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O_(157)∶H_7型大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立被引量：10: 2008年; 根据GenBank中登录的肠出血性大肠杆菌保守基因序列Stx1、Stx2设计合成荧光定量PCR引物和探针,对荧光定量PCR的反应条件进行优化,建立了TaqMan荧光定量PCR检测方法。用建立的检测方法对临床分离病料进行了检测,并与常规PCR方法的检测结果做了对比。结果显示,建立的TaqMan荧光定量PCR方法的灵敏度达7.06×103CFU/mL,比常规PCR方法的灵敏度高106倍。用该方法和常规PCR对8种样品进行了检测,证实,该方法与常规PCR的阳性符合率为100%,具有较好的重复性。; 樊杰伏小平; 关键词：肠出血性大肠杆菌荧光定量PCR

金黄色葡萄球菌多药耐药基因norA的克隆及其原核表达被引量：1: 2005年; 按金黄色葡萄球菌多重耐药转运蛋白NorA的编码序列设计引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,扩增出norA基因中1 155 bp cDNA片段,将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到感受态大肠杆菌JM109中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道一致。从阳性克隆中提取质粒,经NdeⅠ和XhoⅠ酶切,回收1 155 bp目的片段,定向克隆到pET-28a(+)表达载体中,转化感受态大肠杆菌DH5α,提取质粒,再次转化到BL21(DE3)中,成功地筛选到阳性克隆。经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出norA基因的表达。; 于录邓旭明张文亮; 关键词：金黄色葡萄球菌克隆原核表达

成熟志贺毒素A亚单位(ShT-A)全长与截短片段在E.coli中的表达及多抗制备: 2005年; 根据G enB ank中Ⅰ型痢疾志贺菌ShT-A基因的核苷酸序列,设计合成了2对引物,分别进行PCR扩增,将PCR产物分别与pGEM-T连接构建了克隆质粒pGEM-TA1和pGEM-TA2。用B amHⅠ和K pnⅠ以及B amHⅠ和X hoⅠ双酶切pGEM-TA1和pGEM-TA2,均得到大小为895 bp的ShT-A基因片段,分别与pQE 30和pET 21a(+)原核重组表达载体连接,构建pQE 30-A2和pET-21A1原核重组表达质粒。工程菌M 15/pQE 30-A 2和BL-21/pET-21A 1经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,均没有目的蛋白表达。这表明全长ShT-A可能对E.coli细胞产生毒性作用。DNA s is软件分析ShT-A基因序列,发现在513 bp处有H indⅢ位点,以ShT-A上游引物的B amHⅠ和H indⅢ从pGEM-TA1切出1个513 bp的截短片段,重新插入表达载体pQE 30,经PCR和双酶切鉴定正确后,得到pQE 30-A513重组表达质粒,转化E.coliM 15经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳观察,在20 000处出现1条特异性的表达蛋白带,与截短ShT-A513相对分子质量相符。经薄层扫描分析,该截短片段的表达量约占菌体总蛋白的37.4%,主要为包涵体形式。免疫印迹结果表明,表达的重组ShT-A513蛋白同抗ShT-A513鼠多抗有特异性结合。; 喻华英高丰王景林; 关键词：抗体制备

主动外排系统介导的大肠杆菌多重耐药性的确证被引量：20: 2005年; 为检测和证实主动外排系统 (外输泵 )在细菌多重耐药机制中的作用 ,用四环素和水杨酸钠对大肠杆菌质控株进行了体外人工诱导 ,筛选出多重耐药株 ,再用能量抑制剂 CCCP(Carbongl cyanide m- chloropheyhydrazone)对耐药株和质控株进行了环丙沙星摄取抑制试验。结果 :在耐药株 ,其菌体内环丙沙星稳态浓度明显低于质控株 ;多重耐药株在有 CCCP存在时 ,菌体内环丙沙星的浓度随时间的延长而递增 ,而无 CCCP的抑制时 ,菌体内环丙沙星的浓度递增缓慢 ;在质控株 ,不论有无 CCCP存在 ,菌体内环丙沙星的浓度都随时间的延长而呈递增趋势 ,且保持较耐药株明显高的水平。结论 :体外诱导多重耐药大肠杆菌多重耐药性的产生。; 张海旺邓旭明任晓慧唐峰褚秀玲; 关键词：CCCP 大肠杆菌多重耐药性主动外排系统外输泵

鹿茸的软骨内骨化及其调控机理的研究进展被引量：7: 2006年; 对鹿茸软骨内骨化过程的组织学基础及调控机理进行了综述。鹿茸的骨化是在睾酮等一系列因素的影响下发生的软骨内骨化过程。这种骨化方式由膜内骨化转变而来,标志是角柄顶端软骨膜下出现连续的骨小梁。在整个生茸期内,软骨膜持续存在,通过附加增生来实现鹿茸的生长。发育到一定程度的肥大软骨细胞向细胞间质中分泌X型胶原纤维等,引起间质的钙化,进而骨组织替换软骨组织。; 赵丽红岳占碰张学明邓旭明; 关键词：鹿茸软骨内骨化

实时荧光定量RT-PCR检测鹿源致病性大肠杆菌aphA基因mRNA表达水平被引量：1: 2007年; 从临床分离的20株鹿源耐氨基糖苷类药物大肠杆菌中选取2株高度耐药菌,4株中度耐药菌和1株低度耐药菌,利用实时荧光定量RT-PCR方法检测编码磷酸转移酶aphA基因mRNA的表达水平。结果表明,2株高度耐药株Ct值(Cycle threshold,即反应管内荧光信号到达设定域值时所经历的循环数)最小,平均为23.40,但这2株之间Ct值也存在着差异;4株中度耐药株之间差异不大,Ct值平均为27.20;而1株低度耐药株Ct值最大,为31.53。这说明不同耐药程度的7株菌在mRNA表达水平上存在差异,且aphA基因的转录、表达水平与耐药水平成正相关。; 张晶王全凯王玮王丽艳尹秀玲韩春田邓旭明柳巨雄; 关键词：荧光定量RT-PCR MRNA

蛋鸡克雷伯氏菌的分离鉴定及其疫苗制备被引量：2: 2004年; 通过对临床采集的蛋鸡病料进行镜检、细菌分离培养、生化特性和致病性分析 ,分离出了克雷伯氏菌 ;同时制备了氢氧化铝灭活疫苗 ,并对疫苗的安全性、保护性及免疫性进行了检测。结果表明 ,利用当地发病鸡群分离的克雷伯氏菌制备的灭活疫苗性能良好、使用安全可靠。; 金天明; 关键词：克雷伯氏菌疫苗

大肠杆菌耐药机制的研究进展被引量：29: 2007年; 对大肠杆菌耐药的现状、特点、生化机制和分子机理及抑制剂方面的研究进行了综述,以便正确理解大肠杆菌耐药性的特点及其规律,从而为防治大肠杆菌耐药性的产生及合理用药提供理论依据.; 尹秀玲牛发良; 关键词：大肠杆菌耐药抑制剂

鸡大肠杆菌O78对喹诺酮类药物高耐药株的分子鉴定被引量：3: 2006年; 就临床分离的鸡大肠杆菌O 78对喹诺酮类药物的最低抑菌浓度(M IC)进行了测定,得到对喹诺酮类药物有不同耐药水平的细菌23株。根据G enB ank已公布的QRDR s序列,设计了分别扩增gyrA、gyrB、parC和parE基因的4对引物,以筛选的23株耐药菌DNA为模板,进行了PCR扩增。序列分析及A crA的W estern b lotting检测结果表明,临床分离的鸡大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药水平与G yrA和ParC的突变密切相关,而A crAB外输泵的表达水平无显著变化。提示临床分离的鸡大肠杆菌O 78的耐药水平与喹诺酮类药物的选择性压力有关,它诱导了DNA旋转酶和拓扑异构酶IV的基因突变,可能不能激活A crAB外输泵。; 李乾学邓旭明郭建顺周学章刘立国曾凡勤; 关键词：鸡大肠杆菌喹诺酮类药物耐药

临床分离大肠杆菌对氟喹诺酮类药物高耐药株Acr A的过量表达被引量：2: 2005年; Ciprofloxacin MIC was tested by the disc diffusion method in 25 Escherichia coli isolated from diseased livestock and fowl.There were 15 susceptible and intermediate(MIC≤1.0 mg/L) and 10 resistant(MIC≥32 mg/L) isolates.The expressing level of AcrA(an obligatory component of the AcrAB multidrug efflux system) was determined by Western-blotting,and gene mutations in gyrA and parC were determined by PCR.The results showed that the expression of AcrA protein was exceeded 170% and had gene mutations in gyrA and parC in 9 of 10 clinical isolates of Escherichia coli with high-level ciprofloxacin resistance but not in any of the 15 isolates for which the MIC was less than 1.0 mg/L.These results suggested that Topoisomerase and AcrAB efflux pump mediated high-level fluoroquinolone-resistance in Escherichia coli.; 李乾学邓旭明于录冯海华; 关键词：氟喹诺酮类药物

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