中起一定调控作用,P27Kip1可能并不起作用,增殖细胞核抗原的表达则与P21Cip/WAF1相反,呈逐步减少趋势。
- 汤志华闵军陈积圣叶林余杰雄
- 关键词：骨髓间充质干细胞肝细胞P27KIP1增殖细胞核抗原
- 体外诱导人骨髓间充质干细胞分化为肝细胞样细胞的特征及功能被引量：3
- 2005年
- 目的:观察人骨髓间充质干细胞体外培养定向分化为肝细胞样细胞的过程及其特征。方法:实验于2003-12/2004-05在中山大学附属第二医院林百欣医学研究中心实验室完成。人骨髓取自髂后上嵴骨髓穿刺的健康供者,来源于中山大学附属第二医院儿科患儿健康家属。全骨髓贴壁筛选法分离出骨髓间充质干细胞,体外扩增后以流式细胞仪鉴定其表面标志。取扩增5代的骨髓间充质干细胞,分为2组,分化组于加入20μg/L肝细胞生长因子和10μg/L成纤维细胞生长因子4的opti-MEMI低血清培养基中诱导分化,空白对照组则不加任何细胞因子。2周后,行细胞形态学观察,并检测成热肝细胞的糖原合成和尿素分泌功能(免疫细胞化学法检测甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18,19表达,反转录-聚合酶链式反应检测甲胎蛋白、白蛋白基因mRNA转录水平,高碘酸-Schiff染色检测糖原及紫外分光光度法测定尿素氮合量)。结果:①流式细胞仪显示第5代骨髓间充质干细胞高表达表面抗原白细胞分化抗原29,不表达白细胞分化抗原34,11b。②分化组骨髓间充质干细胞至第14天,部分细胞分化为多角形的肝细胞样细胞。③免疫细胞化学法检测到细胞特异性表达甲胎蛋白、白蛋白及细胞角蛋白18,19,反转录-聚合酶链式反应显示有甲胎蛋白和白蛋白mRNA转录。④高碘酸-Schiff糖原染色可见胞浆内存在红色颗粒,呈阳性反应,培养液内尿素氮含量亦明显升高。⑤空白对照组骨髓间充质干细胞则未见上述各项变化。结论:在低血清培养体系中,采用成纤维细胞生长因子4和肝细胞生长因子联合诱导,证明人骨髓间充质干细胞在体外能定向分化为肝细胞样细胞,诱导后的骨髓间充质干细胞上有了成熟肝细胞的糖原合成和分泌尿素的特征性功能,表明骨髓间充质干细胞可作为肝细胞移植和人工肝的新型种子细胞。
- 汤志华闵军陈积圣霍景山胡孝渠殷香保陈波
- 关键词：骨髓细胞干细胞肝细胞细胞分化
- 含淤胆血清的培养体系从大鼠骨髓细胞中筛选与扩增肝干细胞亚群被引量：10
- 2003年
- 目的 :探讨采用含淤胆血清的培养体系从骨髓细胞中筛选与扩增骨髓源性肝干细胞的可行性。方法 :制备含 2 %、5 %、7%和 10 %淤胆血清的筛选培养液 ,培养大鼠骨髓细胞 ,4d时加入肝细胞生长因子促进肝干细胞生长 ,2周时行免疫组化与RT -PCR检测肝干细胞标志、糖原染色和尿素合成试验分析功能。结果 :在 2 %淤胆血清中 ,骨髓细胞不能形成克隆 ,7%与 10 %的血清则骨髓细胞逐渐凋亡。在 5 %的淤胆血清时 ,骨髓源性肝干细胞在此病理筛选培养液中能够生存并选择性生长 ,而其他类型细胞则脱落凋亡 ;第 2周时 ,形成肝细胞样集落 ,细胞表达胚胎时期肝细胞特征性蛋白 ,具有肝细胞特有糖原和尿素合成功能。结论 :含淤胆血清的微环境筛选培养体系能够有效地从骨髓细胞中筛选骨髓源性肝干细胞 ,为临床肝细胞替代治疗的获取丰富供体细胞来源提供了新的思路。
- 蔡云峰闵军方天翎褚忠华邓小耿何劲松陈积圣
- 关键词：骨髓干细胞细胞分离
- 突变型β-连环蛋白基因对肝细胞增殖的影响被引量：1
- 2003年
- 目的 :探讨突变型 β -连环蛋白基因对肝细胞增殖的影响。 方法 :用阳离子脂质体lipofectamine将突变型 β -连环蛋白基因导入小鼠肝细胞系AML12 ,建立AML12S33Y细胞系。用流式细胞仪和细胞计数比较这两种细胞的生长情况 ;比较这两种细胞在软琼脂中形成的克隆以及在免疫缺陷小鼠体内的成瘤情况。结果 :AML12细胞增殖明显快于AML12S33Y细胞 (P <0 0 1) ,提示突变型 β -连环蛋白能促进肝细胞的增殖。 4周后AML12S33Y细胞在软琼脂中可形成小克隆 ,但不能在免疫缺陷小鼠皮下形成肿瘤。结论 :突变型β -连环蛋白可以促进肝细胞增殖 ,但无致瘤性。
- 尚现章闵军褚忠华陈积圣
- 关键词：肝细胞增殖
- 淤胆血清“病理微环境”诱导胚胎干细胞向肝细胞分化被引量：8
- 2004年
- 目的 :探讨淤胆血清“病理微环境”培养体系诱导胚胎干细胞 (ESC)向肝细胞分化的可行性。方法 :将小鼠ESC细胞系E14在无白血病抑制因子培养基中培养 ,使其自发分化为拟胚体 ,加入FGF - 4和HGF初步诱导 ,然后置于 5 %淤胆鼠血清“病理微环境”筛选培养液中继续培养 2周 ,然后进行细胞形态学观察 ,白蛋白和CK8/ 18免疫组化染色 ,白蛋白与转甲状腺蛋白RT -PCR检测 ,细胞糖原染色及尿素合成功能分析。结果 :经初步诱导分化的ESC置于 5 %淤胆血清“病理微环境”筛选培养液中培养 ,初期细胞生长受抑制 ,2周后分化为肝细胞样细胞 ,细胞呈现良好的均质性 ;免疫组化染色显示白蛋白和CK8/ 18表达 ;RT -PCR显示有白蛋白、转甲状腺蛋白等的mRNA转录 ;细胞有糖原和尿素合成功能。结论 :采用含淤胆血清的病理微环境培养体系从经FGF - 4和HGF初步诱导的胚胎干细胞中有效筛选出了具有功能的肝细胞 ,细胞有较好的均质性 ,为临床肝细胞替代治疗、获取丰富供体细胞来源提供了新思路。
- 邓小耿方天翎曹铭辉杨勇志邵静魏菁陈积圣闵军
- 关键词：干细胞肝细胞
