国家自然科学基金(30930085)
- 作品数：5 被引量：9H指数：2
- 相关作者：张学光黄子逸王雪峰朱耿超宋华峰更多>>
- 相关机构：苏州大学苏州大学附属第四医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金苏州市科技发展计划江苏省“青蓝工程”资助基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人可溶性PD-1在肝病患者血清中表达检测及临床意义被引量：6
- 2015年
- 目的利用自主研发的可溶性PD-1(soluble PD-1,s PD-1)检测试剂盒,检测肝病患者外周血中s PD-1表达水平并分析其临床意义。方法 40例初诊HBV感染患者,其中单纯HBV+患者13例、合并肝硬化患者17例以及合并肝癌患者10例。同时收集16例性别年龄匹配的健康人作为对照组。利用自主研发的PD-1 ELISA试剂盒分析s PD-1表达水平,并结合临床资料分析s PD-1与临床参数的相关性以及在鉴别诊断中的价值。结果 HBV感染患者体内s PD-1水平显著高于健康对照组(P<0.05);单纯性HBV感染组、合并肝硬化组以及合并肝癌组s PD-1水平(μg·L-1)分别为4.755±1.554、0.940 2±0.231 9和0.766 5±0.349 1。各肝病患者组之间s PD-1水平存在显著性差异(P<0.01);且单纯HBV感染组s PD-1水平显著高于合并肝硬化(P<0.05)以及合并肝癌组(P<0.01);肝硬化组和肝癌组两者之间s PD-1水平不存在显著差异(P>0.05)。s PD-1水平与临床检验指标如T-BIL、D-BIL、I-BIL、AST以及ALT呈线性正相关,有统计学意义(P<0.05);s PD-1与ALP、TP、H-ALB、UREA、Cr-s以及UA未见显著相关性(P>0.05)。ROC曲线分析发现,s PD-1在对健康照组与单纯乙肝患者鉴别中具有显著差异(P=0.002)。结论 s PD-1在单纯HBV感染患者体内显著升高,并在疾病进程呈现动态变化。提示其在肝病进展中可能发挥着重要的调控作用。
- 范德环张学光奚沁华张光波
- 关键词：肝病ELISA
- 人膜型LIGHT分子对Mo-DC成熟和T细胞激活的调节作用
- 2013年
- 利用我们建立的表达人膜型LIGHT分子的基因转染细胞(L929/LIGHT)探讨LIGHT/HVEM信号体外对Mo-DC诱导分化的影响,并进一步研究其对T细胞活化和抗凋亡的共刺激作用。从健康人外周血中分离的单核细胞经GM-CSF联合IL-4诱导形成Mo-DC,流式细胞术分析Mo-DC诱导过程中HVEM和LIGHT的表达;基因转染细胞L929/mock、L929/LIGHT、L929/CD40L或L929/LIGHT联合L929/CD40L,分别经丝裂霉素处理后,与GM-CSF联合IL-4诱导的Mo-DC共育,流式细胞术检测Mo-DC细胞表面成熟标志CD83和CD86的表达,利用FITC-Dextran分析Mo-DC对抗原的摄取能力;L929/LIGHT或L929/mock经丝裂霉素处理后,与抗人CD3单抗激发的T细胞共育,流式细胞术分析CD4+和CD8+T细胞表面活化标志CD25的表达,Annexin V和PI双标记分析T细胞的凋亡率。结果表明,高表达HVEM的单核细胞在诱导形成成熟Mo-D(iDC)的过程中下调了HVEM的表达,成熟Mo-DC(mDC)又上调表达HVEM,而LIGHT在Mo-DC分化过程中呈短暂的诱导性表达;基因转染细胞L929/LIGHT及其联合L929/CD40L能上调Mo-DC表面共刺激分子CD83和CD86的表达,并下调Mo-DC对FITC-Dextran的摄取能力;L929/LIGHT细胞能上调CD4+、CD8+T细胞CD25的表达,并增强T细胞抗凋亡能力。因此,基因转染细胞L929/LIGHT表面表达的人膜型LIGHT分子介导的LIGHT/HVEM共刺激信号对Mo-DC的诱导成熟和T细胞活化及抗凋亡能力具有促进作用。
- 曹丽娟宋华峰朱耿超黄子逸王雪峰张学光
- 关键词：T细胞
- 人HVEM-Fc融合蛋白的制备及其生物学特性
- 2013年
- 为建立CHO/HVEM-Fc基因转染细胞株,使之能稳定分泌HVEM-Fc融合蛋白,采用常规PCR法分别从本单位已构建的重组载体pGEZ-Term/B7-H1-Fc和pIRES2-EGFP/HVEM上扩增人IgG1(Fc)恒定区和人HVEM胞外段编码基因,XhoⅠ和Bam HI双酶切人IgG1(Fc)恒定区及真核表达载体pIRES2-EGFP,将两种酶切的目的产物连接为pIRES2-EGFP/Fc,同时将获得的人HVEM胞外段基因片段经XhoⅠ和NheⅠ酶切后插入上述pIRES2-EGFP/Fc构建成pIRES2-EGFP/HVEM-Fc重组载体,通过脂质体转染仓鼠卵巢癌CHO细胞,培养基中添加G418长期筛选并将分泌目的蛋白的基因转染细胞株亚克隆化。流式细胞术检测HVEM-Fc融合蛋白的表达,收集含融合蛋白的基因转染细胞培养上清,Protein G亲和层析柱对其进行纯化,Western blot定性分析。MTT检测HVEM-Fc融合蛋白体外对抗人CD3单抗联合基因转染细胞L929/LIGHT刺激的T淋巴细胞增殖的影响。结果表明,基因转染细胞CHO/HVEM-Fc分泌的HVEM-Fc融合蛋白能与L929/LIGHT细胞有效结合,纯化后的蛋白经Western blot鉴定出现特异性清晰条带,并且HVEM-Fc融合蛋白对L929/LIGHT协同刺激的T细胞体外增殖具有抑制作用。
- 黄子逸朱耿超王雪峰张学光
- 关键词：融合蛋白共刺激分子T细胞
- 一株鼠抗人HVEM单克隆抗体的研制及初步鉴定
- 2014年
- 研制鼠抗人单纯疱疹病毒侵入介质(HVEM)的功能性单克隆抗体,并对其生物学特性进行初步分析。以高表达人HVEM分子的基因转染细胞L929/HVEM作为免疫原,常规免疫小鼠并进行融合,以L929/HVEM作为抗体筛选细胞,L929/mock为对照细胞,筛选出分泌特异性鼠抗人HVEM单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用western blot、间接免疫荧光法和MTT增殖实验对单抗进行生物学特性的分析。结果显示,成功获得一株特异性鼠抗人HVEM的杂交瘤细胞株,命名为2B11。该单抗能够识别肿瘤细胞表达的HVEM分子,且在体外能够显著抑制HVEM介导的T细胞增殖和细胞因子的分泌,从而为进一步研究HVEM介导的免疫学效应提供了物质基础。
- 宋华峰齐嫄黄子逸吴妹英胥萍王雪峰张学光
- 关键词：共刺激分子单克隆抗体T细胞
- 负性共刺激分子B7-H4在结直肠癌及其微环境中的表达及临床意义被引量：3
- 2012年
- 负性共刺激分子B7-H4是新近发现的B7家族的新成员。为了检测人结直肠癌组织中肿瘤细胞及肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocyte,TIL)上B7-H4的表达以及分析巨噬细胞、T淋巴细胞及其亚群的浸润,进而探讨其相关临床意义,本课题采用免疫组化SP法检测98例人结直肠癌组织中肿瘤细胞及浸润淋巴细胞上B7-H4的表达以及巨噬细胞、T细胞及其亚群的浸润,统计学分析B7-H4的表达与患者临床病理参数、预后、肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated mac-rophage,TAM)以及CD3+T细胞、CD8+T细胞浸润程度的相关性。结果显示,结直肠癌组织中高表达B7-H4分子,而正常组织中基本不表达,并且在肿瘤细胞及浸润淋巴细胞中均检测到B7-H4的表达。统计学分析表明,浸润淋巴细胞中B7-H4的表达与患者年龄、有无淋巴结转移、是否为粘液腺癌有关(P<0.05),与患者总体生存率呈负相关(P<0.05),且B7-H4高表达组织较B7-H4低表达组织CD3+T细胞高度浸润例数显著增加(P<0.05);肠癌细胞中B7-H4的表达与患者肿瘤分期、淋巴结转移、有无远处转移以及Dukes分期有关(P<0.05)。综上所述,人结直肠癌患者的肠癌细胞及浸润淋巴细胞较正常细胞均异常表达B7-H4分子,CD3+T细胞的浸润程度与浸润淋巴细胞中B7-H4的表达呈显著相关而与肿瘤细胞上B7-H4的表达无关,而肿瘤细胞表达B7-H4与肿瘤分期、淋巴结转移、有无远处转移以及Dukes分期有关。上述结果提示肿瘤细胞表达B7-H4与浸润淋巴细胞表达B7-H4可能分别以不同机制参与了肿瘤的发生和进展,进一步分析肿瘤组织中B7-H4在不同细胞表达的生物学和临床意义具有重要的价值。
- 王辉孙静茆勇华东张学光
- 关键词：结直肠癌B7-H4浸润淋巴细胞肿瘤免疫
