国家高技术研究发展计划(2007AA02Z475)
- 作品数：5 被引量：3H指数：1
- 相关作者：张振龙张夕燕刘君许雪梅孙丽媛更多>>
- 相关机构：北京生物制品研究所中国医学科学院北京协和医学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人乳头瘤病毒预防性疫苗临床研究进展
- 2010年
- 人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）持续感染是妇女发生宫颈癌的重要原因之一.目前已鉴定出100多个HPV基因型,它们可分为高危型和低危型两类.在亚洲地区,HPV 16、18、58型与宫颈癌关系最密切.目前已上市的HPV预防性疫苗有Cervarix^TM和Gardasil疫苗.此文对HPV的基因结构和功能以及已上市的预防性疫苗的安全性和免疫原性做一系统阐述.
- 于世荣张振龙
- 关键词：安全性免疫原性
- 重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白在昆虫细胞sf9中的表达条件优化研究
- 2009年
- 目的确定利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达重组人乳头瘤病毒11型L1蛋白（HPV11 L1）的最适表达条件。方法通过间接免疫荧光法鉴定目的蛋白表达情况；用蛋白印迹法（Western blot）确定在不同感染复数（MOI）、不同表达时间条件下目的蛋白的最适表达条件。结果当sf9细胞密度为2．0×10^6／ml时，以MOI值为2．0的重组杆状病毒接种，悬浮表达96h收获为最适表达条件。结论确定了目的蛋白的最适表达条件，为进一步大量表达及纯化提供参考。
- 刘君张夕燕孙丽媛于世荣丁军颖许雪梅张振龙
- 关键词：荧光免疫测定L1蛋白昆虫细胞
- 重组人乳头瘤病毒16型L1蛋白在昆虫细胞中的表达及条件优化研究被引量：2
- 2009年
- 目的利用昆虫细胞一杆状病毒表达系统表达人乳头瘤病毒16型（human papillomavirus16，HPV16）L1蛋白，并确定含编码HPV16L1蛋白基因杆状病毒的扩增及其相应目的蛋白表达的最佳条件。方法在不同感染复数（MOI）、不同时间条件下扩增病毒，以蚀斑试验检测病毒滴度，研究获得最高滴度病毒的最适条件；通过对相应蛋白进行表达条件的优化，以蛋白印迹法比较蛋白表达量，确定目的蛋白表达的最佳条件。结果确定了扩增含编码HPV16L1蛋白基因杆状病毒及表达相应蛋白的最佳条件，即在sf9细胞系中，以MOI值为0．10接种病毒，扩增48h后收获病毒；以细胞密度为（2—3）×10^6／ml，MOI值为10．0接种病毒，悬浮表达72h收获目的蛋白。蛋白印迹法检测结果证实，表达的目的条带可与HPV16L1蛋白的单克隆抗体发生反应。结论建立了在昆虫细胞中表达HPV16L1蛋白的最适条件，为下一步的纯化及免疫原性研究奠定了基础。
- 孙丽媛刘君张夕燕丁军颖张振龙许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒16L1蛋白昆虫细胞
- 重组人乳头瘤病毒16型L1 VLP的初步纯化、鉴定及免疫效果的初步研究
- 2010年
- 目的 对昆虫细胞-杆状病毒系统表达的人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）16型L1蛋白病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）进行初步纯化研究,并在小鼠中检测纯化VLP的免疫原性.方法 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化方法纯化HPV16 LI VLP.对纯化得到的VLP分别进行蛋白印迹法、十二烷基硫酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）及电镜鉴定.然后用VLP免疫6周龄BALB/c小鼠.将小鼠随机分成6组（3个剂量组、2个佐剂组和1个对照组）,间隔2周免疫3次,3次剂量相同.取血分离血清,采用间接ELISA法检测抗HPV16 L1 VLP抗体滴度.结果 经蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化后,用SDS-PAGE鉴定纯化的HPV16 LI VLP,纯度达到90%.电镜观察可见完整的VLP颗粒.间接EUSA检测结果显示,剂量组及佐剂组小鼠血清中均可检测到特异性抗HPV16 L1 VLP抗体,且抗体滴度随针次和剂量的增加而增高.结论 采用蔗糖-氯化铯密度梯度超速离心纯化法得到的HPV16 L1 VLP可用于免疫学初步研究.通过昆虫细胞表达产生的HPV16 LI VLP 具有较强的免疫原性,能诱导小鼠产生强的体液免疫应答.
- 孙丽媛张婷于世荣陈祥鹏刘君李莉莉张夕燕张振龙许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒16L1蛋白病毒样颗粒
- 含编码人乳头瘤病毒18型L1蛋白基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的条件优化被引量：1
- 2009年
- 目的确定以昆虫细胞sf9F增含编码人乳头瘤病毒（human papillomavims，HPV）18型L1蛋白（HPV18L1）基因的杆状病毒以及相应蛋白表达的最佳条件。方法以对数生长期的sf9细胞在不同感染复数（M01）和不同时间条件下扩增病毒，以蚀斑试验检测病毒滴度，选择获得最高滴度病毒的最佳条件；再以sf9细胞在不同细胞密度、不同MOI值和不同时间条件下表达相应蛋白，以蛋白印迹法鉴定并比较不同条件下的蛋白表达量，选择获得最大量目的蛋白的最佳条件。结果对数生长期的sf9细胞在MOI值为0．50、扩增时间为48h时，所扩增的病毒滴度最高，可达3×10^8pfu／ml；在细胞密度为3×10^6／ml、MOI值为2．0、表达时间为72h时，所表达的蛋白量最大，约5mg/L。结论确定了含编码HPV18L1基因的杆状病毒扩增及相应蛋白表达的最佳条件。
- 丁军颖张振龙孙丽媛刘君张夕燕于世荣许雪梅
- 关键词：人乳头瘤病毒18L1基因杆状病毒昆虫细胞病毒样颗粒
