国家重点基础研究发展计划(2002CB513100-7)
- 作品数：6 被引量：19H指数：3
- 相关作者：陈安民郭风劲李宗芳陈剑峰张帆更多>>
- 相关机构：华中科技大学西安交通大学医学院第二附属医院西安交通大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金陕西省科学技术研究发展计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- OPN反义真核表达载体的构建及其对肾癌细胞增殖侵袭的影响被引量：4
- 2009年
- 背景与目的:骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的过表达和多种恶性肿瘤的发展和转移密切相关,然而,在肾癌中OPN所扮演的角色尚未被清楚地阐明。为验证其作为肾癌基因治疗靶点的可行性,本研究通过构建获得OPN反义基因真核表达载体转染人肾癌ACHN细胞,观察其对人肾癌细胞增殖及侵袭的影响。方法:提取ACHN细胞总RNA,RT-PCR法扩增获得OPN目的片段,将其反向克隆到pcDNA3.1(-)质粒中构建OPN反义真核表达载体,并转染人肾癌ACHN细胞。采用半定量RT-PCR法和Western印迹法检测OPN mRNA及蛋白的表达情况;MTT法检测对细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测对细胞周期和凋亡率的影响;软琼脂克隆形成实验和Transwell法分别检测细胞的增殖和侵袭能力。结果:RT-PCR检测OPN mRNA表达量结果显示,转染重组质粒细胞中的OPN mRNA的表达量为0.29±0.04,与转染空质粒细胞的0.86±0.05和未转染细胞的0.88±0.04相比,差异有统计学意义(P<0.05)。MTT法检测结果显示ACHN/OPN细胞的生长速度受到抑制;流式细胞检测结果显示ACHN/OPN细胞生长停滞于S期且凋亡率明显升高;软琼脂克隆形成实验及Transwell实验结果显示细胞的增殖和侵袭能力下降(P<0.05)。结论:OPN在肾癌ACHN细胞的增殖和侵袭过程中发挥了重要作用,反义OPN基因能抑制肾癌细胞的恶性表型。
- 柳昊陈安民郭风劲黄晖解杰胡伟华
- 关键词：肾癌细胞反义基因基因转染
- RNA干扰抑制骨肉瘤MG-63细胞β-catenin的表达被引量：6
- 2011年
- 目的通过抑制Wnt信号通路核心蛋白β-catenin在骨肉瘤细胞系MG-63中的表达,探讨β-catenin对MG-63细胞的生长、细胞侵袭性以及耐药性等方面的作用。方法设计合成β-catenin的si RNA序列,LipofectamineTM2000转染入MG-63细胞。用RT-PCR和Western blot法检测干扰后β-catenin的mRNA和蛋白表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期,Transwell法检测细胞侵袭能力,CCK-8法检测细胞增殖,利用阿霉素检测细胞耐药性。结果干扰后,实验组细胞的β-catenin mRNA和蛋白表达较对照组和空白组显著降低(均P<0.05);细胞周期检测实验组与对照组和空白组比较差异无统计学意义(P>0.05);Transwell法结果显示实验组细胞侵袭能力较对照组和空白组显著下降(均P<0.05);CCK-8法检测显示实验组细胞增殖力较对照组和空白组略有降低,但差异无统计学意义(均P>0.05);多柔比星敏感性检测显示实验组较对照组和空白组细胞生长抑制率显著增加(均P<0.05)。结论特异性抑制β-catenin基因表达可抑制骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力,并增加MG-63细胞对化疗药物阿霉素的敏感性。
- 张帆陈安民郭风劲陈剑峰
- 关键词：骨肉瘤Β-CATENINRNA干扰
- 雄激素受体基因中（CAG）n微卫星多态性与原发性肝癌
- 2009年
- 雄激素受体（AR）基因第一外显子中含有遗传多态性的（CAG）n微卫星序列，此序列与多种疾病的发生、发展密切相关。本文就国内外AR（CAG）n微卫星多态性与原发性肝癌的关系研究的最新进展作一概述。
- 李君代志军李宗芳
- 关键词：雄激素受体CAG微卫星多态性原发性肝癌
- 肿瘤干细胞的研究进展被引量：2
- 2006年
- 越来越多的研究认为肿瘤中存在肿瘤干细胞,肿瘤干细胞是肿瘤发生、发展、侵袭、转移及耐药的决定性因素,是目前肿瘤研究的新方向。尽管其研究尚处于起步阶段,但已显示出了广阔的前景。文中就肿瘤干细胞的基础要领及其在白血病、脑肿瘤、乳腺癌、肝癌等方面的研究进展进行综述。
- 潘敦张澍李宗芳
- 关键词：恶性肿瘤干细胞耐药
- siRNA抑制β-catenin表达在骨肉瘤MG63细胞系中的作用被引量：2
- 2010年
- 背景与目的:β-catenin蛋白是WNT信号通路的核心蛋白,与多种肿瘤的发生相关,然而在骨肉瘤中所扮演的角色却仍未阐明。本研究通过抑制β-catenin基因在骨肉瘤细胞系MG63中的表达,探讨β-catenin对细胞的生长、凋亡及肿瘤侵袭等方面的作用。方法:设计合成β-catenin的siRNA序列,Lipofectamine^(TM)2000转染入MG63细胞。采用RT-PCR和Western blot检测β-catenin在干扰后的mRNA和蛋白表达情况,利用流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,CCK-8检测细胞增殖,transwell法检测细胞侵袭能力。结果:RT-PCR和Western blot检测β-catenin mRNA和蛋白表达,实验组较对照组显著降低。细胞周期检测,实验组较对照组无明显差异(P>0.05)。但凋亡检测,实验组较对照组显著增加(P<0.05)。CCK-8法检测实验组较对照组略有降低,但差异无统计学意义(P>0.05)。Transwell法结果显示,实验组侵袭能力显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:特异性干扰β-catenin基因表达可抑制骨肉瘤侵袭能力,并促进肿瘤细胞凋亡。
- 张帆陈安民郭风劲陈剑峰
- 关键词：骨肉瘤Β-CATENINSIRNA
- 二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌过程中脾脏巨噬细胞的变化被引量：5
- 2009年
- 目的观察在二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌过程中大鼠脾脏巨噬细胞（Mφ）结构与功能的变化。方法将SD大鼠50只随机分为正常对照组10只和实验组40只。实验组按DEN腹腔注射加慢性间断自由饮用DEN水溶液的方法制备肝癌肺转移模型，分别在造模的第8、13、16周随机处死大鼠，根据病理结果依次归为为肝硬化组（10只）、肝癌未转移组（10只）、肝癌转移组（10只）。应用透射电镜观察各组大鼠脾脏Mφ超微结构。贴壁法分离纯化Mφ，应用Vybant吞噬检测试剂盒、噻唑蓝（MTT）比色法、Rat肿瘤坏死因子（TNF）-αElispot试剂盒、DQ^TM ovalbumin试剂盒检测脾脏巨噬细胞活力和吞噬、代谢、分泌及抗原呈递功能。结果Mφ超微结构：肝硬化组和肝癌未转移组Mφ较正常组Mφ表面突起增多，细胞器增多；肝癌转移组Mφ表面突起减少，细胞器较少。Mφ吞噬指数：与正常对照组（75．6±1．7）比较，肝硬化组（84．7±1．9）升高（P〈0．05）；肝癌未转移组（89．5±3．1）显著升高（P〈0．01）；肝癌转移组（36．0±2．6）显著降低（P〈0．01）。Mφ代谢率：与正常对照组（1．48±0．17）比较，肝硬化组和肝癌未转移组代谢率（1．53±0．15、1．56±0．14）增高（P〈0．05），肝癌转移组（1．12±0．29）代谢率降低（P〈0．05）。TNF—α分泌值与正常对照组（626．6±24．6）比较，肝硬化组和肝癌未转移组（分别为741．0±52．9、1126．2±174．5）升高（P〈0．05），肝癌未转移组增高更为显著（P〈0．01），肝癌转移组（313．8±50．8）显著降低（P〈0．01）。抗原呈递阳性细胞比率（％）：与正常组（16．45±1．86）比较，肝硬化组和肝癌未转移组（分别为24．03±1，87、27，95±2．63）显著升高（P〈0．01）；肝癌转移组（10．46±2．16）显著降低（P〈0．01）。结论在肝硬化及肝癌早期，�
- 潘敦张澍李宗芳黄辰周蕊刘仲伟
- 关键词：肝细胞脾脏巨噬细胞
