贵州省省长基金(2009-79)
- 作品数：4 被引量：9H指数：2
- 相关作者：曾柱龙金华陈琳张芳更多>>
- 相关机构：贵阳医学院附属医院贵阳医学院北京大学更多>>
- 发文基金：贵州省省长基金贵州省自然科学基金教育部科学技术研究重点项目更多>>
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- 肿瘤细胞对不同分化阶段树突状细胞脂含量和蛋白质二级结构的影响
- 2011年
- 目的:利用傅里叶变换红外光谱(Fourier transformed infrared spectrum,FT-IR)技术探讨肿瘤细胞共培养对不同分化阶段树突状细胞(dendritic cells,DCs)的脂含量和蛋白质二级结构的影响,为深入理解肿瘤的免疫逃逸机制寻找线索。方法:免疫磁珠法分离人CD14+单核细胞,以经典方法将其诱导为未成熟DCs(immature DCs,imDCs)和成熟DCs(mature DCs,mDCs),分别将imDCs和mDCs与肝癌细胞株BEL7402、红白血病细胞株K562以及人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelialcells,HUVECs)共培养48 h,正常培养的DCs作为对照。采用FT-IR技术研究不同肿瘤细胞对不同分化阶段DCs的脂含量和蛋白质二级结构的影响。结果:与正常培养的DCs相比,与肿瘤细胞BEL7402和K562共培养后imDCs和mDCs的膜磷脂成分减少(2.718±0.296,3.124±0.361vs4.855±0.324,P<0.05;2.964±0.136,3.522±0.173vs4.217±0.206,P<0.05),而总的脂含量增加(3.768±0.185,3.591±0.197vs2.487±0.212,P<0.05;4.288±0.156,4.155±0.167vs3.233±0.206,P<0.05);蛋白质α-螺旋含量减少(1.863±0.192,1.754±0.169vs2.364±0.188,P<0.05;1.124±0.133,1.016±0.107vs1.392±0.113,P<0.05),β-折叠(3.397±0.225,3.433±0.236vs2.486±0.198,P<0.05;2.646±0.209,2.591±0.216vs1.558±0.159,P<0.05)和转角含量(4.366±0.284,4.322±0.266vs3.127±0.272,P<0.05;2.675±0.221,2.627±0.235vs1.773±0.181,P<0.05)增加;并且mDCs比imDCs更容易受到肿瘤来源因素的影响。结论:与肿瘤细胞共培养能够导致mDCs和imDCs的脂含量和蛋白质二级结构发生改变,可能是肿瘤导致DCs功能损伤的结构基础。
- 曾柱龙金华
- 关键词：树突状细胞肝肿瘤细胞红白血病细胞傅里叶变换红外光谱蛋白质二级结构
- 肝癌细胞对成熟树突状细胞生物物理学特性的影响
- 2010年
- 目的:研究肝癌细胞微环境成熟树突状细胞(Mature dendritic cells,mDCs)的生物物理学特性的影响,从交叉学科的角度来探索肿瘤细胞的免疫逃逸机制。方法:用免疫磁珠从人外周血分离CD14+单核细胞,加入rhGM-CSF和rhIL-4将单核细胞诱导分化为imDCs,利用TNF-α将未成熟树突状细胞(Immature dendritic cells,imDCs)诱导为mDCs,mDCs与HCCs在Transwell中共培养48h,分别利用微吸管法、荧光偏振法和Transwell法研究细胞粘弹性、膜流动性和迁移能力。结果:与肝癌细胞(Hepa tocellular carcinoma cells,HCCs)共培养后,mDCs的粘弹性和膜流动性显著下降,细胞的迁移能力受到显著的损伤。结论:HCCs可能能够损伤mDCs的生物物理学特性来影响其迁移能力,这可能是肿瘤逃脱机体免疫监视的方式之一,这对进一步深入理解肿瘤的免疫逃逸机制具有重要意义。
- 曾柱龙金华张芳
- 关键词：树突状细胞肝癌细胞
- 肝癌细胞微环境对不同分化阶段树突状细胞功能状态的影响被引量：3
- 2010年
- 目的:肿瘤的发生发展伴随有其对免疫系统各效应单元的显著抑制,树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是目前所知功能最为强大的抗原呈递细胞(Antigen presenting cells,APC)并在天然和适应性免疫应答的启动方面发挥着至关重要的作用。本文探讨肝癌细胞(Hepatocellular carcinoma cells,HCC)分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对树突状细胞的功能状态的影响,以探索傅立叶变换红外光谱(Fourier transformed infrared spectrum,FT-IR)技术在基于DCs的抗肿瘤细胞免疫治疗中的临床应用。方法:用免疫磁珠(Miltenyibiotec)从人外周血分离CD14+单核细胞,加入粒-巨噬细胞集落刺激因子(Recombinant human granulocyte-macrophage CSFr,hGM-CSF)、白介素4(Recombinant human interleukins 4r,hIL-4)将单核细胞诱导分化为未成熟DCs(ImmatureDCsi,mDCs),利用肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)将imDCs诱导为成熟DCs(Mature DCs,mDCs),分别将imDCs和mDCs与HCC在Transwell中共培养48 h,正常培养和撤生长因子培养的DCs作为对照,采用FT-IR技术和分子生物学技术研究HCC对DCs功能状态的影响。结果:与正常培养和撤生长因子培养的DCs相比,与HCC共培养DCs的基因转录活性和能量状态受到了显著的抑制,免疫印迹的结果进一步证实DCs的转录因子NF-κB的确受到了由HCC分泌的细胞因子的抑制。结论:HCC能够抑制DCs的基因转录活性和能量状态,FT-IR的变化与转录因子NF-κB的表达具有高度的相关性,这为FT-IR技术应用于检测DCs的功能状态奠定了基础,对基于DCs的抗肿瘤免疫治疗具有重要意义。
- 曾柱龙金华陈琳
- 关键词：树突状细胞傅立叶变换红外光谱基因转录活性
- 肝癌细胞对树突状细胞线粒体功能的抑制作用被引量：7
- 2010年
- 目的探索肝癌细胞(hepatocellular carcinoma cells,HCCs)分泌的可溶性细胞因子营造的微环境对树突状细胞(dendritic cells,DCs)线粒体功能状态的影响,以进一步理解肿瘤的免疫逃逸机制。方法用免疫磁珠从人外周血分离CD14+单核细胞,加入粒-巨噬细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte-macrophage CSF,rhGM-CSF)、白介素4(IL-4)将单核细胞诱导分化为未成熟DCs(immature DCs,imDCs),利用肿瘤坏死因子α(recombinant human tumor necrosisfactor-α,rhTNF-α)将imDCs诱导为成熟DCs(mature DCs,mDCs),分别将imDCs和mDCs与肝癌细胞在Transwell中共培养48h,正常培养和撤生长因子培养的DCs作为对照,利用免疫荧光和MTT比色法研究HCCs对DCs的线粒体膜电位、酶活力和胞内钙离子浓度的影响。结果与HCCs共培养后,流式细胞仪的检测结果显示:imDCs和mDCs的线粒体膜电位分别从(659.991±17.052)和(473.741±11.676)下降到(482.681±7.935)和(407.189±5.051)(P<0.05),imDCs和mDCs胞内钙离子浓度分别从(427.983±3.358)和(232.587±3.815)增加到(517.308±0.249)和(413.062±2.981)(P<0.05,P<0.01),MTT比色法的检测结果显示imDCs和mDCs的酶活力分别从(0.764±0.089)和(0.708±0.019)下降到(0.291±0.019)和(0.218±0.019)(P<0.01)。结论HCCs可能通过抑制DCs的线粒体功能来损伤其免疫功能。
- 曾柱龙金华
- 关键词：树突状细胞肝癌细胞线粒体功能
