国家自然科学基金(30572063)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
- 相关作者：孙樱林冯海兰黄薇刘国庆赵铁强更多>>
- 相关机构：北京大学口腔医院北京大学首都医科大学附属北京口腔医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 小鼠重组釉蛋白基因稳定表达细胞系的建立
- 2008年
- 目的:构建小鼠重组釉蛋白基因的真核表达系统,并建立稳定表达该蛋白的细胞系。方法:取初生小鼠牙胚组织,提取RNA,用RT-PCR技术扩增釉蛋白基因片段,经双酶切后克隆至真核表达载体pcDNA3.1TM/myc-His(-)B上,转化大肠杆菌E.coli DH5α,中提质粒,将该重组表达质粒转染至HEK 293A细胞,用G418筛选出阳性克隆,并检测釉蛋白的表达水平。结果:通过测序表明,小鼠釉蛋白基因被成功地连接到了真核表达载体上。将该表达系统转染HEK 293A细胞后,进行Western Blot检测,证明其中有相对分子质量约32000的釉蛋白表达。结论:成功构建了小鼠重组釉蛋白真核表达载体,建立了稳定细胞系,为获得高纯度的釉蛋白,为进一步研究蛋白质功能奠定了基础。
- 娄雅莉孙樱林赵铁强刘国庆冯海兰
- 关键词：牙釉质蛋白质类基因表达细胞系小鼠
- 重组釉原蛋白的提取和纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:通过固相化金属亲和层析的方法,获得较高纯度的具有生物活性的重组釉原蛋白。方法:将重组表达质粒pcDNA3.1TM/Am/myc-His(-)B转染至HEK293A细胞中,用G418持续筛选,培养扩增。收集细胞,加入RIPA细胞裂解液,粗提蛋白。通过镍金属螯合层析的方法,纯化目的蛋白,并进行SDS-PAGE和Westernblot检测,检测蛋白纯化程度和产率。将釉原蛋白冻干,-80℃冻存。结果:SDS-PAGE及WesternBlot检测结果表明,蛋白粗提液中有大小约50KDa的重组釉原蛋白表达,经过HisTrapHPcolumn层析,目的蛋白形成了单一条带,纯化率为91.3%。结论:本实验通过固相化金属亲和层析的方法,获得了高纯度的重组釉原蛋白,为进一步研究蛋白质功能奠定了基础。
- 孙樱林冯海兰黄薇
- 关键词：釉原蛋白真核表达蛋白质纯化
- 通过真核细胞表达系统获得重组人釉原蛋白
- 2008年
- 目的构建重组人釉原蛋白基因的真核表达系统,并建立稳定表达该蛋白的细胞系。方法取26周龄引产胎儿的牙胚组织,提取总RNA,用RT-PCR技术扩增釉原蛋白基因片段,插入中间表达载体pGEM!-T。经双酶切后,再与真核表达载体pcDNA3.1TM/myc-His(-)B相连接,构成最终的表达质粒,将该重组表达质粒转染至HEK293A细胞,用G418筛选出阳性细胞克隆,并建立稳定表达釉原蛋白的细胞系。结果通过测序表明,人釉原蛋白基因被成功地连接到了真核表达载体上。将该表达系统转染HEK293A细胞后,进行Western Blot检测,证明有相对分子质量约32000的釉原蛋白表达。结论本实验成功构建了重组人釉原蛋白真核表达系统,建立了稳定细胞系,为获得高纯度的釉蛋白,进一步研究蛋白质功能奠定了基础。
- 孙樱林黄薇刘国庆冯海兰
- 关键词：人釉原蛋白真核表达稳定细胞系
