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辽宁省科学技术计划项目(2001225002-14)
辽宁省科学技术计划项目(2001225002-14)
- 作品数:1 被引量:8H指数:1
- 相关作者:赵彦艳孟丽荣鲁艳明张淑兰更多>>
- 相关机构:澳门理工学院中国医科大学更多>>
- 发文基金:沈阳市科学技术计划项目辽宁省科学技术计划项目更多>>
- 相关领域:医药卫生更多>>
- HER-2小分子干扰RNA对卵巢上皮性癌细胞侵袭和趋化能力的影响被引量:8
- 2007年
- 目的探讨 HER-2小分子干扰 RNA(siRNA)对卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞侵袭和趋化能力的影响。方法选用已知的干扰磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)的特异性位点作为阳性对照,采用蛋白印迹法检测卵巢癌细胞株 SKOV3细胞 GAPDH 蛋白和 HER-2蛋白的表达水平,以吸光度(A)值表示。然后在 HER-2基因的编码区内根据干涉位点的筛选原则,选择 HER-2 siRNA Ⅰ、HER-2siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ3段靶序列,体外转录合成 HER-2 siRNA。实验分为4组:空白对照组、脂质体组、非特异性转染组(非特异性 siRNAⅢ)、特异性转染组(HER-2 siRNAⅢ),以β肌动蛋白(β-actin)作为内参照,用荧光实时定量 PCR 和蛋白印迹法检测转染前后 SKOV3细胞 HER-2 mRNA 和蛋白表达的变化;细胞侵袭实验和细胞趋化实验检测转染前后 SKOV3细胞体外侵袭和趋化能力的变化。结果 GAPDH siRNA 能明显抑制 SKOV3细胞内源性 GAPDH 蛋白的表达,空白对照及加入不同剂量(0.5、1.0、1.5、2.0μg)的 GAPDH siRNA 转染 SKOV3细胞后,其 GAPDH 蛋白的表达水平分别为0.6855±0.0259、0.5698±0.0275、0.4542±0.0296、0.3341±0.0178及0.1816±0.0180,各剂量间比较,差异有统计学意义(F=198.126,P<0.01)。HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ均有抑制 HER-2蛋白表达的作用,HER-2 siRNAⅡ、HER-2 siRNAⅢ转染后 SKOV3细胞中 HER-2蛋白的相对表达水平(分别为0.2162±0.1589、0.1562±0.0067),分别与空白对照组、非特异性转染组及转染 HER-2siRNA Ⅰ的 SKOV3细胞(分别为0.3674±0.0350、0.3839±0.0188、0.3532±0.0197)比较,差异均有统计学意义(F=69.461,P<0.01)。不同剂量(0.5、1.0、1.5、2.0μg)的 HER-2 siRNAⅢ转染后,SKOV3细胞中 HER-2 mRNA 的相对表达水平比较,差异有统计学意义(F=174.53,P<0.01);HER-2siRNAⅢ转染后第1、3、6天,SKOV3细胞中 HER-2 mRNA 的相对表达水平分别为0.0506±0.0017、0.0266±0.0011及0.0154±0.0020,不同时间点比较,HER-2 mRNA 的相对表达水平呈明显下降趋势
- 张淑兰鲁艳明孟丽荣赵彦艳
- 关键词:基因,ERBB-2