上海市自然科学基金(11ZR1449600)
- 作品数：3 被引量：12H指数：3
- 相关作者：程劲田军刘楠梅张金元黄健更多>>
- 相关机构：中国人民解放军第二军医大学解放军第四五五医院更多>>
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- 促红细胞生成素对骨髓间充质干细胞移植修复小鼠急性肾损伤的作用机制被引量：3
- 2012年
- 目的:构建缺血再灌注(I/R)诱导的急性肾损伤(AKI)小鼠模型,经尾静脉注射行骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)移植,观察外源性促红细胞生成素(EPO)对BM-MSCs移植修复AKI效应的调控,并探讨基质细胞衍生因子1(SDF-1)/CXCR4轴在调控中的作用。方法:C57BL/6小鼠100只,随机分为正常对照组、模型组(AKI组)、BM-MSCs移植组、EPO干预组、EPO干预+BM-MSCs移植组,移植BM-MSCs采用5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记。建模后1d、3d、7d、14d处死部分小鼠,检测血清尿素氮(BUN)及肌酐(SCr)水平,观察肾组织病理变化,行急性肾小管损伤程度评分(ATN评分),免疫组织化学观察移植后其BM-MSCs在小鼠肾组织的分布,Western印迹法检测损伤肾组织中SDF-1水平。结果:与BM-MSCs移植组及EPO干预组比较,EPO干预+BM-MSCs移植组小鼠BUN、SCr及ATN评分降低幅度更大,至移植后第14d小鼠的BUN、SCr水平甚至接近正常对照组。免疫组化显示BM-MSCs移植组小鼠肾脏中可检出BrdU+细胞分布,以术后第7天最多(11.32%±1.38%),在此基础上联合EPO干预可增加肾组织中BrdU+阳性细胞比例。AKI建模后肾组织SDF-1水平升高,建模后7d达高峰,EPO干预可显著增加SDF-1的表达。结论:EPO干预可增加BM-MSCs移植后受损肾组织中移植细胞数量,增强AKI的修复作用,其中肾脏中促干细胞归巢因子SDF-1表达增加为其可能机制之一。
- 刘楠梅田军韩国锋程劲黄健张金元
- 关键词：骨髓间充质干细胞急性肾损伤促红细胞生成素基质细胞衍生因子1
- 红细胞生成素对急性肾损伤微环境下骨髓间充质干细胞定向趋化的影响被引量：7
- 2013年
- 目的观察骨髓间充质干细胞（BMSC）在体外模拟的急性肾损伤（AKI）微环境中的迁移特点，明确红细胞生成素（EPO）干预对BMSC迁移的影响，并探讨其可能机制。方法肾小管上皮细胞（RTEC）于低氧一复氧（HR）环境中各培养12h获得HR—RETC，体外模拟AKI。采用Transwell体系将BMSC与RTEC共培养。实验分7组：对照组（①组单纯BMSC培养）、BMSC．RTEC共培养组（②组）、BMSC-HR-RTEC共培养＋不同浓度EPO干预组（③组-⑦组，EPO浓度：0、1、5、10、50IU／ml）。共培养48h后检测各组BMSC迁移数量，Western印迹法分别检测下室RTEC内的基质细胞衍生因子1（SDF-1）表达及上室BMSC的磷酸化（P）MAPK、MAPK水平，ELISA法检测RTEC培养上清中的SDF．1浓度。结果BMSC向HR—RTEC培养室的迁移数量增加，EPO干预可放大此效应，以10IU／ml时最强[与③组比较，（46．67±7．37）个，HP比（19．00±2．37）个／HP，P〈0．051。③组HR-RTEC的细胞内SDF-1表达水平（0．37±0．01比0．19±0．01，P〈0．05）及培养上清中SDF-1浓度[（61．64±4．88）μg/L比（35．26±8．78）μg，L，P〈0．05]均高于未处理RTEC（②组），EPO干预可进一步增加其水平，以10IU／ml时最强[（⑥组与③组比较：（173．53±14．66）上班比（61．64±4．88）μg／L，P〈0．05]，并伴有BMSC内MAPK磷酸化增强。结论体外模拟的AKI微环境对BMSC有定向趋化作用，EPO干预可增强其趋化效果，其机制可能与SDF-1水平增加及SDF-1-CXCR4轴下游的信号蛋白MAPK的磷酸化有关。
- 刘楠梅梅长林张金元田军程劲王巍巍
- 关键词：骨髓间充质干细胞红细胞生成素肾小管上皮细胞
- CXCR4基因修饰对骨髓间充质干细胞向急性肾损伤微环境定向迁移的放大效应及机制被引量：4
- 2013年
- 目的:低氧/复氧预处理肾小管上皮细胞(HR-RTECs)体外模拟急性肾损伤(AKI),与CXCR4基因修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)共培养,观察该共培养环境下CXCR4基因修饰对BMSCs定向迁移力的影响,探讨其可能机制,并以动物模型进一步验证。方法:Gateway技术构建含CXCR4目的基因的质粒[绿色荧光蛋白(eGFP)为示踪基因)],同时构建仅含eGFP的对照载体,以携带上述质粒的慢病毒为载体转染BMSCs合成CXCR4-BMSCs和null-BMSCs,检测转染细胞活力、分化潜能及CXCR4在转染细胞中的表达。RTECs于HR环境中各培养12h获得HR-RETCs。实验共分四组,将BMSCs、CXCR4-BMSCs、null-BMSCs分别与HR-RTECs共培养,BMSCs与RTECs共培养作为对照。培养48h后检测各组BMSCs的定向迁移能力,ELISA检测RTECs培养上清中基质细胞衍生因子1(SDF-1)浓度,Western印迹检测BMSCs内pAKT、pMAPK水平。构建AKI小鼠模型,随机分为BMSCs移植组、CXCR4-BMSCs移植组和null-BMSCs移植组,移植细胞均采用5溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记,移植7d后处死,免疫组化法检测移植细胞在肾组织的分布。结果:成功转染的BMSCs活力及分化潜能均无变化,CXCR4表达在CXCR4-BMSCs中明显增加。HR-RTECs模拟的AKI共培养环境可增强BMSCs的迁移能力,空载体转染对BMSCs的迁移能力并无额外影响,但CXCR4修饰的BMSCs向AKI微环境的迁移细胞数进一步显著增加。HR-RTECs培养上清中的SDF-1浓度增加,与其共培养的三种BMSCs内的pAKT、pMAPK水平也均增加,且以CXCR4-BMSCs的pAKT、pMAPK水平最强。CXCR4基因修饰可显著增加AKI肾组织中BrdU+细胞(BMSCs)的比例。结论:AKI微环境对BMSCs有明显趋化作用,CXCR4基因修饰可进一步增强BMSCs的定向迁移能力,SDF-1/CXCR4轴为发挥作用的主要趋化因子/受体,其下游的AKT和MAPK通路为发挥作用的可能信号机制。CXCR4-BMSCs移植有望成为修复AKI的一种新的有效方法。
- 刘楠梅程劲黄健田军
- 关键词：复氧肾小管上皮细胞
