浙江省科技计划项目(2006C33025)
- 作品数：5 被引量：8H指数：2
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- 间接ELISA检测弓形虫感染鼠NTPase-Ⅱ抗体的研究
- 2009年
- 目的建立检测小鼠血清中刚地弓形虫NTPase-Ⅱ特异性IgGI、gM抗体的间接ELISA法,探讨用于弓形虫感染早期检测的应用价值。方法以刚地弓形虫NTPase-Ⅱ融合蛋白为包被抗原建立间接ELISA法,动态检测刚地弓形虫实验感染鼠血清NTPase-Ⅱ特异性IgGI、gM抗体变化。试验设脑囊虫病、血吸虫病及肺吸虫病病人血清对照。结果小鼠血清中的抗NTPase-Ⅱ抗体IgM于弓形虫感染后第3 d开始出现阳性反应,IgG抗体于感染后第7 d开始出现阳性反应,脑囊虫病、血吸虫病及肺吸虫病病人血清特异性IgG阳性率分别为0、1.92%和0。结论间接ELISA检测弓形虫感染鼠血清NTPase-Ⅱ抗体的敏感性和特异性较高,有望应用于人感染弓形虫的早期检测。
- 李丽宁沙丹谭峰潘长旺梁韶晖
- 关键词：弓形虫
- 弓形虫三磷酸核苷水解酶基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2008年
- 目的:克隆并分析我国刚地弓形虫三磷酸核苷水解酶(NTPase)的编码基因。方法:采用聚合酶链反应(PCR)扩增弓形虫RH株的NTPase基因,克隆入pGEM-TEasy载体,转化后挑取阳性克隆进行酶切与测序鉴定,并对获得的NTPase基因及推导的氨基酸序列进行生物信息学分析。结果:PCR扩增得到特异的弓形虫NTPase基因序列,测序结果表明,获得的弓形虫NTPase-Ⅱ基因全长1812bp,编码的603个氨基酸与Genebank报道的氨基酸序列同源性为100%。经DNAStar预测NTPase-Ⅱ存在6个潜在抗原表位。结论:成功克隆出序列正确的弓形虫NTPase-Ⅱ基因,为其相关研究奠定了基础。
- 沙丹谭峰梁韶晖潘长旺
- 关键词：弓形虫克隆
- 弓形虫三磷酸核苷水解酶基因克隆、表达与鉴定被引量：7
- 2007年
- 目的对刚地弓形虫三磷酸核苷水解酶基因(NTPase)进行克隆、表达和鉴定。方法采用PCR扩增刚地弓形虫RH株的NTPase基因,克隆入pGEM-TEasy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,并转入大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3)中进行诱导表达。用镍-次氮基三乙酸亲和层析柱纯化重组质粒pBAD-HisB-NTPase表达产生的含组氨酸的重组蛋白,用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹(Western blotting)分析蛋白表达产物。结果PCR扩增得到特异的刚地弓形虫NTPase-Ⅱ基因序列,经测序鉴定无基因突变。SDS-PAGE结果表明NTPase-Ⅱ基因在E.coliBL21(DE3)中获得高效表达,其融合蛋白相对分子质量(Mr)约70000,与理论值相近。Western blotting分析结果显示,纯化的重组蛋白可被弓形虫感染的鼠血清及鼠抗重组蛋白血清识别。结论所克隆表达的弓形虫NTPase-Ⅱ重组蛋白具有良好的抗原性。
- 沙丹谭峰潘长旺梁韶晖
- 关键词：弓形虫融合蛋白抗原性
- 弓形虫三磷酸核苷水解酶-II的克隆、表达及初步应用被引量：2
- 2008年
- 目的探讨弓形虫RH株速殖子NTPase-II重组蛋白的免疫反应性及其在抗体检测中的应用。方法通过PCR获得NTPase-II基因,克隆入pGEM-T Easy载体,经酶切与测序鉴定后亚克隆至表达质粒pBAD-HisB,构建原核表达重组质粒,在大肠杆菌中以包涵体形式获得高效表达。SDS-PAGE和Western-blot分析蛋白表达产物。用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步建立检测抗NTPase-II抗体的间接ELISA方法。结果PCR扩增得到特异的弓形虫NT-Pase-II基因序列,经测序鉴定无基因突变。重组质粒诱导表达产物相对分子量约70kD,与理论值相符。经Western-blot证实,重组蛋白可刺激机体产生相应的抗体。具有良好的抗原性和免疫原性。用表达的重组NTPase-II蛋白初步建立了用于NTPase-II抗体检测的间接ELISA方法。结论重组NTPase-II蛋白具有较强免疫原性,可作为诊断抗原用于急性弓形虫感染诊断试剂的研发。
- 谭峰沙丹李丽宁潘长旺黄慧聪梁韶晖诸葛青云秦茜
- 关键词：弓形虫RH株速殖子间接ELISA
- 刚地弓形虫三磷酸核苷水解酶的研究进展
- 2007年
- 刚地弓形虫是一种广泛寄生于人和温血动物的机会致病性原虫，随着在免疫功能低下人群中感染率的逐渐增加，它对人类的危害也日益受到重视。弓形虫三磷酸核苷水解酶（NTPase）是弓形虫利用宿主细胞补救合成嘌呤途径中不可或缺的关键酶。近年来，对NTPase的分子生物学特点和化学特性均有了较深入的研究，该文综述了弓形虫NTPase的定位、分子特性及生理功能等方面的研究进展。
- 沙丹梁韶晖谭峰潘长旺
- 关键词：弓形虫
- 弓形虫三磷酸核苷水解酶II(NTPaseII)重组蛋白及其单抗的制备与应用
- NTPase II是广泛分布于弓形虫速殖子表面的一种主要特异性抗原,对虫体在宿主细胞内的寄生和繁殖都具有重要的作用。材料与方法扩增刚地弓形虫RH株的NTPase II基因,构建高效原核表达载体p BAD-His B-NT...
- 梁韶晖谭峰沙丹李丽宁潘长旺
- 文献传递
