国家科技重大专项(2008ZX10003-013)
- 作品数：8 被引量：8H指数：2
- 相关作者：鲍朗邓仪昊黄丹丹杨晓玲张本斯更多>>
- 相关机构：四川大学大理学院第四军医大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 结核杆菌Hsp65与人IL-2融合蛋白在耻垢杆菌表达
- 2011年
- 目的:构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(Hsp65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis,rMs)。方法:用EcoRⅤ和HindⅢ双酶切含Hsp65-IL-2融合基因的pPRO-hsp65-IL-2载体,回收目的基因片断Hsp65-IL-2,并将其亚克隆入同样双酶切的大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22中。重组质粒pDE22-hsp65-IL-2酶切鉴定正确后,电穿孔转化MS感受态,潮霉素抗性压力筛选阳性rMs。Western-blot鉴定rMs培养上清蛋白中目的蛋白的表达。结果:重组pDE22-hsp65-IL-2质粒酶切后可获得约2000 bp片段,与预期大小一致。Western-blot结果表明,rMs培养上清蛋白中有特异性反应条带,大小为78kD,与Hsp65-IL-2融合蛋白大小相一致。结论:成功构建了大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22-hsp65-IL-2,为该rMs的免疫学特性及抗结核分枝杆菌感染的保护效果研究奠定了基础。
- 王丽梅师长宏柏银兰张海康健张薇徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌HSP65耻垢分枝杆菌
- 结核分枝杆菌毒力分泌基因Rv3872重组卡介苗的构建及表达
- 2010年
- 目的:构建结核分枝杆菌Rv3872的原核重组表达质粒pET-3872并对其进行表达及鉴定。构建表达结核分枝杆菌抗原蛋白Rv3872即PE35的重组卡介苗。方法:应用PCR技术扩增Rv3872基因,定向克隆入pET32a(+)并转化E.coli BL21(DE3)菌株,测序后用IPTG诱导蛋白表达,通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白进行检测及鉴定。用纯化蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。构建重组穿梭表达质粒pMV-3872,将重组质粒电穿孔进入卡介苗,对重组卡介苗进行诱导表达用SDS-PAGE和Western blot检测和鉴定目的蛋白。结果:表达融合蛋白的pET-3872质粒构建成功,重组蛋白经Western blot检测出特异性阳性信号。重组卡介苗BCG-3872构建成功,热诱导表达后经SDS-PAGE和Western blot,在培养上清中检测到目的蛋白。结论:成功构建了重组质粒pET32a(+),并在大肠杆菌中表达了PE35蛋白,有利于进一步研究Rv3872基因功能。本研究还对表达结核分枝杆菌蛋白PE35的重组卡介苗进行了鉴定,为进一步研究该重组卡介苗的免疫功能奠定了基础。
- 时欣欣鲍朗邱云青郭思
- 关键词：结核分枝杆菌重组卡介苗
- 结核分枝杆菌higBA基因对细菌应激反应及胞内感染免疫机制的研究
- 2022年
- 目的探究结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)higBA基因对细菌应激反应及胞内感染免疫的作用。方法从Mtb H37Rv基因组上扩增获得目的基因,与载体连接后电转化入耻垢分枝杆菌(Mycobacterium smegmatis,Ms)构建重组菌,对空载菌Ms_vec和重组菌Ms_higBA进行应激实验和Raw264.7小鼠巨噬细胞感染实验,检测细菌菌落形成单位(CFU)和细胞因子白介素(interleukin,IL)-1β、IL-6、IL-10、IL-12p40,干扰素(interferon,IFN)-γ,肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和诱导型一氧化氮合酶(inductible nitric oxide synthase,iNOS)的转录水平变化。结果成功构建Ms_higBA重组菌。应激实验结果表明higBA确能提高细菌在体外培养特定条件下的生存能力。胞内感染实验证明higBA能提高细菌在巨噬细胞内存活能力,影响细胞因子的转录水平。结论Mtb的higBA基因在细菌应激反应和胞内感染免疫中发挥了作用。
- 王欣妍罗涛陈宗海廖伟王怡鲍朗
- 关键词：结核分枝杆菌应激反应
- 人粒-巨噬细胞集落刺激因子和结核杆菌特异性抗原CFP10嵌合基因重组卡介苗的构建及鉴定
- 2010年
- 目的构建能共同表达人粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和结核分枝杆菌培养滤液蛋白10(CFP10)的重组卡介苗(recombinant BCG,rBCG)。方法运用分子克隆技术,通过SOE法(重叠延伸,Gene splicing by overlap exten-sion),扩增GMCSF-CFP10嵌合基因,将该基因定向克隆到穿梭表达质粒pMV361中,构建重组pMV GMCSF-CFP10质粒。用电穿孔法将重组质粒导入BCG菌构建rBCG,经热诱导后对rBCG表达产物作SDS-PAGE及免疫印迹分析。结果重组质粒pMVGMCSF-CFP10经PCR、酶切及测序证实构建成功,并在BCG中经热诱导成功表达了具有GMCSF-CFP10的嵌合蛋白。结论成功构建能表达GMCSF-CFP10蛋白的重组BCG,为发展新型结核病疫苗奠定基础。
- 杨晓玲鲍朗邓仪昊
- 关键词：CFP10卡介苗穿梭质粒
- 结核分枝杆菌Ⅱ型毒素-抗毒素系统的研究进展被引量：1
- 2020年
- 毒素-抗毒素系统(toxin-antitoxin system,简称TA系统)是广泛存在于自然界微生物中的遗传元件,与细菌应激反应或对抗生素产生耐受有关。结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)在人体中形成潜伏感染可能与细菌形成的特殊休眠状态有关,其可逃避宿主免疫系统的监视和清除;TA系统参与了细菌形成休眠体的过程。该系统共有6种类型,其中Ⅱ型TA系统广泛存在于致病性微生物中且数量最多;同时,研究发现Ⅱ型TA系统与微生物致病性密切相关,因而对其研究也较为深入。现就TA系统对结核分枝杆菌的致病力、应激反应以及对抗生素耐受的影响等研究作一概述。
- 王欣妍(综述)鲍朗
- 关键词：结核分枝杆菌细菌应激反应
- 结核病免疫应答中自噬现象的分子机制和意义被引量：4
- 2012年
- 越来越多的证据表明，自噬是结核免疫反应的重要组成部分。自噬可以杀灭结核分枝杆菌、调节促炎细胞因子的分泌、增加抗原递呈功能。自噬与其他抗菌途径如维生素D3、炎性体、泛素系统存在协同作用。另一方面，结核分枝杆菌可以调控巨噬细胞的自噬。目前，自噬已成为临床重要的诊疗靶点。其能诱导自噬的药物，可以作为佐剂治疗耐药性结核；能有效诱导自噬的疫苗，可能提供更好的免疫保护作用。
- 黄丹丹鲍朗
- 关键词：自噬结核分枝杆菌
- 结核CFP10/ESAT6抗原和人GM-CSF基因重组卡介苗的构建与免疫原性研究
- ＜正＞目的:构建共表达人GM-CSF和结核杆菌特异性抗原CFP10与ESAT6的重组卡介苗（recombinant BCG,rBCG）,分析rBCG引起的免疫反应。方法:扩增GMCSF-CFP10-ESAT6（GCE）融...
- 杨晓玲邓仪昊夏志扬黄丹丹鲍朗
- 文献传递
- 结核CFP10/ESAT6抗原和人GM-CSF基因重组卡介苗的构建与免疫原性研究被引量：1
- 2010年
- 杨晓玲邓仪昊夏志扬黄丹丹鲍朗
- 关键词：免疫原性研究基因重组重组穿梭质粒定向克隆
- 可表达结核分枝杆菌融合蛋白Ag85A-ESAT-6重组卡介苗免疫保护作用研究被引量：2
- 2012年
- 目的以Balb/c小鼠为动物模型,评价重组卡介苗新型结核病疫苗rBCG-Ag85A-ESAT-6(rBC-AE)的免疫保护效应。方法将重组卡介苗rBCG-AE免疫动物10周后,结核分枝杆菌H37Rv尾静脉注射进行感染攻击,分别于感染攻击后3、6和9周,通过观察肺组织大体病变、脾肺组织细菌载荷量计数、肺组织抗酸染色、HE染色结合肺组织病理变化,综合评价该疫苗诱导的免疫保护作用。结果 rBCG-AE组脾肺组织细菌载荷量在各时间点均显著低于阴性对照组(PBST组,P<0.01),但明显高于卡介苗(BCG)组(P<0.01)。rBCG-AE组肺组织病变在感染攻击后6～9周逐渐改善,但其病理打分在各时间点均明显高于BCG组(P<0.01)。各组肺组织大体病变与组织病理打分变化相似。结论重组卡介苗rBCG-AE仅能诱导产生与BCG疫苗相当甚至较低的免疫保护作用。
- 邓仪昊何红云张本斯鲍朗
- 关键词：重组卡介苗AG85AESAT-6免疫保护作用
